NEGATIF BOYAMA: MANTIK, TEKNIK, AVANTAJLAR VE DEZAVANTAJLAR - BIYOLOJI - 2025

Negatif boyama bazı mikroorganizmalar kapsülün varlığını vurgulamak için özel bir boyama için bir yöntemdir , klinik örnekler ya da saf kültürler ağırlıklı olarak, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae ve Cryptococcus neoformans-.

Negatif boyama uygulamak için yaygın olarak kullanılan doğrudan örnek beyin omurilik sıvısıdır. Bu teknik, menenjitin, özellikle Cryptococcus neoformans'ın varsayımsal teşhisi için hızlı bir alternatifi temsil etmektedir.

A. Hindistan mürekkebi ile boyanmış diş tartarı, B. Cryptococcus neoformans var gatti, nigrosin kullanılarak doğada oluştuğu için zayıf bir şekilde kapsüllenmiştir. C. Cryptococcus neoformans, nigrosin kullanarak parazitik formunda bulunan kalın bir kapsüle sahip gatti var. D. Hafif seyreltilmiş çini mürekkebi ile Cryptococcus neoformans. Wikimedia Commons / CDC'den Gisell Quinde, Wikimedia Commons / Fotoğraf Kredisi: İçerik Sağlayıcı (lar): CDC / Dr. Leanor Haley, Wikimedia Commons aracılığıyla

Aynı şekilde bu leke genel olarak balgam ve steril sıvıların üzerine uygulanabileceği gibi genç saf kültürlerden elde edilen suşlara da uygulanabilir. Bu teknik, uygulanması için nigrosin veya çini mürekkebi kullanır; bu nedenle, kısa sürede büyük teşhis değeri olan bilgiler sağlayan, uygulanması çok basit ve ucuz bir metodolojidir.

Bu anlamda, herhangi bir laboratuvar bu boyamayı yapabilir. Tabii ki, laboratuvar izole edilmiş veya tomurcuklanan Cryptococcus neoformans mayalarını tanıyabilen ve bunları örneğin sunabileceği lökositlerden ve artefaktlardan ayırabilen yetkin personele sahip olmalıdır.

temel

Nigrozin ve çini mürekkebi benzer şekilde çalışır; bu nedenle, iki maddeden biri birbirinin yerine kullanılabilir.

Bu tekniğe negatif boyama denir çünkü boyama tekniklerinin geri kalanına ters şekilde etki eder. Bunda boyanmamış kalan, aranan ya da görmek istediği yapıdır; yani mikroorganizmalar.

Bu nedenle boyama, smearın altının koyu renkle boyanmasına dayanır. Bu senaryoda, kapsüllenmiş yapılar açık veya renksiz renkte öne çıkacaktır.

Genel olarak, mayalar, kapsüle karşılık gelen berrak bir hale ile çevrelenmiştir. Bunun nedeni, çini mürekkebi ve nigrosinin, canlı mikroorganizmaların kapsülünü oluşturan polisakkarite nüfuz edemeyen maddeler olmasıdır.

Direkt numunede bulunabilecek lökositler veya kırmızı kan hücreleri gibi diğer yapıların da nüfuz etmediğini belirtmek gerekir.

Şimdi, mikroorganizmalar ölüyse, boya içlerine nüfuz edebilir, böylece bu boyama, mikroorganizmaların canlılığını değerlendirmek için de yararlıdır.

Teknik

malzemeler

Nigrozin

Nigrosine adını sahip olduğu siyah renge borçludur. Nitrobenzin, anilin ve anilin hidroklorit gibi organik bileşiklerin karışımının, söz konusu reaksiyonda bir katalizör (demir veya bakır) kullanılarak ısıtılmasıyla elde edilen sentetik bir maddedir.

Çin mürekkebi

Çin mürekkebi, Asyalılar tarafından yazı yazmak, sanat eserleri yapmak ve tek renkli resim yapmak için kullanılan bir maddedir. Çin kültüründe çok popüler.

Düşük reçineli ağaçları yakmanın ürünü olan pulverize odun kömürü ile karıştırılmış kalamar mürekkebinden elde edilir.

Karbon parçacıklarının çökelmesini önlemek için ona doğru kıvamı veren bir protein jelatin ile birlikte hidrokarbonların (bitkisel yağların) yakılmasından kurumdan da hazırlamak mümkündür.

Örnekleme için özellikler

- Oruç tutmayı gerektirmez.

- CSF, balgam veya steril sıvı numunesi en az 1 ml hacim içermeli ve derhal oda sıcaklığında laboratuvara aktarılmalıdır.

- CSF ve steril sıvı örnekleri uzman bir doktor tarafından alınmalıdır.

- Aynı zamanda, yukarıda belirtilen patojenlerle bağlantılı şüpheli suşun saf bir kültürü de olabilir.

Tekniğin doğrudan örneklerle yürütülmesi

- Örnekler santrifüjlenmeli, daha sonra süpernatant atılarak tortu alınır.

- Bir damla santrifüjlenmiş malzeme (tortu) ve bir damla çini mürekkebi veya nigrosin temiz bir slayt üzerine yerleştirilir.

- İyice karıştırılmalı ve bir lamel ile kapatılmalı, damlanın kenarlardan geçmeden ince bir film olarak yayılmasına izin verilmelidir.

- Daha sonra preparat mikroskop üzerine monte edilir.

- Preparat çok koyu ise su ile seyreltilebilir.

Tekniğin kültürden suşlarla yürütülmesi

- Çok küçük bir kısım genç bir kültürden bir tohum iğnesi ile alınır ve daha önce temiz bir slayt üzerine yerleştirilmiş bir damla çini mürekkebi içinde çözülür.

- Üstüne bir lamel yerleştirilir.

- Mikroskopta 10X ve sonra 40X'te gözlenir.

Ayrıca koloninin bir kısmını damıtılmış suda çözebilir ve oradan bir damla alıp çini mürekkebi ile karıştırabilirsiniz. Bu şekilde, hazırlık çok kalın olmayacak ve yapıları tek başına gözlemlemeyi mümkün kılacaktır; kalabalık varsa, iyi gözlemlenmeyecektir.

Başka bir metodoloji şudur:

- Slaydın bir ucuna süspansiyon kültüründen bir damla koyun.

- Aynı uca bir damla nigrosin koyun ve karıştırın.

- Başka bir slayt yardımıyla hematolojik yayma yapıyormuş gibi numuneyi yayın.

- Kurumasını bekleyin ve mikroskop altında inceleyin.

Mikroskop gözlemi

Alanın geniş bir görüntüsüne sahip olmak için önce 10X hedefle odaklanmalısınız. Daha sonra, açık alanlar olup olmadığı aranmalıdır; varsa, ayrıntıları görmek için 40X'e odaklanın.

avantaj

- Yürütmesi kolaydır.

- Ucuz bir tekniktir.

- Bu yöntem, yaymanın ısıya veya kimyasallarla sabitlenmesini gerektirmez; bu nedenle mikroorganizmalar bozulma olmaksızın gözlenir.

- Taze müstahzarın kurutulmasına gerek yoktur, bu nedenle hemen gözlemlenebilir ve hızlı sonuç verir.

Dezavantaj

Bir kez monte edildikten sonra, taze müstahzarlar derhal gözlemlenmelidir; kurumalarına izin verilirse, artık onları gözlemlemek mümkün değildir ve yenisi takılmalıdır.

Hindistan mürekkebi ile doku boyama

Hindistan mürekkebinin yerine getirebileceği bir başka işlev de patoloji laboratuvarlarındadır. Bu, tümörün rezeksiyon sınırlarını işaretlemek için cerrahi olarak çıkarılan doku örneklerine uygulanır.

İşaretli dokuya asetik asit püskürtülür. Bu, bir mordan görevi görür ve doku biyopsi hazırlığı için rutin işlemeye tabi tutulduğunda mürekkebin dışarı sızmasını önler.

Prosedür, dokunun alkol ve ksilen ile yıkanmasından ve ardından parafin mumunda ıslatılmasından oluşur. Bu işaret, patoloğa dokuyu gözlemlerken kılavuzluk ederek cerrahi rezeksiyon sınırının veya diğer ilgi noktasının nerede olduğunu gösterir.

Referanslar

1. «Nigrosina». Vikipedi, bedava ansiklopedi. 11 Temmuz 2017, 22:46 UTC. 6 Ocak 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Çin mürekkebi". Vikipedi, bedava ansiklopedi. 1 Ekim 2018, 03:08 UTC. 6 Ocak 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J ve işbirlikçileri. (2006). Özerk Extremadura topluluğunun İşçi Personeli. Özel gündem Cilt IV. Editoryal MAD. Seville-İspanya, s. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) Laboratuvar teknisyeni uzmanı, Galician Health Service (SERGAS). Özel konu gündem cilt 2. Editoryal MAD. Seville-İspanya, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA