ÜRE SUYU: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Üre suyu bazı mikroorganizmalar üreaz enziminin varlığını tespit etmek için kullanılan bir sıvı kültür ortamı, bir. Üreaz, yapıcı bir şekilde üretilen, yani etki ettiği substratın mevcut olup olmadığına bakılmaksızın sentezlenen mikrobiyal bir enzimdir.

Üreazın işlevi, organik bileşiklerin ayrışmasıyla ilgilidir. Tüm mikroorganizmalar bu enzimi sentezleyemez, bu nedenle laboratuvarda belirlenmesi, belirli bakteri türlerinin tanımlanmasına ve hatta aynı cinsin türleri arasında ayrım yapılmasına izin verir.

Negatif ve pozitif üre testi. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil.

İki tür üre testi vardır: Stuart ve Christensen. Kompozisyon ve hassasiyet bakımından farklılık gösterirler. İlki, Proteus cinsi türler tarafından üretilen büyük miktarda üreazı göstermesi için özeldir.

İkincisi daha hassastır ve Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter ve Mycobacterium gibi diğer bakteri türleri tarafından geç üretilen küçük miktarlarda üreazı tespit edebilir.

Stuart's Urea Broth, Üre, Sodyum Klorür, Dipotasyum Fosfat, Monopotasyum Fosfat, Maya Ekstresi, Fenol Kırmızısı ve Distile Sudan oluşur.

Bu arada, Christensen'in üre çorbası veya agarı, peptonlar, sodyum klorür, monopotasyum fosfat, glikoz, üre, fenol kırmızısı, damıtılmış su ve agar-agardan oluşur. İkincisi, yalnızca katı ortam ise.

temel

Enzim üreaz, üreyi hidrolize ederek karbondioksit, su ve iki amonyak molekülü oluşturur. Bu bileşikler, amonyum karbonat adı verilen son ürünü oluşturmak için reaksiyona girer.

Stuart'ın Üre Suyu

Stuart'ın üre suyu 6.8 pH ile daha tamponlanmıştır. Bu nedenle, mikroorganizmanın fenolü kırmızılaştırmak için büyük miktarlarda amonyak oluşturabilmesi gerekir. PH, 8'in üzerine çıkmalıdır.

Bu nedenle, Stuart'ın üre suyu Proteus türleri için seçicidir, 24 ila 48 saatlik inkübasyonda pozitif sonuçlar verir ve düşük miktarlarda üreaz üreten veya üreyi yavaşça hidrolize eden bakteriler için etkili değildir.

Bunun nedeni, Proteus türlerinin üreyi nitrojen kaynağı olarak kullanabilmesidir. Bunun yerine, üreaz üreten diğer bakterilerin ek bir kaynağa ihtiyacı vardır.

Bununla birlikte, Pérez ve ark. (2002) Stuart'ın üre çorbasının, Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon ve Saccharomyces cinslerinin maya suşlarında üreazı belirlemede Christensen'in üre agarı kadar etkili olduğunu belirlemiştir.

Çalışma yazarları, 24 ve 48 saat inkübe edildiğinde her iki medya (Stuart ve Christensen) ile% 100 anlaşma sağladıklarını iddia ediyorlar; medyayı güçlü bir pembemsi-fuşya rengine dönüştürmeyi başaran suşlar pozitif kabul edildi.

Lodder (1970) neredeyse tüm mayaların Christensen üre agar eğimini soluk pembeye çevirmeyi başardığını belirttiğinden, bu açıklama gereklidir. Bunun nedeni, üreyi minimum miktarlarda hidrolize edebilmeleri ve yüzeydeki amino asitlerin oksidatif dekarboksilasyonu yoluyla aminlerin oluşmasıdır. Bu olumlu olarak yorumlanmamalıdır.

Christensen's Urea Agar veya Broth

Christensen'in üre suyu veya agarı daha az tamponludur ve az miktarda amonyak tespit edebilir. Ayrıca bu besiyeri peptonlar ve glikoz ile zenginleştirilmiştir. Bu bileşikler, Stuart et suyunda büyümeyen diğer üreaz üreten mikroorganizmaların büyümesine neden olur.

Aynı şekilde Christensen üre testi, özellikle Proteus için daha hızlı sonuçlar sunar, minimum süre olarak sadece 30 dakikada ve maksimum süre olarak 6 saate kadar güçlü pozitif verebilir.

Üreaz üreten mikroorganizmaların geri kalanı, besiyerinin rengini 6 saat sonra hafifçe ve 24, 48, 72 saat veya daha sonra güçlü bir şekilde değiştirmeyi başarır ve hatta bazı suşlar 5 veya 6 gün sonra zayıf reaksiyonlar verebilir.

Her iki medyanın yorumlanması (Stuart ve Christensen)

Ortam orijinal olarak sarı-turuncu renktedir ve pozitif bir reaksiyon ortamın rengini pembemsi-fuşyaya çevirir. Rengin yoğunluğu, üretilen amonyak miktarı ile doğru orantılıdır.

Negatif bir reaksiyon, Christensen'in üre agar besiyerinde soluk pembeye dönebilen mayalar haricinde, ortamı orijinal renkte bırakacaktır.

Hazırlık

Stuart'ın Üre Suyu

Ticari firmanın endikasyonlarına göre gerekli gramları tartın. Tercihen steril damıtılmış suda çözün. Üre ısıya duyarlı olduğundan, çözmek için ısı kullanmayın.

Sterilize etmek için membran filtrasyon kullanılır. Bunun için 0,45 µ çapında gözenekli bir Millipore filtre kullanılır. Otoklav kullanmayın. Çözelti süzüldükten sonra steril tüplere dağıtılır. Güvenilir sonuçlar elde etmek için tüp başına minimum miktar olarak 1.5 ml ve maksimum miktar olarak 3 ml arasında aktarılmalıdır.

Kullanmadan önce buzdolabında saklayın ve ısıtın.

Filtreleme yöntemi mevcut değilse, güvenilir sonuçlar elde etmek için besiyeri hemen kullanılmalıdır.

Stuart'ın Urea Broth'unu hazırlamanın başka bir yolu da aşağıdaki gibidir:

Bazı ticari evler, üre dahil değil, üre testi için baz ortamı satmaktadır.

Ticari firma tarafından belirtilen miktar tartılır. Distile suda çözülür ve otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edilir. Biraz dinlenmeye bırakılır ve ortam sıcakken 100 ml% 20 oranında hazırlanmış ve süzülerek sterilize edilmiş üre çözeltisi eklenir.

Daha önce tarif edildiği gibi steril tüplere dağıtılır.

Christensen's Urea Agar veya Broth

-Üre solüsyonunun hazırlanması

29 gr kurutulmuş üre tartılır ve 100 ml distile su içinde çözülür. Sterilize etmek için filtrasyon yöntemini kullanın. Otoklavlamayın.

-Üre bazlı agar

24 g susuz baz agarı 950 ml damıtılmış su içinde çözün. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. 50 ° C sıcaklığa ulaşıncaya kadar dinlendirin ve önceden hazırlanmış üreyi aseptik olarak ekleyin.

Steril tüplere 4-5 ml dökün ve katılaşana kadar eğin. Uzun bir flüt gagası olmalı.

Bu ortam ayrıca sıvı formda da hazırlanabilir.

Uygulamalar

Üre testi, Proteus tarafından sağlanan hızlı reaksiyon göz önüne alındığında, Proteus cinsini Enterobacteriaceae Ailesi'ndeki diğer cinslerden ayırt etmede son derece etkilidir.

Christensen bileşimini kullanan test, aynı cinsten türleri ayırt etmeye yardımcı olur. Örneğin, S. haemolyticus ve S. warneri koagülaz negatif ve beta-hemolitik Staphylococcus'tur, ancak S. haemolyticus üre negatif ve S. warneri'nin üre pozitif olması bakımından farklılık gösterir.

Öte yandan McNulty, Christensen'in% 2 üre çorbasını mide mukozasından (antral bölge) alınan biyopsi örneklerinde Helicobacter pylori varlığını incelemek için başarıyla kullandı.

H. pylori'nin varlığı, pozitif bir üre testi ile kanıtlanır. Sonuçları gözlemleme süresi, mevcut mikroorganizma miktarı ile doğru orantılıdır.

Görüldüğü gibi mide biyopsilerinde Helicobacter pylori'nin teşhisi için basit bir yöntemdir.

Son olarak, bu test türleri Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ve Mycobacteria cinslerinden ayırmak için de faydalıdır.

Üre testinin ekilmesi

Her iki yöntem de sonuçları optimize etmek için güçlü bir mikrobiyal aşı gerektirir. Bakteriyel koloniler, birkaç istisna dışında tercihen kanlı agardan ve mayalardan Sabouraud agardan alınır. Aşı, sıvı ortamda emülsifiye edilir.

Stuart'ın üre suyu için, Proteus suşlarını yalnızca tür bir bakteri olduğunda aradığınızı bilerek, 37 ºC'de 24 ila 48 saat inkübe edin. Mayalar için, 37 ° C'de veya oda sıcaklığında 24 ila 48 saat inkübasyon için inkübe edilebilir.

Christensen'in üre suyu durumunda, 37 37C'de 24 saat inkübe edilir. Test negatifse 6 güne kadar inkübe edilebilir. Testin 6 saatten önce pozitif çıkması, bunun Proteus cinsinin bir türü olduğunu gösterir.

Christensen'in üre agarı durumunda, agar eğimi delinmeden güçlü bir şekilde aşılanır. Et suyu aynı şekilde inkübe edilir ve yorumlanır.

QA

Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ve Salmonella typhimurium gibi kontrol suşları besiyerini test etmek için kullanılabilir. İlk ikisi olumlu, son iki olumsuz sonuç vermelidir.

Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.

Referanslar

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. ve diğerleri. Stuart'ın üre suyunun maya teşhisinde bir test olarak üreaz testi için kullanılması. Rev. Soc Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Mevcut: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
5. Britannia Laboratuvarları. Christensen Medium (Urea agar base) 2015. Şu adresten ulaşılabilir: britanialab.com