TETRATIYONAT ET SUYU: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Tetrationat suyu veya et suyu TT cinsi Salmonella türlerinin zenginleştirilmesi ve geri kazanım için bir seçici sıvı kültür ortamıdır. Müeller tarafından yaratıldı ve daha sonra Kauffmann tarafından değiştirildi, bu yüzden ona Müeller-Kauffmann suyu diyenler var.

Orijinal ortam proteoz peptonlar, kalsiyum karbonat ve sodyum tiyosülfat içeriyordu. Kauffmann buna safra tuzları ekledi ve parlak yeşil ile başka bir yöntem yarattı. Bu maddeler, koliformların büyümesini engelleyerek, besiyerini patojenik bakterilerin, bu durumda Salmonella'nın gelişimi için serbest bırakır.

İyot iyot çözeltisinin tetratiyonat et suyuna eklenmesi. Kaynak: Manuel Almagro Rivas

Modifikasyon çok başarılıydı çünkü ortamın hassasiyetini önemli ölçüde artırdı. Bu nedenle, şu anda her tür numunede Salmonella araması için, ancak özellikle katı veya sıvı dışkı ve yiyecekler için yararlıdır.

Hazırlanması iki aşamadan oluşur; Ticari ortam, tetratiyonat et suyunu hazırlamak için bir bazdır ve daha sonra, tetratiyonatın oluşturulabilmesi için, ortamı tamamlamak için iyotlu bir iyot çözeltisi ilave edilir.

Amerikan Halk Sağlığı Derneği (APHA), Tetrathionate Broth ve Selenite Broth'tan daha seçici olduğu için Salmonella için örneklerin zenginleştirilmesi için parlak yeşil ile desteklenen Tetrathionate Broth'un kullanılmasını önermektedir.

Genel olarak, tetratiyonat et suyu, küçük miktarlarda Salmonella cinsine ait bakterilerin varlığından şüphelenildiğinde veya inhibe edici maddelere maruz bırakılarak veya canlılıklarını en aza indiren endüstriyel işlemlerle kötüye kullanıldıklarında idealdir.

temel

Mevcut peptonlar kazeinin pankreas sindirimine ve hayvan dokusunun peptik sindirimine karşılık gelir. Bunlar bakteri büyümesi için karbon, nitrojen ve genel besin kaynağı sağlar.

Sodyum tiyosülfat, iyotlu çözelti ile reaksiyona girerek tetratiyonat oluşturur. Bu, koliformların büyümesini engeller ve tetratiyonat redüktaz enzimini içeren bakterilerin gelişimini destekler, bunların arasında Salmonella cinsi ve ayrıca Proteus bulunur.

Safra tuzları ayrıca çoğu Gram pozitif ve bazı Gram negatif bakteriler (koliformlar) için inhibe edici bir madde görevi görür.

Kalsiyum karbonat, sülfürik asit oluşturan tetratiyonatın ayrışmasıyla oluşan toksik maddeleri emer. Bu anlamda kalsiyum karbonat, ortamın pH'ını sabit tutarak asitliği nötralize eder.

Parlak yeşil modalite durumunda, bu madde Salmonella cinsi dışındaki mikroorganizmaları inhibe ederek tetratiyonat et suyunun seçici gücünü arttırır.

Hazırlık

-Tetratiyonat et suyu

İyot iyot çözeltisi

Tartmak:

• 6 gram iyot.
• 5 gr potasyum iyodür.

Potasyum iyodür yaklaşık olarak 5 ml steril damıtılmış suda çözülür, ardından karışım ısıtılırken azar azar iyot eklenir. Tamamen çözüldükten sonra, steril damıtılmış su ile 20 ml nihai hacme ulaşana kadar işarete kadar tamamlayın.

Tetratiyonat et suyu için temel besiyeri

46 gram susuz ortam tartılır ve 1 litre steril damıtılmış su içinde süspanse edilir. Tamamen eriyene kadar karıştırın ve ısıtın, sadece birkaç dakika kaynatın. Otoklavlamayın. Ortamın tabanı yaklaşık 45 ° C'ye soğumaya bırakılır ve bu sırada 20 ml iyotlu çözelti eklenir.

İyotlu çözelti ortama eklendikten sonra hemen kullanılmalıdır. Karışımın tamamını kullanmak istemiyorsanız, aşağıdakileri yapın:

10 ml baz ortamı tüplere dağıtılır ve sadece örneklerle aşılanacaklara 0.2 ml iyotlu çözelti eklenir.

Kullanılmayacak olanlar yine de buzdolabında saklanabilir, ancak ortam sterilize edilmediğinden ideal olan tam olarak ihtiyaç duyulan miktarı hazırlamaktır.

İyotlu iyot çözeltisi ilave edilmeden önce besiyerinin rengi, beyaz bir çökelti ile süt beyazıdır ve ilave edildikten sonra yoğun bir çökelti ile kahverengidir. Gözlemlenen çökelti normaldir ve çözünmeyen kalsiyum karbonata karşılık gelir. Ortamın nihai pH'ı 8.4 ± 0.2'dir.

-Parlak yeşil ile tetratiyonat et suyu çeşidi

Parlak yeşil tetratiyonat et suyunu hazırlamak için, yukarıda açıklanan tüm adımlar gerçekleştirilir, ancak ek olarak,% 0.1'de hazırlanan 10 ml parlak yeşil çözelti karışıma eklenir.

Yeşil parlayan

Bu çözüm şu şekilde hazırlanır:

0.1 g parlak yeşil tartın ve 100 ml damıtılmış su içinde süspanse edin. Tam çözünmeyi sağlamak için kaynama noktasına kadar ısıtın. Amber şişede saklayın.

kullanım

Dışkı örnekleri (dışkı kültürü) için protokol aşağıdaki gibidir:

10 ml kullanıma hazır tetratiyonat broth ile bir tüp içinde 1 g katı dışkı veya 1 ml sıvı dışkıyı inoküle edin. Kuvvetle sallayın ve aerobik olarak 43 ° C'de 6-24 saat inkübe edin.

Daha sonra, SS agar, XLD agar, parlak yeşil agar, Hektoen enterik agar ve diğerleri gibi Salmonella için seçici bir ortamda broth ve alt kültürden 10 ila 20 ul'lik bir alikot alın.

Buna paralel olarak, Salmonella için seçici besiyeri zenginleştirme yapılmadan doğrudan numune (dışkı) ile inoküle edilmelidir. Rektal sürüntü örnekleri için, toplanan materyali tüpe boşaltın ve yukarıda açıklandığı gibi devam edin.

Gıda örnekleri için, 10 g katı gıda veya 10 ml sıvı gıda tartın ve 100 ml kullanıma hazır tetratiyonat broth ile bir şişeyi inoküle edin. Yukarıda açıklanan şekilde devam edin ancak 37 ° C'de inkübe edin.

Görüldüğü gibi, numune ile et suyu arasındaki ilişki her zaman 1:10 olacaktır.

QA

Kültür ortamını test etmek için bilinen kontrol suşları kullanılabilir. En yaygın olarak kullanılanlar ATCC sertifikalı suşlardır.

Kullanılacak suşlar Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ve Staphylococcus aureus ATCC 25923'tür.

Salmonella suşları için mükemmel büyüme beklenirken, Escherichia coli zayıf veya düzenli büyümeye sahip olabilir ve Gram pozitif suşlar (Enterococcus ve Staphylococcus) kısmen veya tamamen inhibe edilir.

tavsiyeler

-Bu besiyeri Proteus'un büyümesini engellemediğinden, bazı laboratuvarlar bu mikrobiyal suşun gelişmesini önlemek için 40 mg / L novobiosin kullanır. İyot çözeltisinden önce antibiyotik eklenmelidir.

-İyot iyot çözeltisi içeren besiyerini hazırladıktan sonra aşılaması 2 saatten fazla sürmemelidir.

-Ortam tüplere dağıtılırken, oluşan çökeltiyi yeniden süspanse etmek için karışım sürekli olarak homojenize edilmelidir.

-Daha az kontamine olmuş numunelerde tetratiyonat broth 35-37 ° C'de inkübe edilir ve yüksek derecede kontamine olmuş örneklerde 43 ° C'de inkübasyon önerilir.

Referanslar

1. Conda Pronadisa Laboratuvarı. 2010. Müeller-Kauffmann'a göre tetratiyonat et suyu tabanı. Uygun:
2. BD Laboratuvarları. 2003. Tetrathionate Broth Base. Uygun:
3. Britannia Laboratuvarları. 2015. Tetranat bazlı sıvı. Uygun:
4. BBL Media. 2005. Salmonella türlerinin kültürü için tüplerde hazırlandı.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Salmonella spp'nin taşıyıcıların dışkısından izolasyonu. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220