KROMATOGRAM: NE IÇIN VE TÜRLERI - KIMYA - 2024

Kromatogram kromatografisiyle maddelerin ayrılmasını gösteren bir emici ortam üzerinde elde edilen iki boyutlu bir grafik kayıt vardır. Kromatogram üzerinde, bir karışımın bileşenlerinin fiziksel olarak ayrılmasını yansıtan görünür bir model, tepe noktaları veya noktalar oluşur.

Alttaki şekil, numunenin üç bileşeninin kromatografi ile ayrılmış üç tepe noktası A, B ve C olan bir kromatogramdır. Üç pikin her birinin kromatogramın zaman ekseninde farklı bir yüksekliğe ve konuma sahip olduğu gözlenmiştir.

Tipik kromatogram. Kaynak: Heliagon, Wikimedia Commons'tan

Ordinat veya Y ekseni sinyal yoğunluğu bilgilerini kaydeder (bu durumda milivolt mV cinsinden). Detektöre bağlı olarak, maddenin bazı fiziksel özelliklerinin veya karışımın ayrı bileşenlerinin kaydını temsil eder.

Pikin yüksekliği, optimal bir sistemde numuneden ayrılan bileşenin konsantrasyonu ile orantılıdır. Böylece, örneğin, B bileşeninin, A ve C'den daha yüksek bir oranda olduğunu görselleştirmek kolaydır.

Apsis veya X ekseninde, numune veya karışımın bileşenlerinin tutulma süresi temsil edilir. Her saf madde için farklı olmak üzere, numunenin enjeksiyonundan durana kadar geçen süredir.

Kromatogram ne içindir?

Tüm kromatografi sürecinin son kaydıdır. Analitik açıdan ilgi çekici parametreler buradan elde edilir. Bu, elektronik bir dosya, basılı bir histogram veya işlem ortamında elde edilebilir; örneğin kağıt üzerinde.

Y ekseni, spektrofotometreler gibi sinyal veya yoğunluk yanıtı detektörleri tarafından oluşturulur. Elde edilen zirvelerin veya noktaların özelliklerinin zamanın optimal bir analizi gereklidir; boyut, konum, renk ve diğer hususlar.

Kromatogramların analizleri genellikle kontrollerin veya standartların, bilinen kimlik ve konsantrasyona sahip maddelerin kullanılmasını gerektirir. Bu kontrollerin analizi, incelenen numunenin bileşenlerinin karakteristik numuneleri ile karşılaştırma yaparak tespit etmeye izin verir.

Kromatogramda, bir karışımın bileşenlerinin ayrılmasının nasıl gerçekleştirildiğini gözlemleyebilir ve analiz edebilirsiniz. Optimal çalışması, diğer yönlerin yanı sıra bir maddenin tanımlanmasına, saflığının gösterilmesine, bir karışımda bulunan maddelerin miktarının belirlenmesine izin verir.

Çıkarılan bilgiler niteliksel nitelikte olabilir; örneğin, maddeler tanımlandığında ve saflıkları belirlendiğinde. Kantitatif bilgi, karışımdaki bileşenlerin sayısının ve ayrılan analitin konsantrasyonunun belirlenmesi ile ilgilidir.

Maddelerin tanımlanması

Kromatogramın sonuçları analiz edilerek, tutma süreleri bilinen maddelerinkilerle karşılaştırılarak çeşitli maddeler tanımlanabilir. İncelenen maddelerin, bilinen maddelerle aynı zamana sahiplerse aynı mesafeyi kat edip etmedikleri gözlemlenebilir.

Örneğin, kromatogram, sporcuların idrarındaki uyarıcılar ve steroidler gibi ilaçların metabolitlerini tespit edebilir ve tanımlayabilir. Yenidoğanda genetik bozuklukların ürettiği bazı metabolitlerin incelenmesi ve araştırılmasında önemli bir destektir.

Kromatogram, diğer maddelerin yanı sıra içme suyunda bulunan halojenli hidrokarbonların tespitini kolaylaştırır. Kalite kontrol laboratuvarı analizinde, çeşitli ürünlerde bulunan kontaminantların tespit edilmesine ve tanımlanmasına izin verdiği için önemlidir.

Maddelerin saflığının sınıflandırılması

Bir kromatogramda saf ve saf olmayan maddeleri ayırt edebilirsiniz. Saf bir madde, kromatogramda tek bir tepe oluşturacaktır; oysa saf olmayan bir madde iki veya daha fazla zirve oluşturacaktır.

Kromatografinin gerçekleştirildiği koşullar uygun şekilde ayarlanarak, iki maddenin tek bir pik oluşturması önlenebilir.

Maddelerin miktar tayini

Kromatogramın pik alanı analiz edilerek, numune bileşenlerinin konsantrasyonu hesaplanabilir.

Bu nedenle, pikin alanı numunede bulunan madde miktarı ile orantılıdır. Bu nicel veriler, örneğin gaz veya sıvı kromatografi ile oluşturulanlar gibi oldukça hassas sistemlerde elde edilir.

Türleri

Kromatogramların sınıflandırmalarından biri, karşılık gelen kromatogramı oluşturan farklı kromatografi türleri ile yakından ilgilidir.

Çalışma koşullarına bağlı olarak, detektörler, diğer hususların yanı sıra, kromatogram içeriği ve kalitesi açısından değişiklik gösterecektir.

Kağıt veya ince tabaka üzerinde kromatogramlar

Kromatogram, doğrudan numune bileşenlerinin dağılımını veya dağılımını gösteren, doğrudan kağıt veya ince bir tabaka üzerinde oluşturulabilir.

Klorofil gibi doğal pigmentlere sahip renkli maddelerin ayrılması ve incelenmesi için çok faydalıdır. Maddelerin doğal renge sahip olmaması durumunda geliştirme işlemlerine tabi tutulabilir ve kalitatif çalışmalar için faydalıdır.

Dedektörler tarafından oluşturulan kromatogramlar

Kromatogram, kromatografinin tepkisini, çıktısını veya son sinyalini kaydeden bir detektör kullanılarak da elde edilebilir. Daha önce bahsedildiği gibi, bu detektör genellikle bir spektrofotometre, bir kütle spektrometresi, otomatik sıralayıcılar, elektrokimyasallardır.

İster gaz ister sıvı olsun, sütunlarda üretilen kromatogramlar ve ince katmanlarda yüksek çözünürlüklü olanlar dedektörleri kullanır.

Detektör tipine bağlı olarak, kromatogram detektörün yanıt formuna bağlı olarak diferansiyel veya integral olarak sınıflandırılabilir.

Diferansiyel kromatogram

Bir diferansiyel detektör, kromatogramdan gelen yanıt sinyalini sürekli olarak ölçerken, integral detektörler karşılık gelen sinyali kümülatif olarak ölçer.

Diferansiyel bir kromatogram, bir diferansiyel detektör tarafından elde edilen bir kromatogramdır. Bu detektörler, örneğin, spektrofotometreleri ve elektriksel iletkenlikteki değişiklikler için detektörleri içerir.

Bu tip bir kromatogram, dolaylı fotometri ile tespit edilen bir numuneden anyonların ayrılmasının sonucunu göstermiştir. Aynı sonuçlar, iyonların incelenmesi için de elde edilmiştir, örneğin, iletkenlik ölçümüyle son tespit ile.

Diferansiyel kromatogram. Kaynak: Pixabay

Üstteki grafik, otomatik DNA (deoksiribonükleik asit) dizicilerle elde edilen bir diferansiyel kromatogram örneğini göstermektedir. Grafik, DNA'daki azotlu bazların her biri için bir renk olmak üzere dört renk tepe noktasını açıkça göstermektedir.

Bilgisayarlı bir programın desteğiyle, analiz edilen DNA'nın bazlarının dizisinin yorumlanması ve daha karmaşık analitler için kolaylaştırılır.

İntegral kromatogram

İntegral kromatogram, integral detektör ile elde edilene karşılık gelir. Bu kromatogram, incelenen tek bir bileşenin çıktısını gösterir. Diferansiyelde olduğu gibi birden fazla tepe elde edilmez.

İntegral kromatogramda, adım olarak tanımlanan bir şekle sahip bir kayıt elde edilir. Bu şekil, kromatogramın kolondan çıkan tek bir maddenin miktarına karşılık gelen kısmıdır.

Referanslar

1. Bhanot, D. (2013). Bir Kromatogram Nasıl Okunur? Kurtarıldı: lab-training.com
2. Carey, FA (2006). Organik Kimya Altıncı Baskı. Mc Graw Hill Yayınevi
3. Bugün Kromatografi. (2014). Kromatogram nedir? Kurtarıldı: chromatographytoday.com
4. Mathias, J. (2018). Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz: Gaz Kromatografi Kromatografisi Kütle Spektrometresi Sonuçlarını Yorumlama. Innovatechlabs.com adresinden kurtarıldı
5. İspanyol Kromatografi ve İlgili Teknikler Derneği. (2014). Kromatogram. Secyta.es'den kurtarıldı
6. Vikipedi. (2019). Kağıt kromatografisi. Wikipedia.org adresinden kurtarıldı