XANTHOPROTEIN REAKSIYONU: MANTIK, PROSEDÜR, KULLANIM - KIMYA - 2025

Xanthoprotein Reaksiyon serbest formda olmasını ya da çözünür proteinleri, peptidleri veya polipeptidleri oluşturabilir, örneğin tirozin ve triptofan gibi aromatik amino asitler, varlığını veya yokluğunu belirlemek için kullanılan bir kimyasal işlemdir.

Ayrıca yapısında benzen grubu içeren kandaki toksik maddeleri tespit etmek için de kullanılmıştır. Bu test aynı zamanda xanthoprotein Becher reaksiyonu olarak da bilinir.

Pozitif ksantoprotein reaksiyonu Kaynak: Videodan alınmıştır: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Ksantoprotein reaksiyonu konsantre nitrik asit, ısı ve nötrleştirici bir alkali kullanır. Reaksiyon nötralize edildikten sonra çözelti sarıdan turuncuya dönerse, test pozitif kabul edilir. Gözlemlenen renklenme, benzen gruplarının nitrifikasyonundan türetilen azotlu bileşiklerin oluşumundan kaynaklanmaktadır.

Toplam protein miktarının ölçülmesi gerekiyorsa, Biuret gibi diğer protein belirleme yöntemlerinin kullanılması gerekir.

Ksantoprotein reaksiyonu, esas olarak kimyasal bileşimi bilinmeyen maddeler analiz edilirken kullanılır. Bu reaksiyon genellikle belirli bir maddenin veya ekstraktın kimyasal bileşimini belirlemeye yardımcı olacak bir dizi testin parçasıdır. Araştırmacılar tarafından yaygın olarak kullanılmasının nedeni budur.

Öte yandan, Becher ksantoprotein reaksiyonu, kandaki fenolik ve indol maddeleri tespit etmek için kullanılır ve bu, daha sonraki parametreler artırılmadan önce nefropatinin görünümünü tahmin etmeyi mümkün kılar.

temel

Reaksiyon temelde hem amino asitlerde hem de proteinlerde ve peptitlerde benzen grubunun varlığını tespit eder. Nitrik asit, kendisine sahip olan amino asitlerin benzen halkasına etki ederek fenolik nitro bileşikleri oluşturur.

Reaksiyonun gerçekleştirilmesi için ısıya ihtiyacı vardır, genellikle ortamı bulandıran ve süte çeviren bir çökelti oluşur. Çökelti beyaz veya sarı olabilir. Son olarak, rengi vurgulayan bir alkalileştirme adımı gerektirir. Bunun için% 40 sodyum hidroksit veya amonyak gibi bir baz kullanılır.

Isıtma işlemi sırasında güçlü bir sarı renk veya reaksiyon alkalileştiğinde koyu turuncu gözlenirse, reaksiyon pozitif olarak yorumlanacaktır. Algıladığı amino asitler esas olarak tirozin ve triptofandır.

Xanthoprotein reaksiyonu. Kaynak: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Fenilalanin durumunda, aromatik bir amino asit olmasına rağmen, bu amino asidin benzen çekirdeğinin basit bir reaksiyonda nitratlanması zordur, bu nedenle, ya negatif ya da zayıf bir pozitif reaksiyon yayacaktır.

Genel olarak, ksantoprotein testi, triptofanı spesifik olarak tanımlamak için kullanılan Hopkins-Cole testi ile desteklenebilir. Ksantoprotein testi pozitifse ve Hopkins-Cole testi negatifse, bu çözeltideki triptofanın varlığı, esas olarak tirozin varlığına işaret ederek dışlanır. Aynı şekilde, diğer şeylerin yanı sıra, tirozin tespiti için Millon reaksiyonu ile de tamamlanabilir.

Bu reaksiyon ayrıca üremi veya böbrek yetmezliği teşhisi için kan, plazma veya tuzdan arındırılmış serum numuneleri üzerinde de kullanılabilir. Bu durumda aranan, bağırsak çürümesinden kaynaklanan toksik maddelerin (fenolik ve indol) saptanmasıdır.

Bu maddeler benzen grubuna sahiptir ve bu nedenle, reaksiyona giren madde ne bir amino asit ne de bir protein olsa da, pozitif bir ksantoprotein reaksiyonu verir.

süreç

- Aromatik gruplarla amino asitlerin tespiti için ksantoprotein reaksiyonu

Temiz, kuru bir test tüpüne 1 ml test numunesi koyun.

- 0,5 ml konsantre nitrik asit ekleyin.

-Karışımı 70 ° C'de 2 dakika su banyosunda inkübe edin. Su banyosunu önceden belirtilen sıcaklıkta hazırlayın.

-Tüpü su banyosundan çıkarırken, çözeltinin süte döndüğünü ve belirli bir sarımsı beyaz renk aldığını gözlemlemek mümkündür.

- Çözelti, tüpün tabanına soğuk su damlatılarak soğutulur.

-Renkte bir değişiklik oluncaya kadar yavaş yavaş (damla damla)% 40 sodyum hidroksit çözeltisi eklenerek preparat alkali hale getirilir.

-Test pozitif ise sıvıların ara yüzeyinde koyu turuncu bir halka oluşacaktır.

-Reaksiyon negatif ise renk oluşumu olmaz.

- Kandaki fenolik ve indol maddeleri tespit etmek için ksantoprotein reaksiyonu

-5 cc venöz kan, plazma veya serum üzerine 5 cc% 20 trikloroasetik asit dağıtın, ikincisi en çok endikedir. İyice karıştırın ve süzün.

- 2 ml süzüntü alınır ve 0.5 ml nitrik asit ile karıştırılır. Daha sonra kaynayana kadar ısıtılır, bunun için tüp 30 saniye boyunca doğrudan çakmak alevi üzerine yerleştirilir. Su ile soğutulur ve% 1.5% 33 sodyum klorür eklenir.

Aşağıdaki şekilde yorumlanır:

Negatif sonuç: sarımsı renk.

-Pozitif (+) limon sarısı sonucu.

- (++) altın sarısı.

- (+++) koyu sarıdan kahverengiye

Ayrıca, çeşitli potasyum dikromat konsantrasyonlarından oluşan referans bir Autenrieth kolorimetrik ölçeği kullanılarak da yorumlanabilir. Bu,% 0.03874 stok çözeltisinden 10'da 10 seyreltme halinde hazırlanır. Her tüp bir yüzdeyi temsil eder.

Yorumlama ölçekleri

Antik ve modern olarak adlandırılan iki yorumlama ölçeği vardır. Normal değerler:

Eski tablo:% 75 ila 85 arası

Modern tablo:% 15 ila% 25 arası

Test tüpünün rengi iki standart tüpün ortasındaysa, iki ölçüm arasında ortalama yapılır.

Potasyum dikromat standart solüsyonu şu şekilde hazırlanır: 7,9 ml 10 N potasyum dikromat ölçülür ve bir volümetrik şişede 100 ml'ye tamamlanır. Seyreltmeler, Autenrieth kolorimetrik tablosunda gösterildiği gibi takip edilir.

Autenrieth kolorimetrik tablo. Kaynak: Vásquez A. Xanthoprotein reaksiyonu. İspanyol klinik dergisi. 1949; 35 (5): 326-327. Mevcut: Elsevier

Kullanım

Ksantoprotein reaksiyonunun kullanımı, bilinmeyen bir maddenin kimyasal bileşiminin bilinmesine yardımcı olan bir dizi biyokimyasal testin parçasıdır. Bu test, yapısında benzen grupları içeren proteinlerin tespitinde kimyasal analize katkı sağlar.

Bu reaksiyon, araştırmacılar tarafından ilgi konusu maddelerle ilgili çeşitli çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Bu anlamda, Vásquez-Jorge ve çalışma arkadaşları, mangrov istiridyesinden (Crassostrea rhizophorae) ekstrakte edilen sıvıların protein içeriğini araştırmak için bunu ve diğer reaksiyonları kullandılar.

Benzer şekilde Rojas ve diğerleri (2009), ricotta peynir altı suyu çökeltilerindeki glikomakropeptitleri analiz etmek için ksantoprotein reaksiyonu dahil bir dizi test kullandı.

Öte yandan, Becher xanthoprotein reaksiyonu, başka amaçlar için kullanılmak üzere Volhard tarafından modifiye edildi. Bu durumda, kandaki üre ve artık nitrojen seviyeleri yükselmeden çok daha erken (haftalar veya aylar) yükselebilen fenolik ve indol maddelerin tespiti için.

Bu toksik atıklar, gıdanın bağırsak çürümesinden oluşur.

Bu maddeler doğru şekilde elimine edilmediklerinde kanda birikirler, bu nedenle pozitif bir ksantoprotein testi böbrek yetmezliğinin erken başlangıcını veya bir üremi durumunu öngörebilir.

Rengin yoğunluğuna bağlı olarak ne kadar gelişmiş olduğunu belirleyebilirsiniz. Bu durumda test niceldir.

Sağlıklı insanlarda bu test, kandaki normal triptofan ve tirozin seviyelerine karşılık gelen hafif sarı bir renk verir.

Böbrek hastalarında ksantoprotein reaksiyonu, aşağıdaki maddelerin varlığından dolayı güçlü bir şekilde pozitiftir: diğerleri arasında fenol, indol, parakresol, aromatik oksiasitler.

Önlemler

Bu test eğitimli profesyoneller tarafından yapılmalıdır. Kullanılan reaktifler aşındırıcı asitler ve bazlar olduğundan tüm biyogüvenlik düzenlemeleri dikkate alınmalıdır.

Tesadüfen deriye veya tırnaklara birkaç damla nitrik asit düşerse, her iki yapı da protein içerdiğinden sararır. Ayrıca ciltte ve mukozada ciddi yanıklara neden olur.

Ciltle temas olursa, izlenecek protokol alanı hemen yaklaşık 20 dakika sabun ve suyla yıkamak olmalıdır.

Göze sıçrarsa bol temiz su ile yıkanmalı, gözleri açık tutmaya çalışılmalıdır.

Referanslar

1. "Xanthoprotein reaksiyonu" Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2 Eyl 2019, 17:49 UTC. 21 Ekim 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Mangrov istiridyesinin (Crassostrea rhizophorae) sıvı ekstraktlarının fizikokimyasal karakterizasyonu ve protein içeriği. Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Redalyc'de mevcuttur.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Trikloroasetik asit ile peynir altı suyunun çökeltilmesiyle GMP'nin izolasyonu ve performansı. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Ve.scielo adresinde mevcuttur.
4. Vásquez A. Xanthoprotein reaksiyonu. İspanyol klinik dergisi. 1949; 35 (5): 326-327. Mevcut: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Becher ve Andrewes'in idrar cerrahisindeki tepkileri. İspanyol Hastanesi Üroloji Servisi. Arjantin Üroloji Dergisi 395-404