KONGO KIRMIZISI: ÖZELLIKLER, HAZIRLIK VE UYGULAMALAR - BIYOLOJI - 2025

Congo kırmızısı, bir diazonyum tuzu ve bir aktif aromatik halka bağlanmasıyla oluşan proteinler için bir azo boyadır. Bu madde, görünür spektrumdaki elektromanyetik radyasyonu absorbe etme kabiliyetine sahiptir, bu nedenle yoğun bir renge sahiptir.

Negatif ücretlidir. Bu nedenle, belirli protein maddeleri gibi pozitif yüklü hücresel bileşenlere karşı bir afiniteye sahiptir. Rengi pH'a göre değişir. Bu anlamda, ortam asidik ise (<pH3'ten), renk yoğun mavidir. PH3 - pH 5,2 arasında fuşyadır (dönen bölge) ve> pH 5,2 ile renk koyu kırmızıdır.

Susuz Kongo Kırmızısı ve Kongo Kırmızısı koloidal çözeltisi. Kaynak: Pixinio.com ve Wikipedia.com

Birden fazla kullanımı olduğu için çok yönlü bir maddedir. Tekstil endüstrisinde ve ayrıca hücreler ve kumaşlarda renklendirici olarak kullanılmıştır.

Ayrıca, bir pH göstergesi olarak, spektrofotometrelerin düzgün işleyişinin değerlendirilmesinde, biyofilm oluşumu çalışmasında veya amiloidlerin teşhisinde kontrol maddesi olarak enzimatik eylemi ölçen kültür ortamı yapmak.

Benzer şekilde, duvarlarındaki spesifik yapıları (lipopolisakkaritler) tanımlayarak bakteri ve mantar serotiplerini ayırt etmeyi mümkün kılmıştır.

Kongo kırmızısının özellikleri

Bu madde 1884 yılında Böttiger tarafından keşfedilmiştir. Benzidinin bis-diazoik asidinin naftiyonik asit ile oluşturduğu bir diazonyum türevidir. Congo kırmızısı molekülü 21 Armstrong ölçmektedir ve moleküler ağırlık yaklaşık 8000 g / mol'dür.

Congo kırmızısı suda ve hatta etanol gibi organik çözücülerde çözülebilmesiyle bir koloidal çözelti oluşturmasıyla karakterizedir.

Selüloza, amiloid dokuya ve pozitif yüklü hücresel bileşenlere afinitesi vardır.

Hazırlık

Kongo Kırmızısı, kullanılacak tekniğe bağlı olarak farklı konsantrasyonlarda hazırlanır. Çoğu, diğerleri arasında% 1,% 2,% 0,1 oranında Kongo kırmızısını kullanır.

Örneğin,% 2 Kongo kırmızısı hazırlamak için 2 g kurutulmuş gıda boyası tartılmalı ve 100 ml damıtılmış su eklenmelidir. Daha sonra kehribar renkli bir şişede tutulur.

Uygulamalar

Tekstil endüstrisinde renklendirici olarak

Bir süredir pamuğa sabitlenmesi nedeniyle tekstil endüstrisinde yaygın olarak kullanılıyordu, ancak şu anda kanserojen olduğu için ve ayrıca renk stabil olmadığı için sürtünme ile rengi solduğu için kullanılmıyor.

Biyofilm oluşturma kapasitesinin belirlenmesi

Mikroorganizmaların biyofilm oluşturma kapasitesinin bir virülans faktörü olduğu gösterilmiştir.

Bu anlamda Kongo kırmızısı boyası, biyofilm oluşumunun belirlenmesi için bir yöntem olarak kullanılmaktadır. Congo kırmızısı, biyofilmde bulunan ekzopolisakkaritlere bağlanır. Bununla birlikte, diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, ortaya çıkan yüksek yanlış negatifler nedeniyle en az önerilen yöntemdir.

Yöntemde Congo kırmızı agar kullanılır, bu bir baz olarak kanlı agar, glikoz (10 g / l) ve Congo kırmızı boyadan (0,4 g / l) oluşur. Değerlendirilecek suşlar ortama ekilir ve 24 saat 37 ° C'de inkübe edilir ve ardından oda sıcaklığında 48 saat inkübe edilir.

Siyah renkli ve kuru görünüme sahip kristalli koloniler gözlenirse, pozitif bir test kanıtlanır.

Spektrofotometrelerin kalite kontrolü

Absorbans veya işlem ölçüm ekipmanının uluslararası düzenlemelerle belirlenen fotometrik parametrelere uygun olup olmadığını değerlendirmek için, ekipmanın kabul edilebilirlik aralıkları dahilinde sonuçları yayıp yaymadığını belirlemek için basit bir teknik kullanılabilir.

Değerlendirme tekniklerinden biri, izosbestik noktaya dayalı olarak Kongo kırmızısını kullanmaktır.

İzosbestik nokta, Kongo kırmızısının pH, konsantrasyon ve sıcaklıktan bağımsız olarak aynı soğurmayı yaydığı dalga boyudur. Absorbans değeri sabittir ve referans olarak kullanılabilir.

Kongo kırmızısının teorik izosbestik noktası 541 nm olarak bilinir. Elde edilen değer farklıysa, ekipmanın dalga boyu kayması problemleri olduğu ve uzman bir teknisyen tarafından kontrol edilmesi gerektiği bilinmektedir.

Kültür ortamının hazırlanması

Ortiz ve diğerleri, selülit mikrobiyal suşlarını saptamak için Kongo kırmızı boyası ve CMC agar olarak adlandırılan karboksimetilselüloz ile hazırlanan bir kültür ortamını tarif eder; yani selülaz üreticileri (endoglukonezler, ekzoglukanazlar ve ß-glukozidaz).

Bu ortam yoğun bir renklenmeye sahiptir. Renk, karboksimetilselülozun yapısını bozan endoglukanaz enziminin etkisiyle dağılacaktır. Bu olumlu bir tepki olduğunu gösteriyor.

Viskozite ve absorbanstaki azalma, enzim aktivitesinin ölçülmesine izin verir. Örneğin, Streptomyces sp.

Mikroorganizmaların tanımlanması

Congo kırmızısı, belirli suşların polisakkarit yapıları için bir afiniteye sahiptir, bu nedenle bu mikroorganizmaların tanımlanmasını sağlar. Bunlar arasında Escherichia coli ve Shigella flexneri vardır.

Kongo kırmızısı agar plakaları da diğerleri arasında kırmızı kırmızı koloniler veren Azospirillum sp'de olduğu gibi karakteristik koloniler elde etmek için kullanılır.

Hücre ve doku lekesi

Kongo kırmızısının en yaygın uygulamalarından biri amiloidoz tanısındaki faydasıdır. Bu garip hastalık, çeşitli organlarda anormal bir proteinin hücre dışı birikiminden oluşur. Bu anormal protein kemik iliğinde yapılır ve amiloid olarak adlandırılır.

Kongo kırmızısı bu maddeye yüksek afiniteye sahiptir. Bu özellik, histolojik doku kesitlerinde varlığını göstermek için kullanılmıştır. Kongo Kırmızısı, bu amaçla Hematoksilen / Eosin ile birlikte kullanılır.

Amiloid doku ve Kongo kırmızısının birleşmesi, karboksil grupları ve amino grubu arasındaki polar olmayan hidrojen bağları yoluyla gerçekleşir. Amiloid proteini, karboksil gruplarını (COOH) ve Kongo kırmızısını amino grubunu sağlar.

Amiloid doku, ışık mikroskobu altında görüldüğünde pembeden koyu kırmızıya kadar çeşitli tonlarda renklendirilir. Çift polarize ışıklı mikroskoplarda, bu preparatlar patognomonik bir elma yeşili çift kırılma ile gözlenir.

Yani, amiyeloid lifler anizotropik olduğu için dikroizm sergilerler. Bu gözlem tanıyı doğrular.

Congo kırmızısı ile doku boyama, immünositokimyasal yöntemler gibi diğer tanı yöntemleriyle uyumludur ve hatta yeniden renklendirilebilir.

PH göstergesi olarak

PH değişikliklerine karşı dönme özelliği, kromoendoskopi adı verilen teknikle kullanılır.

Bu teknik, belirli patolojilerin tespitine izin veren renklendiriciler ve pH göstergeleri kullanır. Bunlar arasında asitlik belirteci olarak kullanılan, mide mukozasındaki erken kanser odaklarını ortaya çıkarabilen Kongo kırmızısının kullanımı da var.

Teknik, asit pH değerinde Kongo kırmızısının siyah olması gerçeğine dayanmaktadır. Bu nedenle mide mukozasının üzerine Kongo kırmızısı solüsyonu yerleştirildikten sonra solukluk olan alanlar biyopsi için örnek almak için yani asit üretiminin olmadığı alanlar seçilecektir. Bu, kanserli bir odağın varlığını veya paryetal hücrelerin kaybını gösterir.

Referanslar

1. "Kongo Kırmızısı." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 8 Mayıs 2019, 12:13 UTC. 16 Mayıs 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
2. Ortiz M, Uribe D. Selüloz-Kongo kırmızı kompleksine dayalı endoglukanaz aktivitesinin nicelendirilmesi için yeni yöntem. Orinoquia. 2011 Haziran; 15 (1): 7-15. Scielo.org adresinden ulaşılabilir.
3. Peña J, Uffo O. Küba'da sığır mastitinden izole edilen Staphylococcus aureus genotiplerinde biyofilm üretimi. Rev Salud Anim. . 2013 Aralık; 35 (3): 189-196. Mevcut: scielo.s
4. Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G ve diğerleri. Tanısal bir anahtar olarak sistemik amiloidozun kutanöz belirtileri: Klinik vaka. Rev. medic. Şili. 2012 Nisan; 140 (4): 499-502. Mevcut: scielo.
5. Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometreler ve Fotocolorimetreler Pratik güncelleme kılavuzu. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2005, 39 (Eylül-Aralık): Redalyc.org adresinden ulaşılabilir
6. Helicobacter pylori enfeksiyonunda Marín J, Díaz J ve Solís J. Kromoendoskopi: reaksiyon zamanı mı? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
7. Fieser L, Fieser M. 1985. Organik kimya. Editoryal Reverté. Barselona, ​​İspanya. Books.google.co.ve adresinde mevcuttur
8. Murillo M. Histolojik doku boyama teknikleri. Guadalajara Üniversitesi, Meksika. Academia.edu adresinde mevcuttur
9. Paillié M. Beyaz yoncanın rizosferik toprağından izole edilen Aktinobakterilerin selülolitik, ligninolitik ve amilolitik aktivitesinin belirlenmesi (Trifolium repens). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Fen Fakültesi Endüstriyel Mikrobiyoloji Bogotá DC Erişim: repository.javeriana.edu.co
10. Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R ve Baldani V. Azospirillum sp. Cesar Vadisi'nden Gine çimeninde (Panicum maximum Jacq.). Meralar ve Yemler, 2010; 33 (3): 1-8 Mevcut: scielo.