EC SUYU: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2024

AT suyu veya et suyu Escherichia coli, seçici sıvı bir kültür ortamıdır. Bu besiyeri, ana ajanın Escherichia coli olduğu su ve gıda örneklerinde en olası sayı tekniği (MPN) ile toplam ve dışkı koliformlarını saymak için Standart Yöntemler tarafından tavsiye edilmektedir.

EC suyu, triptein, laktoz, safra tuzları, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat, sodyum klorür ve sudan oluşur. Formülü, toplam ve dışkı koliformlarının büyümesini desteklemek ve eşlik eden diğer mikroorganizmaların gelişimini önlemek için stratejik olarak tasarlanmıştır.

EC broth hazırlanışının figüratif temsili. Kaynak: Pixabay.com

Escherichia coli bakterisi, önemli gastrointestinal bozuklukların nedeni olan, su ve gıda kaynaklarında bir kontaminant olarak bulunan ana fekal koliformdur.

Escherchia coli'nin birçok serotipi olduğu unutulmamalıdır; Bunlar arasında enterohemorajik (EHEC), enteroinvazif (EIEC), enteopatojenik (EPEC), enterotoksijenik (ETEC) ve enteroaggregatif (EAEC) sayılabilir.

Bu ortam, hepsinin gelişmesine izin verme yeteneğine sahiptir, ancak bunları birbirinden ayırt edemez. Bu ek testler gerektirir.

Toplam ve dışkı koliformlarını araştırmak için en olası sayıya (MPN) göre su ve gıdanın mikrobiyolojik incelenmesi, birkaç aşamadan oluşan bir protokoldür; varsayım aşaması, doğrulama aşaması ve tamamlama aşaması. EC suyu, doğrulama aşamasında kullanılır.

temel

EC suyu

EC besiyeri, Escherichia coli bakterilerinin dahil edildiği toplam ve dışkı koliformlarının optimal gelişimi için gerekli besin öğelerini sağlamaya dayanmaktadır.

Bu besin elementleri, mükemmel bir peptid ve amino asit kaynağı olan triptein tarafından sağlanır. Buna ek olarak, enerji sağlayan ve bakterilerin gaz üretip üretmediğini göstermeye izin veren fermente olabilen bir karbonhidrat olan laktoz da içerir.

Diğer yandan ortam, numunede bulunabilecek Gram pozitif mikroorganizmaların büyümesini engellediği için seçici karakter sağlayan safra tuzları içerir.

Benzer şekilde, dipotasyum fosfat ve monopotasyum fosfat bir pH dengeleme sistemi görevi görür. Bu sistem gereklidir, çünkü et suyunda bulunan laktoz, mikroorganizmalar tarafından fermente edildiğinde ortamı asitleştirme eğilimindedir, ancak bu, fosfat tuzları ile dengelenir.

Bu nedenle, kontrolsüz asitlik aranan mikroorganizmaların doğru gelişimini etkileyebileceğinden, bu elementler gereklidir.

Kendi payına, sodyum klorür ortamı ozmotik olarak stabilize ederken, su, mevcut çözünenler için çözücüdür ve ortama sıvı kıvamı sağlar.

Novobiocin Modifiye EC Broth

Okrend ve Rose, novobiocin ile modifiye edilmiş EC broth adı verilen çeşitli EC broth'u yarattı. Modifikasyon, safra tuzlarının konsantrasyonunun azaltılmasından ve 20 mg / dl novobiosin eklenmesinden oluşuyordu.

Bu modifikasyon, enterohemorajik Escherichia coli suşlarının (O157: H7) geri kazanılmasına yardımcı olur.

Bu bakteriyel serotip, hemolitik üremik sendroma (HUS) yol açabilen ciddi hemorajik kolite neden olur; bu da yaşlılarda% 50'ye varan yüksek ölüm oranıyla akut böbrek yetmezliğine neden olabilir.

Kontamine gıda tüketimine bağlı olarak bu bakterinin yıllık olarak yol açtığı hastalık ve ölüm oranı nedeniyle, Birleşik Devletler Tarım Bakanlığı (USDA) bu besiyerinin kullanılmasını şiddetle tavsiye etmektedir.

Hazırlık

EC suyu

37.4 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışım 5 dakika bekletilmelidir. Daha sonra bir ısı kaynağında sık sık karıştırılarak çözülmesi tamamlanır.

Çözündükten sonra, içinde Durham tüp bulunan önceden koşullandırılmış test tüplerine dağıtılır. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Ortamın pH'ı 6,9 ± 0,2 olmalıdır. Susuz ortamın rengi bejdir ve hazırlanan ortam açık kehribar rengidir.

Et suyu kullanıma kadar buzdolabında bekletilir. Kullanım sırasında et suyu oda sıcaklığında olmalıdır.

Öte yandan, EC suyu da çift konsantrasyonda hazırlanabilir.

Novobiocin Modifiye EC Broth

36,7 g susuz ortam tartılır ve 1 litre su içinde çözülür. Hazırlığın geri kalanı yukarıda açıklananla aynıdır.

kullanım

Toplam ve dışkı koliform analizi

EC broth, hem su numunelerinde hem de farmasötik ürünlerde ve gıdalarda NMP yöntemiyle koliform çalışmalarının doğrulayıcı aşaması için idealdir.

Muhtemel fazda elde edilen bulanık, gaz üreten laktoz broth'ları% 2 safra parlak yeşil broth'larda ve EC broth'ta yeniden tohumlanmalıdır.

Toplam koliformlar için, EC brothlar aerobik olarak 24 ila 48 saat 37 ° C'de inkübe edilir ve fekal koliformlar için aerobik olarak 44 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edilir.

Her iki durumda da şu şekilde yorumlanır: gaz üreten bulanık tüpler pozitif kabul edilir. 24 saat içerisinde gaz üretimi yoksa inkübasyon 48 saate kadar devam eder.

EC pozitif brothlar, Mac Conkey agar, EMB agar veya Endo agar gibi seçici besiyerinde yeniden tohumlamadan oluşan tam doğrulama aşamasına gider.

Kullanılan broth, novobiosin ile modifiye edilmiş EC ise, pozitif tüplerin sorbitol içeren Mac Conkey agar üzerinde yeniden tohumlanması önerilir.

QA

Hazırlanan ortamın her partisi kalite kontrolünden geçmelidir. İlk olarak, besiyerinin sterilliği değerlendirilmelidir. Bu anlamda, aerobiyozda 37 ° C'de 24 saat boyunca aşılamadan bir veya iki broth inkübe edilir. Beklenen sonuç, bulanıklık veya renk değişikliği olmaksızın şeffaf bir sıvıdır.

İkinci olarak, bilinen suşların büyümesi değerlendirilmelidir, bunun için aşağıdaki bakteriler kullanılabilir: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Her durumda, E. coli için gaz üretimi olan ve Salmonella için gaz içermeyen bulutlu bir et suyu gözlemlendiğinde tatmin edici mikrobiyal gelişme beklenir.

Kontrole dahil edilebilecek diğer suşlar şunlardır: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Bu suşlar tamamen inhibe edilmelidir.

tavsiyeler

Durham tüplerinin yerleştirilmesi, koliformların incelenmesi için gereklidir.

- Ortamı sterilize etmeden önce test tüplerine dağıtın, sonra asla dağıtmayın.

-Biyeri 3 aydan daha eski ise kullanmayın.

Besiyerinin olağan özelliklerinde herhangi bir değişiklik gözlenirse kullanmayın.

Referanslar

1. Britannia Laboratuvarları. EC Orta. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
2. Enterohemorajik E. coli. Gıda güvenliği ve halk sağlığı merkezi. 2010. Şu adresten ulaşılabilir: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC ortamı. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
4. Neojen. Novobiocin modifiye edilmiş EC ortamı. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Tucumán'dan. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Şu adresten ulaşılabilir: www.scielo.org.