NEUBAUER ODASI: TARIH, ÖZELLIKLER, KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Neubauer odası , hematometer veya hemasitometre, özel bir kalın cam plakadan oluşan bir laboratuar alettir. Bu kamera, kırmızı kan hücreleri, beyaz kan hücreleri ve trombositler gibi bazı hücre türlerini saymak için kullanılır, ancak sporları, spermleri, parazitleri vb. Saymak için de kullanılabilir.

3 bölgeden, sayma için bir merkezden ve iki destek bölgesinden oluştuğu için bazı çok tuhaf özellikler sunar. Her bölme, biri üstte diğeri altta olmak üzere iki sayım bölgesine veya artı işaretine sahiptir.

Neubauer odası. Kaynak: SantiBadia. Düzenlenmiş görüntü.

Bunların ızgara biçiminde birden çok bölümü vardır. Sayım alanları, her iki ızgaranın 4 köşesinde bulunan orta kareler artı merkez karedir.

Herhangi bir detay hücre sayısını etkilediğinden, kameranın montajı büyük bir özenle yapılmalıdır. Yapılabilecek pek çok hata var ancak bunlardan herhangi biri meydana gelirse kamera sökülmeli, temizlenmeli ve yeniden monte edilmelidir. Ana hatalar şunları içerir:

Hazneyi taşmak veya yetersiz doldurmak, hazneyi kurutmak, fazla sıvıyı gazlı bezle çıkarmaya çalışmak, hazneyi taşırken yatırmak, kirli veya ıslak hazneyi doldurmak, seyreltme veya numuneyi iyice karıştırmamak. Tüm bu hatalar gerçek olmayan bir değerle sonuçlanacaktır.

Tarih

Neubauer odası hassas bir cihazdır ve üretim süreci sıkı bir kalite kontrolünden geçer. Çeşitli sıvılardaki hücreler gibi mm ³ başına parçacıkların veya oluşturulmuş öğelerin hassas sayımı için oluşturulmuştur . Hassas grafiği elmas kalemle oyulmuştur.

Neubauer odası özellikleri

Tüm hazne, mikroskop sahnesine yerleştirilebilmesi için normal bir slayt boyutundadır.

Oda, üç merkezi dikdörtgen yüzeyden (a, b, c) oluşur. "B" bölgesinde, retikulum olarak da adlandırılan R bölgesi veya sayım bölgesi bulunur. "D" bölgesi ile ayrılmış, kameranın her iki yanında birer tane.

Neubauer Odası'nın grafik diyagramı. Kaynak: Hematoloji için Pratik Kılavuz. Venezuela, Carabobo Üniversitesi Biyoanaliz Okulu.

Her bir ızgara, oyulmuş sayım alanını içeren cilalı bir alandır. Yüzey alanı 9 mm ² olan bir kareden oluşur ve dahili olarak her biri 1 mm ² yüzey alanına sahip 9 kareye bölünmüştür . Burada dört köşe kareler 16 küçük kareler (0.0625 mm ayrılır ² alanında).

Bu ızgaralar, birbiriyle kesişen bir dizi milimetre çizgilerinden oluşur ve belirtilen ölçümlerle sınırlandırılmış mükemmel grafikli ızgaralar oluşturur. Bu çizgiler bir elmas uç ile oyulmuştur.

Geliştirilmiş Neubauer retikülü. Kaynak: Venezuela, Carabobo Üniversitesi Biyoanaliz Okulu Hematoloji Pratik kılavuzu.

Dört kenar, sayma alanına karşılık gelir. Bu kenarlarda veya köşelerde hücrelerin çoğu (kırmızı kan hücreleri ve lökositler) sayılırken, trombositler merkezi bölgede sayılır.

Merkez bölge daha fazla bölüme sahiptir, her biri 0,04 mm ² yüzey alanına sahip 25 kareye bölünmüş 1 mm ² kareden oluşur . Bunlar da 0.0025 mm alana sahip 16 ızgaraları ayrılır ² .

Geliştirilmiş Neubauer retikulumunun tanımı. a) Köşelerin karesi, b) merkez kare, c) merkez meydanın medyan karesi. Kaynak: Venezuela, Carabobo Üniversitesi Biyoanaliz Okulu Hematoloji Pratik kılavuzu.

"A" ve "c" bölgesi, hematometrik slayt veya hematimetre kapağı adı verilen özel bir örtü nesnesini yerleştirmek için destek görevi görür.

Folyo ile sayma yüzeyi arasındaki yükseklik 0,1 mm'dir. Sayım kutusu yüzeyinin ölçümlerinin yanı sıra hazne yüksekliği ve numune seyreltmesi de son hesaplamalar için gerekli verilerdir.

Uygulamalar

Hücre sayımı için kullanılır. 3 kan hücresi serisinin sayılmasına izin verdiği için özellikle hematoloji alanında faydalıdır; yani kırmızı kan hücreleri, beyaz kan hücreleri ve trombositler.

Bununla birlikte, örneğin türüne bağlı olarak sperm, spor, bakteri veya diğer önemli öğeleri saymak için başka alanlarda da kullanılabilir.

Nasıl kullanılır?

örnek hazırlama

Hücre sayımını gerçekleştirmek için genellikle önceki bir seyreltmeden başlatılır. Örnek: beyaz kan hücrelerini saymak için Turk sıvısıyla 1:20 oranında dilüsyon hazırlayın. Seyreltme, pipeti yüklemeden ve Neubauer haznesini monte etmeden önce iyice karıştırılır.

1:20 seyreltmenin saymak için yeterli olmadığı zamanlar vardır. Örneğin, belirli tipte kronik lösemilerden muzdarip hastalarda. Bu durumlarda 1: 100 gibi daha yüksek seyreltmeler yapılmalıdır.

Öte yandan, şiddetli lökopenilerde olduğu gibi sayı çok düşükse, numuneyi konsantre etmek için daha küçük seyreltmeler yapılabilir. Örnek: 1:10 dilüsyon yapabilirsiniz.

Yapılan değişiklikler hesaplamaları etkiler.

Neubauer hazne montajı

Neubauer odası, hematometrik slaydın orta alana yerleştirilmesiyle birleştirilir. Her ikisi de çok temiz ve kuru olmalıdır. Lamel yerleştirmek için kenarlarından alınır ve yavaşça kameraya bırakılır.

Bu, Thoma otomatik pipetinin veya pipetinin ucunu yükleme bölgesinin kenarında 35 ° açıyla yerleştirerek doldurulur. Sıvı sorunsuz bir şekilde boşaltılır ve yükleme alanı kapilerite ile doldurulur. Bu, iki artı işaretini yüklemek için her iki taraftan yapılır.

Retiküller aşırı yüklenmemeli ve sıvıları reddedilmemelidir. Yük tam olmalıdır. Dolgunun homojen bir şekilde yapılması yani hava kabarcığı olmaması önemlidir.

Hazne monte edildikten sonra 2 dakika dinlenmeye bırakılır, böylece hücreler dibe çöker ve görselleştirilmesi ve sayılması daha kolay olur.

Dinlenme süresinden sonra, gözlem için ışık mikroskobu sahnesine monte edilir. Önce 10X hedefle odaklanır ve gerekirse sonra 40X'e gider.

Görselleştirmeyi iyileştirmek için ışığın mikroskoptan geçişi azaltılır. Bunu yapmak için, kondansatör indirilir ve diyafram hafifçe kapatılır.

sayma

Beyaz kan hücrelerinin veya lökositlerin sayımı için, dört orta köşe karesinin tüm yüzeyi ve her retikulumun merkezi karesi sayılmalıdır.

Sayma, sol üst köşedeki karede başlar. İlk satırın ilk karesinden, yani soldan sağa, karşı uca ulaşana kadar başlıyorsunuz.

Orada aşağı iner ve diğer uca ulaşana kadar sağdan sola bakarsınız ve bu şekilde, her bir ızgaradaki hücreler zikzak bir şekilde sayılır. Her medyan karenin 16 ızgarası sayılır.

Bir hücrenin iki kez sayılmasını önlemek için, her ızgaranın sınır çizgileri üzerinde bulunan hücreler hakkında kurallar vardır. Sol ve üst satırlardaki hücreler sayılır ve sağ ve alt satırlardaki hücreler göz ardı edilir.

Operatörün, gözlenen hücre sayısı kadar cihaz tuşuna basması için bir manuel hücre sayacı mevcut olmalıdır. Sayaç kullanımı ile operatör, mikroskobik alandan yukarı bakmak zorunda kalmadan sayabilir. Sayımın sonunda, sayılan toplam hücre sayısını göreceksiniz.

Hesaplamalar

Hesaplamalar için birkaç yolla ilerleyebilirsiniz. Tek bir graticule sayılabilir veya her ikisi de sayılabilir ve her ikisinin de ortalaması alınır. Bu iki durumda, sayılan hücreler, bu durumda 40 olacak olan bir faktörle çarpılmalıdır. Böylece mm ³ başına toplam sayım ^{elde edilir} .

Ancak iki ızgara sayılır ve ortalama alınmazsa, farklı bir faktörle, bu durumda 20 ile çarpılmalıdır.

-Çoğaltma faktörü

Çarpma faktörünün nasıl hesaplandığı aşağıda açıklanmıştır.

Hesaplamalar için, seyreltme titresi, hazne yüksekliği ve sayılan alan dahil olmak üzere çeşitli veriler dikkate alınır.

seyreltme

Kullanılan standart dilüsyon lökosit sayısı için 1: 20'dir.

Hazne yüksekliği

Hazne ile kan hücresi tabakası arasındaki yükseklik 0.1 mm'dir.

Sayılan alan

1mm ² alanın 5 karesi sayılırsa , toplam sayım alanının 5mm ² olduğu anlamına gelir . Bu veriler, sayılan toplam hacmi elde etmek için odanın yüksekliğiyle çarpılmalıdır. Yani 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formüller ve hesaplamalar

Elimizdeki verilerle şöyle deniyor:

0,5 mm ³ ise --- sayılan hücre sayısı

1 mm ^3'te - olacak - X n ° hücre

X no. Hücre = (sayı sayılan hücre sayısı x 1) / 0,5 mm ³

Ancak seyreltme de dikkate alınmalıdır. Bu nedenle formül aşağıdaki gibidir:

(sayılan hücre sayısı x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Son olarak, özetlemek gerekirse, sayılan hücre sayısı 40 ile çarpılabilir. Böylece mm3 başına lökosit değeri ^{elde edilir} .

İki retikül sayılırsa, sayılan alan için veri değiştirilir, bu durumda bu 10 kare, yani 10 mm ^{2 olacaktır} . Ve 1 mm3'lük toplam sayılan hacim. Formül şöyle olacaktır:

(sayılan hücre sayısı x 1) x 20/1 mm ³

Bu nedenle, bu durumda çarpım faktörü 20 olacaktır.

hatalar

-Kamerayı yüklerken sıvı ile aşılır veya aşılırsa, kameranın yüksekliği değişecektir. Bu, sayının gerçek şeyden daha yüksek olmasına neden olur. Fazlalığı gazlı bez veya pamukla gidermeye çalışırsanız bu çok büyük bir hatadır. Bu eylem hücrelerin yoğunlaşmasına ve sayının artmasına neden olacaktır.

-Zayıf yüklenirse, sayı gerçek olandan daha düşük olacaktır.

-Kamera monte edilip kurumasına izin verilirse yanlış sonuçlar vereceği için artık saymak mümkün değildir.

-Örnek dilüsyonu hazneye yüklenmeden önce iyice karıştırılmazsa, hücreler homojen olarak dağılmayacağından okumada hata riski vardır. Bu nedenle, numunenin sırasıyla sıvının yüzeyinden mi yoksa tüpün altından mı alındığına bağlı olarak daha düşük veya daha yüksek hücre konsantrasyonu olacaktır.

-Kabarcıkların varlığı, retikuluma girmesi gereken sıvı miktarını azaltır ve hücrelerin doğru görselleştirilmesine ve dağılımına müdahale eder. Bütün bunlar sonuçları önemli ölçüde etkiler.

-Sayma sırasında, kaybolmamak için her büyük kare tamamlanıncaya kadar mikroskoptan yukarı bakmayın.

-Hatanın bir nedeni, montajdan sonra kameranın eğilmesidir. Bu nedenle mikroskobun aşaması dikkatlice yükseltilmelidir.

Öneri

Herhangi bir nedenle haznenin doldurulmasında bir anormallik tespit ederseniz, bu hazırlığı sökmeniz, hazneyi temizlemeniz ve sıfırdan yeniden monte etmeniz önerilir.

Artı işaretlerinin çizilmesini önlemek için kamerayı temizlerken çok dikkatli olun. Öte yandan, hematometrik slaydın hassas ve kırılgan olduğunu unutmayın. Yanlış kullanım onu ​​kırabilir.

Saymaya başlamadan önce hücrelerin iyi dağıldığından emin olun. Hücrelerin düzensiz dağılımı, zayıf numune karıştırma veya seyreltmeden kaynaklanır. Bu olursa, montaj tekrarlanmalıdır.

Hücrelerin iyi dağılıp dağılmadığını öğrenmenin bir yolu, her bir büyük karenin sayısını karşılaştırmaktır, her kare için sayılan hücre sayısının birinden diğerine abartılı bir şekilde farklı olmaması gerekir.

Beyaz kan hücresi sayımı 50.000 mm üzerinde ise araçta ^3, daha büyük bir seyreltme yapılmadan, tekrar sayın tavsiye edilir.

- Seyreltmeyi değiştirirseniz, formülü etkilediği için çarpım faktörünü yeniden hesaplamanız gerekir.

Referanslar

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Makler'in odası ve Neubauer'in odası kullanılarak sperm konsantrasyonunun karşılaştırılması. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Mevcut: scielo.
2. Neubauer odası. (2018, 27 Mart). Vikipedi, bedava ansiklopedi. Danışma tarihi: 04:10, 23 Haziran 2019 es.wikipedia.org adresinden
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Trichomonas vaginalis konsantrasyonunu belirlemek için Neubauer Odasında alternatif bir sayma yönteminin uygulanması. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Researchgate.net'te mevcuttur
4. Gómez-Pérez Roald E. Spermogramın Analizi. Rev. Venez. Endokrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Mevcut: ve.scielo
5. Carabobo Üniversitesi Biyoanaliz Okulu'nun Hematoloji pratik kılavuzu. Venezuela.1998