BIURET: MANTIK, REAKTIFLER, PROSEDÜR, KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Biüre protein tayini uzun zincirli ve kısa zincir için kullanılan bir reaktiftir. Özellikle analitik kimya ve idrar tahlili alanında serum, plazma ve idrardaki toplam protein konsantrasyonunu araştırmak için kullanılır.

Bazı patolojilerde protein değerleri artırılabilir veya azaltılabilir. Hipoproteinemi semptomları genellikle böbrek hastalığı olanlarda, yetersiz beslenen hastalarda ve kronik enfeksiyonlu hastalarda ortaya çıkar.

Biuret reaksiyonu Pozitif Biuret testinde oluşan kompleksin kimyasal yapısı. Kaynak: Yikrazuul / flickr

Hiperproteinemi, diğerleri arasında multipl miyelom, sistemik lupus eritematozus, bakteriyel endokardit, bakteriyel menenjit, Waldenstrom makroglobulinemi gibi patolojilerde gözlenirken.

Öte yandan idrarda protein varlığı albüminin böbrek tarafından filtrelenmesinden kaynaklanmaktadır. Bu, incelenmesi gereken patolojik davranıştır.

Bu anlamda Biuret, diğer birçok örnek arasında serum, plazma ve idrardaki proteinlerin varlığını ölçmeye izin verdiği için çok kullanışlıdır.

Biuret bile, yeterince araştırılmamış örneklerde veya bilinmeyen bileşime sahip örneklerde proteinlerin varlığını ve konsantrasyonunu araştırmak için kullanılabilir. Bu nedenle araştırma alanında yaygın olarak kullanılmaktadır.

Biuret testi, peptit bağlarını tespit etmeye dayanır. Test, alkali bir ortamda gerçekleştirilir. Mor-mor bir kompleksin oluşması için numune en az iki peptid bağı içermelidir. Kompleks, bağların ve bakır iyonunun birleşmesiyle oluşur.

temel

Biuret reaktifi potasyum hidroksit, bakır sülfat ve sodyum ve potasyum tartrattan oluşur. Ortamın alkalileştirilmesi için sodyum hidroksit kullanılır, çünkü bu durum reaksiyonun gerçekleşmesi için gereklidir.

Proteinlerle reaksiyona giren maddeler bakır sülfat iken sodyum tartrat, çökelme eğilimi gösteren ve reaksiyona müdahale eden bakır hidroksit oluşumuna izin vermeme işlevine sahiptir.

Örnekte peptit bağı olan maddeler (polipeptitler veya proteinler) bulunursa, test pozitif olacaktır.

Çözelti mora döndüğünde bir reaksiyon pozitif olarak yorumlanır. Renk, CO-NH grubuna sahip en az iki peptit bağı ve kuprik katyonlar arasında bir kompleksin oluşturulmasıyla üretilir.

Menekşe kompleksi iki şekilde oluşturulabilir: biri metale bağlanan amid gruplarından proton kaybı (depronotasyon), diğeri ise serbest ve bağlanan oksijen ve nitrojen elektronlarının birleşimidir. bakır ile.

Bu reaksiyon, protein türüne bağlı olarak yoğunluk ve renk bakımından değişebilir.

Test, niteliksel veya niceliksel olarak gerçekleştirilebilir. Niteliksel formda olumlu veya olumsuz olarak rapor edilir. Kantitatif formdayken konsantrasyon, spektrofotometrik yöntemle ölçülebilir.

Reaksiyon 540-560 nm arasında okunur. Rengin yoğunluğu, numunedeki peptit bağlarının konsantrasyonu ile doğru orantılıdır.

Reaktifler

-% 20 sodyum hidroksit (NaOH)

-Kuprik sülfat pentahidrat% 1 (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Karıştırılmış sodyum ve potasyum tartrat tetrahidrat (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biuret reaktif stabilitesi

-Buzdolabında muhafaza edilmelidir.

süreç

teknik

-Analiz edilecek örnek veya standardın 100 µl'sini bir test tüpüne koyun.

- 2 ml sodyum hidroksit ekleyin.

-Çok iyi karıştırın.

-5 ml Biuret reaktifi ekleyin.

-Karıştırın ve oda sıcaklığında 25 dakika dinlendirin, üzerini kapatın ve ışıktan koruyun.

-Renk oluşumunu gözlemleyin ve spektrofotometrik olarak ölçün.

Kalibrasyon eğrisi

Sığır serum albümini, kalibrasyon eğrisini gerçekleştirmek için standart olarak kullanılabilir. Ondan çeşitli konsantrasyonlar hazırlanır. Örneğin% 25, ​​50, 75, 100, 125 ve 150.

Reaksiyon, bilinen tüm konsantrasyonlarla kurulur ve absorbans 540 nm dalga boyunda okunur. Bilinen konsantrasyonların verileri ve absorbans okumaları ile kalibrasyon eğrisi yapılır.

İşlenen numunelerin her tayininde veya partisinde bir standart monte edilmesi önerilir. Kalibrasyon standardı olarak sığır serum albümini 0.1-2 mg / ml kullanılabilir.

Spektrofotometrede 540 nm'de ölçümler yapılır.

Doğrusallık, 12 g / dl'lik bir konsantrasyona kadar karşılanır.

Girişim

Biuret testine müdahale eden maddeler

Çok sık olmamakla birlikte bu testin yürütülmesi sırasında bazı maddelerin müdahale edebileceği unutulmamalıdır. Örneğin, amonyak varlığı renk oluşumunu engelleyebilir.

Aynı şekilde, belirli pigmentler gibi diğer maddeler de aynı dalga boyunda soğurabilir.

Diğer yandan, peptid bağı dışındaki bir madde bakır tuzu ile bir kompleks oluşturduğunda girişim oluşabilir. Örnek: bazı karbonhidratlar ve belirli lipitler.

Analiz edilecek numunenin bir tür çökelti içermesi durumunda, testi monte etmeden önce filtre edilmeli veya santrifüjlenmelidir.

Biuret testine müdahale etmeyen maddeler

Test, aşağıdakilerin varlığından etkilenmez:

-Bilirubin 20 mg / dl konsantrasyona kadar.

750 mg / dl konsantrasyona kadar hemoglobin.

-30 g / L konsantrasyona kadar ekstrandan

4000 mg / dl konsantrasyona kadar trigliseridler.

avantaj

-Yapılması basit bir yöntemdir.

-Ekonomik bir test.

-Proteinlere özgüllüğü yüksektir.

-Küçük parazit.

Dezavantajları

Düşük miktarda proteini tespit etme hassasiyeti zayıftır. Fuentes ve diğerleri tarafından yürütülen çalışma, Biuret test yönteminin 1 mg / ml protein saptama sınırına ve 3 mg / ml miktar belirleme sınırına sahip olduğunu doğrulamaktadır.

Ancak, Amazonia Üniversitesi'nde yapılan diğer araştırmalar çok daha düşük değerler bildiriyor. Çalışma tarafından bildirilen saptama sınırı 0,020 mg / ml ve kantifikasyon sınırı 1,33 mg / ml'dir.

Uygulamalar

Biuret reaktifi veya testi, rutin ve araştırma laboratuvarlarında klinik ve klinik olmayan numunelerde proteinlerin belirlenmesi için kullanılır.

Artış veya azalma ile ortaya çıkan patolojiler

Pek çok patolojide, klinik örneklerde artmış veya azalmış olabilen toplam protein konsantrasyonunu belirlemek önemlidir.

Aşağıdakilerde yükselirler:

-Multipil myeloma,

-Sistemik lupus eritematoz,

-Bakteriyel endokardit,

-Bakteriyel menenjit,

Waldenstrom'un makroglobulinemisi ve diğerleri.

Aşağıdakiler azalır:

-Böbrek yetmezliği,

-Ağır derecede yetersiz beslenmeye sahip kişiler,

Diğerlerinin yanı sıra kronik enfeksiyonu olan hastalar.

Klinik örnekler

En yaygın klinik örnekler serum, plazma ve idrardır. Serum veya plazmadaki proteinlerin normal değeri 6.0-8.8 gr / dl'dir.

Yetişkinlerde idrardaki protein konsantrasyonu 150 mg / 24 saat rakamını geçmez.

İdrar protein / idrar kreatinin oranı normal değeri

Bebekler: <0,50 mg

2 yaş ve üstü çocuklar: indeks: 0.20 mg

Yetişkinler: <0.2 mg

Klinik olmayan örnekler

Biuret reaksiyonu, süt ürünleri, antivenom veya proteinlerin varlığını araştırmak istediğiniz bilinmeyen herhangi bir madde gibi birçok klinik olmayan numune türü için kullanılabilir.

Referanslar

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Mangrov istiridyesinin (Crassostrearizophorae) sıvı ekstraktlarının fiziko-kimyasal karakterizasyonu ve protein içeriği. Küba Kimya Dergisi, 26 (1), 66-74. 26 Haziran 2019'da http: //scielo.sld adresinden erişildi.
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J.Mango tohumlarından (Mangifera indica L.) bademlerin fonksiyonel karakterizasyonu Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 19 Haziran 2019, 16:37 UTC. 26 Haz 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. INS Ulusal Biyolojik Ürünler Merkezi'nde üretilen polivalent antibotropik serumdaki toplam proteinleri ölçmek için Biuret yönteminin standardizasyonu. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Repositorio.ins.gob.pe adresinde bulunabilir
5. Winer Laboratuvarları. Toplam proteinler. Serum ve plazmadaki toplam proteinlerin belirlenmesi için kolorimetrik yöntem. Wiener-lab.com.ar adresinde mevcuttur