ORCEIN: KURULUŞ VE HAZIRLIK - KIMYA - 2025

Orceína esas orchilla veya archill, fruticose liken Rocella otu ve Lecanora Parella gibi çeşitli liken ekstrakte, mor renkli bir doğaldır. Rocella tinctoria, Afrika ve Amerika kıtasında bulunur, ancak Avrupa'da bulunan diğer türlerle değiştirilebilir.

Bu leke, eski çağlardan beri sitogenetik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu anlamda, asetik asit içeren orcein preparatı, 1941 yılında LaCourt tarafından tanıtıldı, bu yüzden başlangıçta LaCourt tekniği olarak adlandırıldı.

Orcein ve orcein çözeltisinin kimyasal yapısı. Kaynak: Wikipedia.org/ Oguenther at de.wikipedia (Dr. Guenther)

Benzer şekilde, basitliği ve düşük maliyeti nedeniyle, litmus (likenlerden elde edilen bir leke) üretiminde ve histolojik çalışmalarda (hücrelerin ve dokuların boyanması) kullanılmıştır.

Çeşitli çalışmalar bu boyamayı sırasıyla elastik lifleri ve kromozomları boyamak için amonyak pikrokarminat ve asetik asit gibi diğer kimyasallarla birlikte kullandı. Şu anda orcein, hayvanların ve bitkilerin sitogenetik çalışmalarında kullanılmaya devam etmektedir.

Yakın zamanda Silva ve ark. 2017, Şili'li yaşlı yetişkinlerde başparmak derisinin elastik liflerinde meydana gelen çeşitli değişiklikleri gözlemlemek için bu boyamayı başarıyla kullandı. Bu çalışma, başparmak liflerinin yaşlanmayla nasıl değiştiğini ortaya çıkardı.

Bu anlamda elastik liflerin 80 yaş üstü bireylerde kahverengimsi-siyah renkte olduğu; en gençken (60 yaşından itibaren) kırmızımsı kahverengi olarak görülürler. Sitoplazma ve diğer hücre yapıları sarımsı yeşile döner.

Bu, elastik liflerin mevcudiyetini ve durumunu, düzenleri, miktarları ve bütünlükleri açısından desteklemeye izin verdi. Öte yandan, orceinin, diğer koşulların yanı sıra, anevrizmaları tanımlamada ve arteriti teşhis etmede çok yardımcı olduğu da belirtilmiştir.

temel

Orcein, oksazin boya grubunun bir parçasıdır ve boyama, DNA için afinitesine dayanmaktadır. Boya, fosfat grubu ile temsil edilen bu molekülün negatif yüküne bağlanır. Bu nedenle kromozomlar mor boyanır.

Ancak hücrenin geri kalan yapıları farklı bir renk alır. Spesifik olarak, elastik lifler söz konusu olduğunda, bunlar kırmızımsı kahverengi renkli, maviden koyu mora kadar hücre çekirdekleridir, ancak kolajen leke bırakmaz.

Bu nedenle orcein, bazı sinek türlerinde kromatini lekelemek ve cinsiyeti ayırt etmek için kullanılır. Benzer şekilde, hepatit B antijenleri tarafından üretilen çekirdekler ve bazı karaciğer kapanımları boyanabilir.

Orcein solüsyonlarının boyamada belirli işlevleri vardır. Orcein A, hücre zarlarını yumuşatma, ölümlerine neden olma ve bölünme sürecini felç etme işlevine sahiptir. Bu arada orcein B, kromozomlara yapışarak boyamanın tamamlanmasından sorumludur.

Hazırlık

Aseto-orcein çözeltisi% 1

% 1'lik bir aseto-orcein çözeltisi hazırlamak için, 2 gram orcein 45 ml buzlu asetik asit, tercihen sıcak içinde çözülür ve oda sıcaklığında 55 ml damıtılmış su eklenir.

Daha sonra çözeltiyi homojenleştirmek için sürekli karıştırılır, daha sonra soğuyana kadar dinlendirilir. Son olarak 4ºC'de koyu kavanozlarda saklanır. Bu preparat Flores 2012 tarafından inek oositlerinin olgunlaşma aşamalarını gözlemlemek için kullanıldı.

Bu durumda örneğin aseto-orcein çözeltisi, daha önce asetik asit-etanol içinde sabitlenmiş doku üzerine 24 saat süreyle yerleştirilir. Bu boyama işlemi 30 dakika süreyle gerçekleştirilir ve ardından doku rengi açılır.

Aynı şekilde çok hücreli dokularda organellerin tanımlanmasında da kullanılabilir. Bu durumda, bir damla aseto-orcein çözeltisi ile yanak mukozasının bir lekesi boyanır, lam üzerine lamel yerleştirilir ve alt yapıları ile hücre çekirdeği hemen gözlenebilir.

Lakto-proponik çözelti orcein% 1

Ek olarak orcein, laktik asit ve propiyonik asit gibi diğer kimyasallarla da hazırlanabilir. Bunu yapmak için, bir gram orcein, 23 ml laktik asit ve 23 ml propiyonik asitten oluşan oda sıcaklığında önceden karıştırılmış bir çözelti içinde çözülür; 100 ml'ye kadar distile su ile hacmi tamamlamak.

Bu lakto-propiyonik orcein solüsyonu ile bitki hücrelerinin mayotik bölünmesinin farklı aşamalarını gözlemlemek mümkündür. Bu durumda, önceden sabitlenmiş ve hidrolize edilmiş numune, 15 dakika süreyle lakto-propiyonik orcein çözeltisine yerleştirilir ve ardından doku mikroskop lamlarına yayılır.

Duque 2016 poligenik kromozomlar üzerinde yaptığı çalışmada,% 65 asetik asit solüsyonu ile seyreltilerek asetik asit ve% 85 laktik asit içinde seyreltilmiş 2 gram orcein preparatı kullandı. Son olarak, Drosophila melanogaster'in tükürük bezlerindeki kromozomlara baktı.

Orcein A ve Orcein B

Numuneye ve neyin değerlendirileceğine bağlı olarak uygun orcein solüsyonunun hazırlandığına dikkat etmek önemlidir. Böylelikle, örneğin bölünen hücreleri gözlemlemek için orcein A çözeltisine 1N hidroklorik asit eklenir.

Orcein B solüsyonu% 45 asetik asitte çözülürken. Bu teknik, kısaltılmış bir boyama yöntemidir ve genellikle kromozomal yapıların boyanmasına yardımcı olarak kullanılır.

Son düşünceler

Yüzyıllardan beri, Lecanora, Parmelia ve Umbilicaria gibi likenler, büyük orcein kaynakları olan Arjantin gibi Amerika kıtası ülkelerinde bulunabilir. Ayrıca Kanarya Adaları gibi Avrupa bölgeleri de o zamanlar orkillanın büyük üreticileriydi.

Bu, aynı kıtanın Cenova gibi diğer şehirlerine ve İngiltere gibi ülkelere ihraç edilirken, Hollanda, orkilladan turnusol üretimini tekelleştirdi. Bu nedenle, bu liken daha sonra nesli tükenene kadar azaltıldı.

Bu, orkillanın, boya özelliklerine sahip diğer bitkilerle değiştirilmesine yol açtı. Bununla birlikte, sentetik boyaların ortaya çıkışı, bu orcein kaynaklı liken ticaretinin sona ermesine katkıda bulunmuştur.

Bu, 1812'de orcein sentezini tanımlayan ve orcinol adı verilen fenolik bir bileşik tarafından sentezlendiğini bilen Cocq sayesinde mümkün oldu. Ancak buna rağmen doğal orcein günümüzde hala tercih edilmektedir.

Bunun nedeni, orcinolün çok güçlü kokulu bir bileşik olması ve uzun süre maruz kalmasının, kokuları algılama yeteneğinin kaybı gibi sağlık riskleri taşıyabilmesi olabilir. Hipofizdeki bu hasarlar, maruz kalma arttıkça geçiciden kalıcıya da gidebilir.

Referanslar

1. Ortega L, Garcia R, Morales C. «Mikrobiyolojik boyaların (orcein ve kristal viyole) parçalanması için mantarlar tarafından üretilen lakkaz uygulaması.» Bilimde Gençler 2. 2015; 633-637. Mevcut: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína ve Elastic Fibers. Medicine (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Medicinabuenosaires.com adresinde mevcuttur.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Dactylogram Soldurulmuş Şili Bireylerinde Uçan Yüz Derisinin Histolojik Özellikleri. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Mevcut: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Patates üreme biyolojisi ve sitogenetik." Uluslararası Patates Merkezi (CIP). Teknik kılavuz. Research.cip.cgiar.org/ adresinde bulunabilir.
5. Flores F. «Bolivya yaylalarında inek oositlerinin (bos taurus) toplanması, kültürü ve in vitro olgunlaşması." . Altiplano Ulusal Üniversitesi, Puno-Peru; 2012. Şu adresten ulaşılabilir: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Politenik kromozomlar: Endoreduplication fenomenine bir bakış. Kolombiya Ulusal Üniversitesi, Medellín; 2016. Şu adresten ulaşılabilir: edu.
7. Camarena F. Cellular and Molecular Biology. Uygulama kılavuzu. Baja California Özerk Üniversitesi. 2017. Şu adresten ulaşılabilir: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Yabani ve yetiştirilen Anastrepha ludens (Loew) sineklerini normal suştan ("çift cinsiyetli") ve genetik olarak cinsiyetlendirilmiş suştan (Tapachula-7), ışınlanmış ve ışınlanmamış ayırma kılavuzu. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF ve Soto García DN Birleşmiş Milletler Gıda ve Tarım Örgütü. Roma, İtalya, 95 s.
9. Orcein. (2018, 30 Kasım). Vikipedi, bedava ansiklopedi. Danışma tarihi: 03:38, 31 Temmuz 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16 Temmuz). Certistain mikroskobu için orcein mikroskobu. Merckmillipore.com adresinde mevcuttur