TIYOGLIKOLAT ET SUYU: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Tiyoglikolat suyu orta zenginleştirilmiş sıvı tutarlılık. İngilizce Fluid Thioglycollate Medium'daki kısaltması FTM tarafından bilinir. Brewer tarafından yaratıldı ve 1944'te kazein peptonu ekleyen Vera tarafından değiştirildi.

Bu besiyerinin oksidasyon azaltma potansiyeli düşüktür, bu nedenle katı aerobik bakterilerin gelişimi için önerilmez, ancak fakültatif aerobik, katı anaerobik ve iddiasız mikroaerofilik bakterilerin geri kazanılması için idealdir.

İndikatörsüz tiyoglikolat suyu. Vajinal akıntı gösterir. Kaynak: Bobjgalindo

Bu besiyerinde çok çeşitli mikroorganizmaların izolasyonu ve geri kazanılmasında gözlemlenen yüksek performans, Birleşik Devletler Farmakopesi (USP), Resmi Tarım Kimyagerleri Birliği (AOAC) ve Avrupa Farmakopesi ( AP).

Bu kuruluşlar, farmasötik ürünlerin sterilite kontrol testleri ve çeşitli örnek türlerinin zenginleştirilmesi için bunu önermektedir.

Kado tiyoglikolat, az miktarda maya özütü, kazeinin pankreas sindirimi, susuz dekstroz, L-sistin, sodyum klorür, sodyum tiyoglikolat, resazurin ve agardan oluşur.

Bu besiyerinin çeşitli versiyonları vardır: indikatörlü tiyoglikolat çorbası, indikatörsüz tiyoglikolat çorbası, hemin ve vitamin K ₁ ile zenginleştirilmiş indikatörlü tiyoglikolat çorbası ve kalsiyum karbonatlı tiyoglikolat çorbası.

Özellikle, hemin ve K vitamini ile zenginleştirilmiş tiyoglikolat et suyu çeşidi, güç üreyen anaerobların büyümesini arttırmaya hizmet eder ve kalsiyum karbonat içeren tiyoglikolat et suyu çeşidi, mikrobiyal büyüme sırasında üretilen asitlere karşı koymak için faydalıdır.

temel

Tiyoglikolat sıvı besiyeri, güç üremeyen bakterilerin çoğunun büyümesine izin verdiği için seçici olmayan bir zenginleştirme ortamı olarak kabul edilir. Beslenme gereksinimleri maya özütü, pankreas sindirimi ve glikoz tarafından sağlanır.

Öte yandan, bu besiyeri bir et suyu olmasına rağmen az miktarda agar içerir; Bu, oksijen girişini yavaşlatması nedeniyle düşük oksidasyon-indirgeme potansiyeline sahip olduğu anlamına gelir, öyle ki oksijen tüpün derinliklerine indikçe azalır.

Bu nedenle, bu besiyerinin fakültatif aerobik, mikroaerofilik ve katı anaerobik bakterilerin gelişimi için ideal olmasının nedeni budur, ikincisi bu koşullar altında inkübasyona gerek kalmadan. Aynı ortam, tüpün tabanında bulunmayan ve yüzeyde yeterli miktarda bulunan ortam içindeki oksijen miktarını düzenler.

Benzer şekilde, tiyoglikolat ve L-sistin indirgeyici maddeler olarak hareket ederek peroksit gibi bakteri gelişimine zararlı maddelerin birikmesini önlemeye yardımcı olur. Ek olarak, bu bileşikler, diğer ağır metallerin yanı sıra cıva türevlerinin, arseniklerin önleyici etkilerini nötralize eden sülfhidril grupları (-SH-) içerir.

Resazurin, oksit azaltmanın bir göstergesidir. Bu madde indirgendiğinde renksiz, oksitlendiğinde pembedir. İndikatör ve indikatör olmayan tiyoglikolat broth varyantları vardır. Kullanımı numune tipine ve laboratuvarın tercihine bağlı olacaktır.

Bu arada, sodyum klorür, tiyoglikolat et suyunun ozmotik dengesini korur ve susuz formda glikoz kullanımı, susuz ortamdaki aşırı nemi önler.

Hazırlık

Göstergeli Thioglycollate Broth

29,75 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışım yaklaşık 5 dakika bekletilir. Bir ısı kaynağına getirin ve tamamen eriyene kadar sık ​​sık karıştırın.

Besiyerini test tüplerine dökün ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın. Kullanmadan önce soğumasını bekleyin. Korunması için ticari evin ekini kontrol edin. Bazıları oda sıcaklığında karanlık bir yerde, bazıları da ışıktan korunan bir buzdolabında saklanmasını önerir.

Hazırlanan ortamın pH'ı 7,1 ± 0,2'dir.

Susuz ortamın rengi açık bejdir ve hazırlanan ortam biraz opaklıkla açık kehribar rengindedir.

Hemin ve K vitamini ile zenginleştirilmiş indikatörlü tiyoglikolat et suyu

Özellikle anaerobların kültivasyonu için halihazırda hemin ve K ₁ vitamini içeren ticari ortam vardır .

Anaeroblar için zenginleştirilmiş besiyeriniz yoksa, temel tiyoglikolat suyunu hazırlayabilirsiniz. Bunun için her litre besiyeri için 10 mg hemin hidroklorür ve 1 mg K ₁ vitamini _eklenir . Bununla birlikte, tiyoglikolat et suyuna kan veya serum eklenirse, hemin veya K vitamini ilavesi gerekli değildir.

Kalsiyum karbonatlı tiyoglikolat et suyu

Ticari olarak gelir ve ekteki talimatlara göre hazırlanır.

İndikatörsüz tiyoglikolat suyu

Bu, temel tiyoglikolat ile aynı bileşime sahiptir, ancak resazurin içermez.

30 g susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Preparatın geri kalanı, indikatörlü tiyoglikolat çorbasında anlatılanla aynıdır.

kullanım

Tiyoglikolat et suyu, klinik numunelerin, özellikle steril bölgelerden gelenlerin zenginleştirilmesi için faydalıdır. Ayrıca kozmetik, ilaç vb. Klinik olmayan örnekler için de kullanışlıdır.

Sıvı numunelerin (CSF, sinoviyal sıvı ve diğerleri gibi) aşılanması için, numuneler önce santrifüj edilir ve ardından 2 damla tortu alınır ve tiyoglikolat çorbasına yerleştirilir. 35 ° C'de 24 saat inkübe edin. Bu süre içinde üreme (bulanıklık) yoksa, maksimum 7 güne kadar inkübe edilir.

Örnek bir pamuklu çubukla alınırsa, kültür ortamı önce plakalara aşılanır ve son olarak sürüntü, et suyuna verilir, çıkıntı yapan kısım ayrılır ve tüp kapatılır, çubuk içeride kalır. 35 ° C'de 24 saat, maksimum 7 gün inkübe edin.

Katı örnekler için, fizyolojik salin solüsyonunda (SSF) homojenize edin ve ardından tiyoglikolat et suyunu 2 damla süspansiyonla inoküle edin.

Bazen katı anaeroblardan şüphelenilen numuneler için bir taşıma besiyeri olarak veya yedek zenginleştirme brothu olarak kullanılabilir.

Kalsiyum karbonatlı tiyoglikolat broth varyantı, kontrol suşlarının daha uzun süre muhafaza edilmesi için kullanılır, çünkü glikoz kullanımıyla üretilen asitleri nötralize etme kabiliyetine sahiptir; Bu asitler belirli bakteriler için toksiktir.

Tiyoglikolat çorbasındaki gelişim, ortamın türbiditesiyle gözlemlenecektir. Örnek türüne ve şüphelenilen mikroorganizmalara bağlı olarak bir Gram boyama ve ardından seçici olmayan ve seçici besiyerinde alt kültür yapılması önerilir.

QA

Sterilite kontrolü için inokülasyon olmadan bir veya iki brothun inkübe edilmesi önerilir. Beklenen sonuç, renk değişikliği olmayan berrak bir et suyudur, ancak tüpün yüzeyinde hafif pembe bir renk görmek normaldir.

Kalite kontrol için, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 gibi 10 - 100 CFU arasında sertifikalı kontrol suşu inoküle edilmelidir. Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Aerobiosis içinde 30-35 ° C'de 24 saatten maksimum 3 güne kadar inkübe edin, çünkü bu mikroorganizmalar hızlı çoğalmaktadır.

Orta derecede gelişimin olabileceği Micrococcus luteus ve Bacillus subtilis dışındaki tüm vakalarda iyi gelişme beklenir.

Hemin ve K vitamini ile zenginleştirilmiş tiyoglikolat suyu kalitesinin kontrolü için ₁ , denetim suş Bacteroides Vulgatus ATCC 8482, ATCC 13124, Clostridium ve Bacteroides fragilis ATCC 25285 kullanılabilir perfringens. Beklenen sonuç tatmin büyümedir.

tavsiyeler

- Nadiren indikatörlü tioglikolat broth yüzeyinin pembeye döndüğü görülebilir; Bu, ortamın oksidasyonundan kaynaklanmaktadır. Pembe renk toplam et suyunun% 30'unu veya daha fazlasını kaplarsa, su banyosunda 5 dakika ısıtılabilir, tekrar soğutulabilir ve kullanılabilir.

Bu, emilen oksijeni ortadan kaldırarak ortamı orijinal rengine döndürür. Bu prosedür yalnızca bir kez yapılabilir.

-Aerobik bakterilerin büyümesini iyileştirmek için, hafif gevşek bir kapakla inkübe edin. Bununla birlikte, bu amaçla, katı aerobların doğru gelişimi için bir beyin kalp infüzyon çorbası veya triptikaz soya çorbası kullanılması tercih edilir.

- Her iki koşul da ortama zarar verdiği için ortamın donmasından veya aşırı ısınmasından kaçınılmalıdır.

-Doğrudan ışık kültür ortamına zarar verir, ışıktan korunarak saklanmalıdır.

Referanslar

1. Britannia Laboratuvarları. Göstergeli tiyoglikolat USP. 2015. LabBritania.com'da bulunabilir.
2. Chios Sas Laboratuvarları. 2019. Thioglycollate broth. Quios.com.co adresinde mevcuttur
3. Laboratuvarlar BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. bd.com/Europe adresinde mevcuttur.
4. Anaerobik mikroorganizmaların kültivasyonu için tüplerde hazırlanan BBL besiyeri. Tiyoglikolat ortamı. 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.