HEMATOKSILEN-EOZIN BOYAMA: ÖZELLIKLERI, KULLANIMLARI, TEKNIKLERI - KIMYA - 2025

Hematoksilin - eozin boya hematoksilin ve eosin kombinasyonunu kullanarak bir boyama tekniğidir. Bu boya çifti, hematoksilin bazik bir boya görevi gördüğü ve eozin bir asit boyası olduğu için mükemmel bir ikili oluşturur.

Bazik veya asit boyaların tanımı, çözelti içinde elde edilen pH'a atıfta bulunmaz, bunun yerine sahip oldukları anyonik veya katyonik yükler veya kromofor grubunun konumu açısından hakim orandan söz eder.

Hematoksilen - eozin (HE) boyalı kirpikli kolumnar epitel Kaynak: Todd Straus ve Vladimir Osipov

Bu anlamda hematoksilin, bazik (katyonik) bir boya olarak kabul edilir ve bu nedenle hücrelerin çekirdeği gibi asit yapıları için bir afiniteye sahiptir. Bir asit (anyonik) boya olan eozin, hücre sitoplazması gibi alkali veya bazik yapılara afiniteye sahipken.

Bu nedenle, bu boya kombinasyonu, çekirdek ve sitoplazmaların net bir şekilde ayırt edilmesini sağladığı için doku boyama için yaygın olarak kullanılmaktadır. Çekirdekler koyu mavi veya mor ve sitoplazma pembesi boyar.

Hematoksilen-eozin boyama, kolay kullanımı ve düşük maliyeti nedeniyle histoloji ve sitoloji alanında en yaygın kullanılan boyama tekniklerinden biridir. Hücreleri, kalın sinir liflerini ve diğerlerinin yanı sıra parazitler, mantarlar ve bakteriler gibi dokulardaki belirli mikroorganizmaların varlığını görselleştirmek için kullanılır.

karakteristikleri

Hematoksilen

Hematoksilen nötr bir boyadır. Ancak rengi sağlayan bileşen (kromofor), molekülün katyonik veya bazik merkezinde yer alır. Bu nedenle asit yapıları için afinitesi. Kimyasal formülü C ₁₆ H ₁₄ O ₆ ve bilimsel adı 7,11b-dihidroindeno kromen-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol'dir.

Nükleik asitler açısından çok zengin oldukları için esas olarak hücrelerin çekirdeklerini boyar. Ayrıca viral kaynaklı sitoplazmik inklüzyonları da boyayabilir.

Hematoksilinin lekelenmesi için oksitlenmiş durumda olması ve bir metale bağlı olması gerekir. İkincisi, dokuya sabitlenmeye hizmet edecek, yani bir mordan görevi görecektir.

Hematoksilin oksitlendiğinde buna hematein denir. Oksidasyon, reaktifin oksijene maruz kalmasıyla (yaşlanma) veya oksidasyonuna yardımcı olan maddelerle (kimyasal oksidasyon) sağlanır.

Eozin

Eozin, kırmızı veya pembe lekeli bir boyadır. Suda çözünür bir versiyonu olmasına rağmen suda çözünmez. Genel olarak eozin alkol (95 ° etanol) içinde çözülerek hazırlanır.

Sitoplazmaları, kas liflerini, sitoplazmik organelleri ve kolajeni boyar, ancak hücre çekirdeklerini boyamaz. Bunun nedeni, negatif yüklü olması, bu nedenle pozitif yüklü yapılara yakınlığı olmasıdır.

İki tür eozin "Y" ve "B" vardır. Eozin "Y", sarı eozin olarak bilinir. Bilimsel adı tetrabromo fl uorescein ve kimyasal formülü C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Öte yandan, eozin "B" bazen mavimsi eritrosin B olarak adlandırılır. Bilimsel adı dibromodinitro fl uoresceindir ve formülü C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O _9'dur . Her ikisi de çok benzer ve birini veya diğerini kullanmak arasındaki fark gerçekten farkedilemez. Ancak, en popüler olan eozin "Y" dir.

Eozin, canlı bir hücre ile ölü hücre arasında ayrım yapma özelliğine sahiptir, çünkü hücreler öldüğünde sitoplazmasını lekelemek için zarı geçebilir ve eğer canlı kalırsa hücrenin sitoplazmasını renksiz bırakır.

Uygulamalar

Sinir lifi boyama

Kalın sinir lifleri boyanabilir ve hematoksilen-eozin ile tanımlanabilir. Bununla birlikte, ince sinir liflerini boyamak için kullanışlı değildir, çünkü ikincisini görselleştirmek için gümüş boyama gerekir.

Histolojik cilt bölümü lekeleri

Derinin boynuzsu tabakasının boyanmasında, etki eden boya eozindir, çünkü bu seviyede hücrelerin bir çekirdeği yoktur.

Derinin granüler tabakasında hematoksilin, granül hücrelerin içindeki keratohyalin granüllerini güçlü bir şekilde boyar. Aksine, cildin sivri tabakası hematoksilen ile zayıf bir şekilde boyanırken, bazal veya germinal tabaka oldukça lekelidir.

Eozin, tüm hücrelerin sitoplazmasını boyar ve rengin yoğunluğu katmandan katmana değişebilir.

Dışkı örneklerinin hematoksilen-eozin boyaması

Gómez ve ark., 2005 yılında hematoksilin-eozin boyamasının, akut diyare hastalığı olan hastalarda Entamoeba histolytica ve Entamoeba dispar'a bağlı amipli vakaları belirlemede taze görselleştirme yöntemine (salin ve lugol) göre daha etkili olduğunu gösterdi.

Ayrıca eritrofagositozu (eritrositleri yutmuş amipler) tespit etmede oldukça hassas olduğu gösterilmiştir.

Enfeksiyon teşhisi için histolojik bölümlerin boyanması

Walwyn ve diğerleri, 2004 yılında enfeksiyona neden olan mikroorganizmaları saptamak için histolojik lekelerin kullanımını önerdi.

Hematoksilen-eozin boyama kullanarak Clostridium, Actinomyces, spirillae veya Candida'nın neden olduğu enfeksiyonları görselleştirebildiler. Ayrıca, deri kesitlerinde Sarcoptes escabiei parazitinin varlığını ve çeşitli dokuların kesitlerinde sitomegalovirüs ve herpes tarafından viral inklüzyonları gözlemlemeyi başardılar.

Teknikler

Histolojik örnekler için

Histolojik bölüm boyama bir dizi adımdan geçer. İlk şey histolojik bölümü elde etmektir. Daha sonra kesikleri (ultra ince) bir mikrotom ile elde etmek için bu, mumlanmalıdır. Teknik aşağıdaki adımlardan oluşur:

1-Fazla parafinin giderilmesi : Bunun için ksilol veya Heme-D kullanabilirsiniz, 3-5 dakika daldırın.

2-Numunenin rehidrasyonu: Bu, numunenin azalan sırayla (100 °, 90 °, 70 °) farklı alkol konsantrasyonlarına (etanol) daldırılmasıyla elde edilir. Her durumda 7 dakika.

3-Fazla alkolün giderilmesi: Bunun için 7 dakika suya daldırılır.

4-Hematoksilin ile boyama: Numune, hematoksilen içeren bir tepsiye 6-10 dakika daldırılır. Maruz kalma süresi, numunenin boyutuna ve kalınlığına bağlıdır.

5-Fazla hematoksilinin giderilmesi: 5 dakika su ile yıkanır ve ardından asit alkol ile hızlı geçiş (10-20 saniye) yapılır. Daha sonra tekrar 5 dakika su ile yıkanır. Daha sonra 96 ​​° 'de 1 dakika etanol içine daldırılır.

6-Eozin ile boyama: Bunun için numune eozin tepsisine 5 dakika daldırılır.

7-Numunenin dehidrasyonu : Bunu yapmak için alkol tepsilerinden (etanol) geçer, ancak bu sefer artan sırada. (70 °, 90 °, 100 °). (Sırasıyla 5 saniye, 5 saniye, 1 dakika).

8-Numunenin berraklaştırılması: Bunun için 5-10 dakika ksilole maruz bırakılır ve Kanada balsamı veya benzeri bir malzeme ile kalıcı olarak mühürlenmek üzere kurutulur.

Aranan dışkı örnekleri için

Hastanın dışkısıyla slayt üzerine smear yapılır ve 5 dakika boyunca% 80 alkol ile sabitlenir. Tabaka 5 dakika boyunca hematoksilin içine daldırılır ve hemen su ile yıkanır.

Ardından hızla asidik alkole ve ardından amonyaklı suya daldırılır. Su ile yıkanır. Eozin içinde 5 dakika boyanır. Numune, önceki teknikte açıklandığı gibi kurutulur ve son olarak ksilen ile durulanır.

Reaktiflerin hazırlanması

- Hematoksilen

Bir litre damıtılmış suda 50 gram potasyum veya amonyum alüminyum sülfat çözülür. Tamamen çözüldüğünde 1 gram kristalize hematoksilin ekleyin. Tamamen çözüldüğünde 1 g sitrik asit, 50 g kloral hidrat ve 0.2 g sodyum iyodat ile birlikte eklenir.

Karışım 5 dakika kaynatılır, ardından soğumaya bırakılır ve kalan katı parçacıkları uzaklaştırmak için süzülür. Bu şekilde hazırlanan reaktif hemen kullanılabilir.

- Eozin

Alkol bazlı veya su bazlı hazırlanabilir.

Alkollü eozin

95 ° 'de 100 ml etanol içinde 0.5 gram eozin "Y" çözün. Sonra birkaç damla buzlu asetik asit ekleyin.

% 2 sulu eozin

1250 ml damıtılmış suda 25 gram suda çözünür eozin "Y" çözülür. Sonra birkaç damla buzlu asetik asit ekleyin.

Asit alkol

0,5 ml konsantre hidroklorik asit ölçün ve mutlak alkol ile 100 ml'ye tamamlayın.

Amonyaklı su

0,5 mL konsantre amonyak ölçün ve distile su ile 100 mL'ye tamamlayın.

Referanslar

1. Navarrete, G. Derinin Histolojisi. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Medigraphic.com'da mevcuttur
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Entamoeba histolytica / E. Akut diyarede hematoksilen-eozin ile boyamaya karşı taze amip tekniği ile dispar. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Medigraphic.com'da mevcuttur
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Anatomik örneklerde enfeksiyon teşhisi için histolojik tekniklerin kullanışlılığı. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Mevcut: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW Reaktifleri. Hematoksilen-eozin boyası. 2017, İspanya. Itwreagents.com adresinde mevcuttur
6. Eozin. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 7 Kasım 2018, 08:18 UTC. 4 Ağu 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoksilin." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 3 Mayıs 2019, 11:23 UTC. 4 Ağu 2019, 22:48 wikipedia.org