HISTOKIMYA: GEREKÇE, İŞLEME, BOYAMA - BIYOLOJI - 2025

Histokimyasal bağlı karbonhidratlar, lipitler ve proteinler, diğerleri arasında, kimyasal boyalar gibi doku bileşenlerinin kendi reaksiyon prensibi çeşitli biyolojik dokularda (bitki ve hayvan) morfolojisi çalışmada yararlı bir araçtır.

Bu değerli araç, yalnızca doku ve hücrelerin bileşimini ve yapısını değil, aynı zamanda bunlarda meydana gelen çeşitli reaksiyonları da tanımlamaya izin verir. Benzer şekilde, mikroorganizmaların veya diğer patolojilerin varlığından kaynaklanan olası doku hasarı kanıtlanabilir.

Histokimyasal lekeler. Nil virüsü, Gram pozitif ve Gram negatif bakteriler (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Kaynak: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George P. Kubica

Paul Ehrlich'in kan-beyin bariyerinin varlığının gösterilmesi gibi, geçmiş yüzyıllardan kalan histokimya önemli katkılar sağlamıştır. Bu mümkün oldu çünkü Ehrlich tarafından kullanılan deney hayvanının beyni, bazik bir boya olan anilin ile boyanmamıştı.

Bu, farklı hücre türlerini boyamak için metilen mavisi ve indofenol gibi çeşitli boyaların kullanılmasına yol açtı. Bu bulgu, hücrelerin spesifik boyamalarına göre asidofilik, bazofilik ve nötrofilik olarak sınıflandırılmasına yol açtı.

Son zamanlarda yapılan araştırmalar, bu tekniği, daha iyi defne olarak bilinen Litsea glaucescens türlerinin dokularında fenoller, karbonhidratlar ve yapısal olmayan lipidler gibi çeşitli bileşiklerin varlığını göstermek için uygulamıştır. Bunları hem yaprakta hem de ağaçta bulmak.

Benzer şekilde, Colares ve arkadaşları, 2016, histokimyasal teknikleri kullanarak tıbbi ilgi konusu Tarenaya hassleriana bitkisini tanımladı. Bu türde nişasta, mirosin ve ayrıca fenolik ve lipofilik bileşiklerin varlığı kanıtlanmıştır.

temel

Histokimya, dokularda bulunan hücresel yapıların veya moleküllerin, belirli boyalarla afiniteleri sayesinde boyanmasına dayanır. Bu yapıların veya moleküllerin orijinal formatlarında renklenmelerinin reaksiyonu daha sonra optik mikroskop veya elektron mikroskobunda görselleştirilir.

Boyamanın özgüllüğü, hücrelerde veya doku moleküllerinde bulunan iyon kabul eden grupların varlığından kaynaklanmaktadır.

Son olarak, histokimyasal reaksiyonların amacı, bunu boyama yoluyla gösterebilmektir. En büyük biyolojik yapılardan en küçük doku ve hücrelere. Bu, boyaların kimyasal olarak dokuların, hücrelerin veya organellerin molekülleri ile reaksiyona girmesi sayesinde sağlanabilir.

Soruşturma

Histokimyasal reaksiyon, dokunun sabitlenmesi, gömülmesi ve kesilmesi gibi tekniğin uygulanmasından önceki aşamaları içerebilir. Bu nedenle, bu adımlarda tespit edilecek yapının, mevcut olsa bile yanlış negatif sonuçlar verecek şekilde zarar görebileceği dikkate alınmalıdır.

Buna rağmen, uygun şekilde gerçekleştirilen dokunun önceden fiksasyonu, otolizi veya hücre yıkımını önlediği için önemlidir. Bunun için, formaldehit veya glutaraldehit gibi organik çözücülerle kimyasal reaksiyonlar kullanılır.

Kumaşın katılması, kesildiğinde sıkılığını koruyacak ve böylece deforme olmasını önleyecek şekilde yapılır. Son olarak, numunelerin optik mikroskopi ile incelenmesi için bir mikrotom ile kesim yapılır.

Ek olarak, histokimyasal boyama ile devam etmeden önce, her test grubuna harici veya dahili pozitif kontrollerin dahil edilmesi önerilir. Çalışılacak yapılar için özel boyaların kullanımı kadar.

Histokimyasal lekeler

Histokimyasal tekniklerin ortaya çıkışından günümüze kadar, en sık kullanılanlar dahil olmak üzere çok çeşitli lekeler kullanılmıştır: Periyodik asit Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen ve Gram.

Benzer şekilde, diğerleri arasında Hindistan mürekkebi, orcein veya Masson trikrom boyası gibi diğer boyalar daha az sıklıkla kullanılmıştır.

Periyodik Asit Schiff (PAS)

Bu renklendirme ile glikojen ve müsin gibi yüksek karbonhidrat içeriğine sahip moleküller gözlemlenebilir. Bununla birlikte, mantar ve parazitler gibi mikroorganizmaların tanımlanmasında da faydalıdır. Deri ve diğer dokulardaki belirli yapılara (bazal membran) ek olarak.

Bu boyamanın temeli, boyanın yakınlardaki iki hidroksil grubu arasındaki karbon bağlarını oksitlemesidir. Bu, aldehit grubunun salınmasını sağlar ve bu, mor bir renk vererek Schiff reaktifi tarafından tespit edilir.

Schiff reaktifi, bazik fuksin, sodyum metabisülfit ve hidroklorik asitten oluşur; bu bileşenler, aldehit grupları mevcut olduğunda mor renklenmeden sorumludur. Aksi takdirde renksiz bir asit üretilir.

Renklendirmenin yoğunluğu, monosakaritlerde bulunan hidroksil gruplarının miktarına bağlı olacaktır. Örneğin mantarlarda, bazal zarlarda, müsinlerde ve glikojende renk kırmızıdan mora dönebilirken, çekirdek maviye boyar.

Grocott

Parafine gömülü dokularda mantarların tanımlanmasında duyarlılığı en yüksek lekelerden biridir. Bu, çeşitli mantar yapılarının tanımlanmasını sağlar: diğerleri arasında hifler, sporlar, endosporlar. Bu nedenle mikoz tanısı için rutin bir leke olarak kabul edilir.

Özellikle sırasıyla Pneumocystis ve Aspergillus cinslerinin bazı mantarlarının neden olduğu pnömositoz ve aspergilloz gibi pulmoner mikozların teşhisinde kullanılır.

Bu çözelti, gümüş nitrat ve kromik asit içerir, ikincisi sabitleyici ve renklendiricidir. Gerekçe, bu asidin, mantar yapılarında, örneğin mantarların hücre duvarında bulunan mukopoliakaritler tarafından hidroksil gruplarının aldehitlere oksidasyonunu üretmesidir.

Son olarak, çözeltide bulunan gümüş, aldehitler tarafından oksitlenir ve argentafin reaksiyonu adı verilen siyah bir renklenmeye neden olur. Açık yeşil gibi kontrast boyalar da kullanılabilir ve böylece mantar yapıları açık yeşil arka plan ile siyah renkte gözlenebilir.

Ziehl-Neelsen

Bu boyama, Nocardia, Legionella ve Mycobacterium cinsleri gibi bazı mikroorganizmalarda kısmen veya tamamen asit-alkol direncinin varlığına dayanmaktadır.

Bu lekenin kullanılması tavsiye edilir, çünkü daha önce bahsedilen mikroorganizmaların hücre duvarı boyaların nüfuz etmesini engelleyen kompleks lipidler içerir. Özellikle solunum yollarından alınan örneklerde.

İçinde karbol fuksin (bazik boya) gibi kuvvetli boyalar kullanılır ve mikroorganizmanın boyayı tutabilmesi için asit ve alkollerle renk değiştirmemesi için ısı uygulanır. Son olarak, rengi bozulmuş yapıları renklendirmek için bir metilen mavisi solüsyonu uygulanır.

Kırmızıya boyanan yapılarda asit-alkol direncinin varlığı gözlenirken, solmaya karşı direnç göstermeyen yapılar maviye boyanmıştır.

Gram ve çince mürekkebi

Gram, diğerleri arasında bakteri ve mantar enfeksiyonlarının teşhisinde çok faydalı bir lekedir. Bu boyama, Gram-pozitif ve Gram-negatif mikroorganizmalar arasında ayrım yapmayı mümkün kılarak, hücre duvarının bileşiminde var olan farklılıkları açıkça gösterir.

Hindistan mürekkebi, polisakkarit (kapsül) içeren yapıları kontrastlamak için kullanılan bir lekedir. Bunun nedeni, Cryptococcus neoformans'ta mümkün olan ortamda bir halka oluşmasıdır.

orcein

Bu boyama ile çeşitli hücrelerin elastik lifleri ve kromozomları renklendirilerek ikincisinin olgunlaşma sürecinin değerlendirilmesine izin verilir. Bu nedenle sitogenetik çalışmalarda çok faydalı olmuştur.

Bu, çok çeşitli hücrelerin çekirdeklerinde bulunan DNA gibi moleküllerin negatif yükü tarafından boyanın alımına dayanır. Yani bunlar maviden koyu maviye boyanmış.

Masson trikromu

Bu leke, bazı mikroorganizmaları veya melanik pigmentler içeren materyalleri tanımlamak için kullanılır. Dematiaceous mantarların, feohifomikozun ve siyah taneli eumycetom'un neden olduğu mikozlar budur.

Son düşünceler

Son yıllarda, histokimyanın dahil olduğu, ancak diğer temeller veya ilkelerle bağlantılı olduğu yeni teşhis tekniklerinin yaratılmasında birçok ilerleme olmuştur. Bu tekniklerin, immünohistokimya veya enzimohistokimya durumunda olduğu gibi farklı bir amacı vardır.

Referanslar

1. Acuña U, Elguero J. Histoquímica. An. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Kullanılabilir: are.iqm.csic.es
2. Mestanza R. 2015 yılında Eugenio Espejo İhtisas Hastanesi Patolojik Anatomi Servisinde mikroorganizmaların tanımlanmasında kullanılan PAS, Grocott ve Ziehl-Neelsen histokimyasal boyalarının sıklığı .. Ekvador Merkez Üniversitesi, Quito; 2016. Şu adresten ulaşılabilir: dspace.uce.edu
3. Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histokimya, litsea yaprağı ve ahşabın toplam fenol içeriği ve antioksidan aktivitesi glaucescens Kunth (Lauraceae). Orman ve Ormanlar. 2014; 20 (3): 125-137. Redalyc.org adresinde mevcuttur
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Tıbbi ilgi alanı Tarenaya hassleriana'nın (Cleomaceae) anatomisi ve histokimyası. Latin Amerika ve Karayipler Tıbbi ve Aromatik Bitkiler Bülteni 2016; 15 (3): 182-191. Redalyc.org adresinde mevcuttur
5. Bonifaz A. Temel tıbbi mikoloji. 4. baskı. Meksika: McGraw-Hill Interamericana editörleri, SA de CV 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. Dilin iğsi hücreli skuamöz hücreli karsinomunun Clinico patolojik ve immünohistokimyasal analizi: nadir bir vaka. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): eRC4610. Kullanılabilir: scielo.br