YÜKSEK PERFORMANSLI SIVI KROMATOGRAFISI (HPLC): MANTIK, EKIPMAN, TIPLER - KIMYA - 2025

Yüksek performans sıvı kromatografisi , ayrı karışımları arındırmak, izin verilmiş ve bileşenlerini ölçmek ve daha fazla çalışma kimyasal analizlerde kullanılan bir aracı bir tekniktir. İngilizceden türetilen HPLC kısaltmasıyla bilinir: Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi.

Böylece adından da anlaşılacağı gibi sıvıları manipüle ederek çalışır. Bunlar, analit veya ilgili numuneden ve mobil faz olarak hareket eden bir veya daha fazla çözücüden oluşan bir karışımdan oluşur; diğer bir deyişle, analiti tüm HPLC ekipmanı ve kolon boyunca sürükleyen.

HPLC ekipmanı. Kaynak: Dqwyy

HPLC, birçok şirkette kalite analiz laboratuvarları tarafından yaygın olarak kullanılmaktadır; ilaç ve gıda gibi. Söz konusu analist, numuneyi, mobil fazı hazırlamalı, sıcaklığı ve diğer parametreleri kontrol etmeli ve ekipmanın enjeksiyonları otomatik olarak gerçekleştirmesi için şişeleri tekerleğin veya karuselin içine yerleştirmelidir.

HPLC ekipmanı, oluşturulan kromatogramların gözlemlenebildiği ve ayrıca analizleri başlatmak, mobil fazın akış hızını kontrol etmek, elüsyon türünü programlamak (izokratik veya gradyan) ve dedektörleri (UV -Vis veya kütle spektrofotometresi).

temel

Kağıt veya silika jel dolgulu kolon kromatografisi gibi geleneksel sıvı kromatografinin aksine, HPLC sıvının durağan fazı ıslatması için yer çekimine bağlı değildir. Bunun yerine, mobil fazı veya eluenti kolondan daha yoğun bir şekilde sulayan yüksek basınçlı pompalarla çalışır.

Bu şekilde, mobil fazın sık sık kolon boyunca dökülmesi gerekli değildir, bunun yerine sistem bunu sürekli ve daha yüksek akış hızlarıyla yapar.

Ancak bu tekniğin etkinliği, yalnızca bu ayrıntıdan değil, aynı zamanda durağan fazı oluşturan küçük dolgu parçacıklarından da kaynaklanmaktadır. Daha küçük olduğu için mobil fazla temas alanı daha büyüktür, bu nedenle analit ile daha iyi etkileşime girecek ve molekülleri daha fazla ayrılacaktır.

Bu iki özellik, artı tekniğin dedektörlerin bağlanmasına izin vermesi, HPLC'yi ince tabaka veya kağıt kromatografisinden çok daha üstün kılar. Ayırmalar daha verimlidir, mobil faz sabit fazda daha iyi hareket eder ve kromatogramlar analizdeki herhangi bir arızayı tespit edebilir.

ekipman

Bir HPLC ekipmanının çalışmasının basitleştirilmiş diyagramı. Kaynak: Gabriel Bolívar.

Yukarıda, bir HPLC ekipmanının nasıl çalıştığına dair basitleştirilmiş bir diyagram bulunmaktadır. Çözücüler, pompanın bunlardan küçük bir hacmi ekipmana alması için hortumlarla düzenlenmiş kendi kaplarındadır; böylece mobil aşamaya sahibiz.

Mobil faz veya eluent, cihaz enjeksiyonları yaptıktan sonra mobil faz ile karıştırılan analit moleküllerinin ayrılmasını kabarcıkların etkilemeyecek şekilde önce gazdan arındırılmalıdır.

Kromatografik sütun, sıcaklığı düzenlemeye izin veren bir fırının içine yerleştirilmiştir. Bu nedenle, farklı numuneler için yüksek performanslı ayrımlar elde etmek için yeterli sıcaklıkların yanı sıra özel analizler için geniş bir sütun kataloğu ve doldurma türleri veya sabit aşamalar vardır.

Çözünmüş analit ile hareketli faz, kolona girer ve ondan, durağan faz için daha az afinite "hisseden" moleküller ilk önce ayrışırken, onun tarafından daha fazla tutulanlar daha sonra ayrıştırılır. Ayrıştırılan her molekül, kromatogramda gösterilen bir sinyal üretir ve burada ayrılan moleküllerin alıkonma süreleri gözlemlenir.

Diğer yandan dedektörden geçtikten sonra mobil faz bir atık konteynerinde son bulur.

HPLC türleri

Birçok HPLC türü vardır, ancak bunların arasında en göze çarpanlar aşağıdaki dördüdür.

Normal faz kromatografisi

Normal faz kromatografisi, sabit fazın doğası gereği polar olduğu, mobil fazın ise polar olmadığı bir fazı ifade eder. Normal olarak adlandırılmasına rağmen, aslında en az kullanılan, ters faz en yaygın ve verimli olanıdır.

Ters faz kromatografisi

Ters faz olarak, şimdi sabit faz apolar ve hareketli faz polar. Birçok biyomolekül suda ve polar çözücülerde daha iyi çözündüğünden, bu özellikle biyokimyasal analizde faydalıdır.

İyon değişim kromatografisi

Bu tip kromatografide, pozitif veya negatif yüklü analit, barındırdığı iyonları değiştirerek kolon boyunca hareket eder. Yük ne kadar yüksek olursa, tutulması o kadar yüksek olur, bu nedenle geçiş metallerinin iyonik komplekslerini ayırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Boyut Dışlama Kromatografisi

Bu kromatografi, ayırmaktan ziyade, elde edilen karışımın saflaştırılmasından sorumludur. Adından da anlaşılacağı gibi, analit artık durağan fazla ne kadar yakından ilişkili olduğuna bağlı olarak değil, boyutuna ve moleküler kütlelerine göre ayrılır.

Daha küçük moleküller, polimerik kolon dolgularının gözenekleri arasında sıkışmadığından, büyük moleküllerden daha fazla tutulacaktır.

Uygulamalar

HPLC hem kalitatif hem de kantitatif analize izin verir. Niteliksel tarafta, belirli koşullar altında kromatogram tutma süreleri karşılaştırılarak, belirli bir bileşiğin varlığı tespit edilebilir. Böyle bir mevcudiyet, hastalık, tağşiş veya uyuşturucu kullanımının göstergesi olabilir.

Bu nedenle tanı laboratuvarlarının bilgisayar parçasıdır. Aynı şekilde, ürünün saflığının yanı sıra mide ortamında çözünmesi açısından kalitesinin kontrol edilmesine izin verdiği için ilaç endüstrilerinde bulunur. Başlangıç ​​malzemeleri de saflaştırmak ve ilaç sentezinde daha iyi performans sağlamak için HPLC'ye tabi tutulur.

HPLC, proteinlerin, amino asitlerin, karbonhidratların, lipidlerin, porfirinlerin, terpenoidlerin karmaşık karışımlarının analizine ve ayrılmasına izin verir ve esasen bitki özütleriyle çalışmak için mükemmel bir seçenektir.

Ve son olarak, moleküler dışlama kromatografisi, bazıları diğerlerinden daha küçük veya daha büyük olabileceğinden, farklı boyutlardaki polimerleri seçmenize izin verir. Bu şekilde, düşük veya yüksek ortalama moleküler kütleli ürünler elde edilir, bu, özelliklerinde ve gelecekteki uygulamalarında veya sentezlerinde belirleyici bir faktördür.

Referanslar

1. Day, R. ve Underwood, A. (1989). Kantitatif Analitik Kimya. (beşinci baskı). PEARSON Prentice Salonu.
2. Bussi Juan. (2007). Yüksek performanslı sıvı kromatografisi. . Kurtarıldı: fing.edu.uy
3. Vikipedi. (2019). Yüksek performanslı sıvı kromatografisi. En.wikipedia.org adresinden kurtarıldı
4. Clark Jim. (2007). Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi. Kurtarıldı: chemguide.co.uk
5. Matthew Barkovich. (5 Aralık 2019). Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi. Kimya LibreTexts. Chem.libretexts.org adresinden kurtarıldı
6. GP Thomas. (15 Nisan 2013). Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) - Yöntemler, Yararlar ve Uygulamalar. Azom.com'dan kurtarıldı