LAKTOZLU ET SUYU: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2024

Laktoz suyu olmayan bir aracı olduğu - gibi kullanımlar seçici sıvı kültür ortamı , bir işlenmiş gıdalar, süt ürünleri veya suya mikrobiyolojik analizler Salmonella suşlarının izole ön zenginleştirme. Bu, Gıdalar için Mikrobiyolojik Spesifikasyonlar Uluslararası Komisyonu (ICMPF) tarafından önerilmektedir.

Besiyeri, bakteri gelişimi için gerekli maddeler olan jelatin, et ekstresi ve laktozun enzimatik sindirimini içerir. Ayrıca laktoz fermente olabilen bir karbonhidrattır, bu nedenle bazı koliformlar onu gaz üretimi ile parçalayabilir.

Bulanıklığı olan laktasyonlu et suları. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil

Bu nedenle, laktoz suyu, Amerikan Halk Sağlığı Derneği (APHA) tarafından, toplam ve dışkı koliform bakterilerinin varsayımsal çalışması için önerilmektedir ve bu, En Muhtemel Sayı (MPN) standart tekniğinde lauril sülfat triptoz çorbasını ikame etmeye mükemmel bir alternatif olarak nitelendirilmektedir. ), gıda, süt ve yüzey suları, yer altı, eğlence, evsel ve endüstriyel atık örneklerinin mikrobiyolojik analizi için kullanılır.

temel

Bazı örneklerin mikrobiyolojik analizi için ön zenginleştirme aşaması, çok düşük miktarda veya yaşayabilirliğini ihlal eden veya en aza indiren elverişsiz koşullarda olabilecek belirli bir mikroorganizmayı geri kazanabilmek için gereklidir.

Muhtemelen Salmonellas sp. İle kontamine olmuş kurutulmuş ve işlenmiş gıdalarda durum böyledir. Bu durumlarda, bakteri varsa, ürün üretim sürecinde fiziksel ve kimyasal istismara uğramışlardır.

Mikroorganizmaların, dehidrasyon, inhibe edici veya toksik ürünlere maruz kalma ve diğerlerinin yanı sıra daha fazla miktarda diğer bakterilerin varlığından kaynaklanan örtüşme gibi olumsuz faktörlere maruz kalacağı bir şekilde.

Bu anlamda, laktoz çorbası mikroorganizmanın hasarlı yapıları üzerinde onarıcı bir etkiye sahiptir ve tespit edilebilecek şekilde iyileşmesine ve çoğalmasına neden olur.

Benzer şekilde, laktoz çorbası, canlılığını etkileyebilecek inhibe edici maddeleri seyrelterek gelişmesine izin verme kabiliyetine sahiptir. Ek olarak, laktoz et suyunun besin bileşimi, diğer mikroorganizmalara göre Salmonella sp büyümesini desteklemek için stratejiktir.

Nihai tanımlama için, diğer tanımlayıcı kültür ortamlarına alt kültürlenmelidir.

Diğer yandan, ortamın bileşimi, gaz üreten laktozu fermente eden mikroorganizmaların tespit edilmesini de mümkün kılar.

Hazırlık

Bir litre laktoz çorbası hazırlamak için 13 gram susuz ortam tartılmalı ve 1000 ml damıtılmış su içinde çözülmelidir.

Ortamın suda çözünmesine yardımcı olmak için, çözelti biraz ısıtılabilir, ancak çok fazla değil.

Homojen hale geldiğinde, çözelti şu şekilde hazırlanır: et suyu koliformları aramak için kullanılacaksa, içine Durham fermantasyon tüpünün baş aşağı yerleştirildiği bir raf test tüpü hazırlanır.

Durham tüpü çok önemli bir detaydır, çünkü koliform arayışında çok değerli bir veri olan gaz oluşumunun tespitine imkan verecektir.

Tüpler hazır olduğunda, 10 ml laktoz et suyu, Durham tüpünün tamamını kaplamak için yeterli bir miktar olacak şekilde, bunlara dağıtılır.

Laktoz çorbası bir ön zenginleştirme çorbası olarak kullanılacaksa, bir Durham fermantasyon tüpü yerleştirmek gerekli değildir. Bu durumda, 500 ml'lik şişelerde, geniş ağızlı ve ısıya dayanıklı vidalı kapaklı olarak sunulacak daha büyük miktarda ortam (225 ml) gerekir.

Daha sonra, tüpler veya şişeler 121 ° C'de 15 dakika otoklavlanır.

Ortam, 25 ° C'de 6,9 ​​± 0,2 nihai pH değerinde kalmalıdır.

Et suyu kullanıma kadar buzdolabında bekletilir.

Kullanmadan önce et suyu oda sıcaklığına getirilmelidir.

Öte yandan, laktoz çorbası da çift konsantrasyonda hazırlanabilir.

Bazı laboratuvarlar, renk değişikliği nedeniyle laktoz fermentasyonu olan tüpleri göstermek için laktoz suyuna pH göstergesi olarak bromokresol moru ekler. Bu durumda et suyu mor bir renk alır ve fermantasyon varsa sararır.

Uygulamalar

Mikrobiyoloji laboratuvarlarında, laktoz suyu, güvenilir ve hızlı sonuçlar (24-48 saat) sunan, nispeten ucuz bir ortam olduğu için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Yiyecek ve sudaki toplam ve dışkı koliformlarının analizi için veya Salmonella için ön zenginleştirme sıvısı olarak kullanılabilir.

Ön zenginleştirme

Ön zenginleştirme, işlenmiş gıdalardaki Salmonella cinsi bakterilerin geri kazanımını büyük ölçüde geliştiren, numune zenginleştirmeden önceki bir adımdır.

Bunu yapmak için, katı gıda numunesi (25 gram) veya sıvı (25 mi), 24 ila 48 saat süreyle inkübe edilerek 225 ml laktoz et suyuna ekilir. Ardından, selenit sistin çorbası veya tetratiyonat çorbası gibi zenginleştirilmiş bir ortamda alt kültürlenecektir. Ardından XLD ve SS seçici medyaya geçin.

Toplam ve dışkı koliform analizi

Dışkı kontaminasyonunun bir göstergesi olarak mükemmel bir ortamdır.

Bu nedenle, laktoz çorbası, En Muhtemel Sayı yöntemiyle koliform çalışmasının olası aşaması için idealdir.

Çok miktarda koliformdan şüphelenilen numuneler için, daha az miktarda koliform aşılanırken (1 ml), daha düşük miktarda koliformdan şüphelenilen numuneler için daha büyük hacimde numune (10 ml) aşılanacaktır.

Analizi, 10 için, ^-1 , 10 ^-2 10 ^-3 seyreltmeler yapılır , kullanılan her bir konsantrasyonu için 3-5 tüpler bir pil oluşturulması.

Her seyreltmeden, aynı hacim laktoz et suyuna ekilir.

Tüpler 24 saat inkübe edilir. Negatif et suyu 24 saat daha inkübe edilir.

Sonuçların yorumlanması iki özellik gözlemlenerek yapılır: ilki bulanıklığın varlığı veya yokluğudur ve bu ortam bir pH göstergesi içermediğinden renk değişikliği olmayacaktır.

İkincisi, gaz üretimi ya da olmamasıdır. Durham tüpündeki gaz, içindeki bir veya daha fazla hava kabarcığının görünmesiyle kolayca kanıtlanır.

Her iki özelliğin de, yani gaz üretimi ile bulanıklığın gözlenmesi pozitif kabul edilir. Pozitif tüpler, doğrulayıcı ortamda (% 2 Brilliant Green Safra suyu ve EC broth) yeniden tohumlanmalıdır.

Ortamın kalite kontrolü

- Besiyerini hazırlarken, eğer aynı amaç koliformları incelemekse Durhams tüplerini yerleştirmeyi unutmamak önemlidir.

- Sterilize etmeden önce ortamı aşırı ısıtmayın.

- Sterilize etmeden önce, sonra asla test tüplerine dağıtın.

- Besiyeri 3 aydan daha eski ise kullanmayın.

- Besiyerinin olağan özelliklerinde herhangi bir değişiklik gözlemlerseniz kullanmayın.

- Bir parti laktoz suyu hazırlarken, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii ve Klebsiella pneumoniae gibi bilinen suşları ekerek kalitesini test edin. Gaz üretimi ile çok iyi büyürler (pozitif kontrol).

- Ayrıca gaz üretimi olmaksızın iyi büyüyen Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium veya Enterococcus faecalis içerebilir (Negatif Kontrol).

- Susuz ortamın orijinal renginin bej olduğu ve hazırlanan ortamın renginin çok açık ve şeffaf sarı olduğu unutulmamalıdır. Renk veya görünümde bir değişiklik görülürse, bozulabilir.

Referanslar

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M.Çevresel biyoloji ve mikrobiyoloji. (2013) 1. baskı. Cartagenas Üniversitesi, Kolombiya.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. (2009). Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi İçin Teknikler. 2. baskı Kimya Fakültesi, UNAM. Meksika.
3. Conda Pronadisa Laboratuvarları. 2017. Laktoz suyu çift konsantrasyonu (Avrupa Ecz.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Meksika, Xochimilco Gölü tortusundan koliform bakteri ekstraksiyonu tekniklerinin karşılaştırılması. Rev. argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Merkez, Cordillera ve Başkent Belediyesi'nin ilçelerindeki artezyen kuyu sularının mikrobiyolojik kalitesinin belirlenmesi. Mem. Inst. Investig. Bilim. Sağlık 2013; 11 (1): 5-14. Şuradan alınabilir: scielo.iics.