Malonat suyu , Enterobacteriaceae ailesinin bazı cins ayırt etmek için kullanılan tanı testi (malonat) için kullanılan sıvı kültür ortamı, bir. Leifson tarafından 1933'te yaratıldı ve daha sonra orijinal formüle az miktarda dekstroz ve maya özütü ekleyen Ewing tarafından değiştirildi.
Ortam şu anda maya özütü, amonyum sülfat, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat, sodyum klorür, sodyum malonat, dekstroz ve bromotimol mavisinden oluşmaktadır. Bu test genellikle Enterobacteriaceae için biyokimyasal tanımlama bataryasına dahil edilir ve belirli cinsleri ve türleri ayırt etmeye yardımcı olur.
Malonat testinin grafik gösterimi. A. Negatif test, B. (Asitleşme) Negatif test, C. (Orta alkalizasyon) Pozitif test. Kaynak: Renkli tüpler publicdomainpictures.net
Malonat testi temel olarak bazı mikroorganizmaların tek karbon kaynağı olarak sodyum malonatı ve nitrojen kaynağı olarak amonyum sülfatı kullanma becerisine dayanır.
Malonat testi genellikle Enterobacter, Klebsiella ve Citrobacter cinslerinin bazı türlerinde pozitiftir. Oysa Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus ve Providencia cinslerine ait türlerin çoğu olumsuz tepki verir.
temel
Malonat testi, tek karbon kaynağı olarak sodyum malonatı ve nitrojen kaynağı olarak amonyum sülfatı kullanabilen bakterileri göstermekten oluşur.
Malonat kullanmayan Enterobacteriaceae'lerin çoğu, dekstroz ve maya özütlerini besin olarak alarak bu besiyerinde büyüyebilir.
Bu durumda, peptonların kullanılmasıyla alkalileştirme girişimleri, dekstrozun fermentasyonu ile üretilen asitlerin üretilmesiyle karşı karşıya gelecektir. Benzer şekilde, dipotasyum ve monopotasyum fosfatlar, pH'ı 6.7'de tutarak bir tampon görevi görür.
Bu nedenle, test negatif olduğunda, et suyu aynı orijinal renkte (yeşil) kalır. Nadir durumlarda dekstroz fermantasyonu nedeniyle besiyeri asidik hale gelebilir; peptonlar ve pH indikatörü kullanılmadan besiyerinin rengi sarıya döner. Bunun gerçekleşmesi için pH 6'ya düşmelidir.
Ancak bu test pozitif çıktığında mikroorganizmanın diğer bileşenlerden yararlanmadan sırasıyla karbon ve nitrojen kaynağı olarak malonat ve amonyum sülfatı kullandığı söylenir.
Bu durumda ortam, sodyum salınımı ve bunun sonucunda NaOH oluşumu nedeniyle alkali hale gelir. Bu anlamda, pH göstergesi (bromotimol mavisi), pH 7.6'ya eşit veya daha büyük olduğunda ortamın rengini yeşilden maviye çevirir. Mavi açık veya yoğun olabilir (Prusya mavisi).
Son olarak, sodyum klorür ortamın ozmolaritesini korur ve su, tüm bileşenlerin seyrelticisidir.
yorumlama
Aynı Renk Suyu (Yeşil) - Negatif Test
Sarı et suyu: negatif test
Açık veya koyu mavi et suyu: test pozitif
Shaw ve Clarke'ın ortamı olarak da adlandırılan fenilalanin malonat suyu adı verilen bir varyant vardır. Bu durumda, bir karbon kaynağı olarak malonatın kullanımı ve fenilalaninden piruvik asit üretimi olmak üzere iki test analiz edilebilir.
Hazırlık
Malonat suyu
Seçilen ticari şirketin ekinde belirtilen gram sayısı tartılır (birinden diğerine değişebilir). Tartılan gramlar bir litre damıtılmış su içinde süspanse edilir. Tamamen çözülene kadar hafifçe ısıtın. 3 ml besiyerini pamuk kapaklı 13/100 test tüpüne dağıtın.
Otoklavda 121 ° C'de 15 ila 20 dakika sterilize edin.
Kullanmadan önce soğutun. Hemen kullanılmayacaklarsa, kullanana kadar buzdolabında saklayın. Aşılamadan önce et suyunu oda sıcaklığına getirin.
Ortamın pH'ı 6,7 ± 0,2 olmalıdır. Hazırlanan besiyerinin rengi şişe yeşilidir.
Fenilalanin Malonat Suyu
11 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Hazırlığın geri kalanı daha önce anlatılanla aynıdır.
Ayrıca, sterilize edilmeden önce malonat et suyu ortamına 2 g / L fenilalanin eklenerek de hazırlanabilir.
kullanım
Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin tanımlanması için bir araya getirilen biyokimyasal testler dizisinin bir parçası olarak kullanılır.
Aşağıdakileri ayırt etmeye yardımcı olur:
- Escherichia ve Serratia (-) cinslerinden Klebsiella ve Enterobacter (+) cinsi.
-Salmonella enterica ssp enterica (-) türünden Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame ve Salmonella enterica ssp diarizonae (+) türleri.
-Klebsiella cinsinden genellikle (+) Actinobacillus (-) cinsinden.
- Nadiren, fermente olmayan Gram negatif basil Alcaligenes faecalis (+) ve Acinetobacter sp (-) gibi Enterobacteriaceae familyasına ait olmayan bakteri türlerinin ve türlerinin ayırt edilmesine yardımcı olabilir.
Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
süreç
Bir çakmağın altında, uygun şekilde sterilize edilmiş ve soğutulmuş bir platin sap kullanılarak saf bir kolonyanın bir kısmı alınır. Alınan örnek (hafif inokülum) malonat et suyu içinde çözülür. Kapak gevşek bir şekilde aerobiosis içinde 35 ° C ± 0,2'de 24 ila 48 saat inkübe edin.
Malonat çorbası, triptikaz soya çorbasında 18-24 saatlik bir kültürden de aşılanabilir. Bu durumda, 0.01 ml steril bir pipet ile alınır ve malonat et suyu aşılanır. Kapak gevşek bir şekilde aerobiosis içinde 35 ° C ± 0,2'de 24 ila 48 saat inkübe edin.
Süre sonunda sonuçlar yorumlanır. 48 saatlik inkübasyondan sonra herhangi bir mavi renk izi pozitif olarak değerlendirilmelidir. 48 saatlik inkübasyon süresi geçene kadar test negatif olarak yorumlanmamalıdır.
Fenilalanin malonat broth varyantının kullanılması durumunda, önce malonat yorumlanır ve ardından 5 damla 1N HCl ve 3-5 damla% 8 demir klorür eklenir. Koyu yeşil renk, fenilalanin için pozitif bir test olarak yorumlanır. Öte yandan besiyeri soluk maviye dönerse, test fenilalanin için negatiftir.
QA
Besiyerinin sterilite kontrolünü gerçekleştirmek için, bir veya iki broth, 24 saat inkübasyon için 35 ° C ± 0.2'de inkübe edilmelidir. Bu süreden sonra bulanıklık veya renk değişikliği olmamalıdır.
Kalite kontrol için, bilinen veya sertifikalı suşlar kullanılabilir, örneğin: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 ve Escherichia coli ATCC 25922.
Beklenen sonuçlar:
- Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae ve Salmonella enterica ssp arizonae pozitif reaksiyon verir (orta mavi renk).
- Escherichia coli için sonuç negatif olmalıdır, yani renk değişikliği olmayacağı (yeşil) veya glikoz fermantasyonundan dolayı sarıya döneceği beklenir.
Sınırlamalar
Bulanıklık, çökelme, renk değişikliği veya herhangi bir bozulma belirtisi gösteren et suyu kullanmayın.
Referanslar
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Salmonella spp.'nin mikrobiyolojik izolasyonu. ve tespiti için moleküler araçlar. Uninorte Sağlık. Barranquilla (Sütun) 2014; 30 (1): 73-94. Scielo.org.co adresinde mevcuttur
- BBL. Malonate Broth, Ewing değiştirildi. 2007. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Senna Laboratuvarları. Malonato suyu. Mevcut: cientificasenna.com
- RenyLab. Malonato suyu. 2013. Es.renylab.ind.br adresinde bulunabilir
- Mbiolog Diagnostics. Malonato suyu. Mevcut: mbiolog.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Conda Pronadisa Laboratuvarları. Fenilalanin malonat suyu. Condalab.com'da mevcuttur