Rose Bengal , bruselloz tanısı için antijen-antikor reaksiyonuna dayanan bir laboratuvar testidir. Teknik, insan serum örneklerinde Brucella abortus bakterisine karşı spesifik antikorların tespitine izin verir. Sonuç, niteliksel veya yarı niceliksel olarak raporlanabilir.
Niteliksel form, hastanın test için pozitif veya negatif olup olmadığını, yani antikor olup olmadığını ifade eder. Bu arada, yarı kantitatif rapor IU / ml cinsinden rapor edilir ve mevcut antikorların yaklaşık miktarını gösterir. Antikorların yalnızca hasta mikroorganizma ile temas halinde olduğunda üretileceğine dikkat edilmelidir.
Bir aglütinasyon plakasında Rose Bengal reaksiyonu. Kaynak: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY videodan alınmıştır
Büyük basitliği, yüksek duyarlılığı ve özgüllüğü nedeniyle, bu hastalığın teşhisi için başlangıç testi olarak tıpta en çok kullanılan seroaglütinasyon tekniklerinden biridir.
Bazı araştırmacılar Rose Bengal testinin etkinliğini seroaglütinasyon (ateşli antijenler) gibi diğer tekniklerle karşılaştırmış ve iyi bir korelasyon olmasına rağmen ateşli antijen testinin negatif olduğu izole vakalar gördüklerini ve Rose de Olumlu işaret fişeği.
Elde edilen fark, bu hastaların asidik pH'ta daha iyi bağlanma kapasitesine sahip Brucella abortus'a karşı bir IgG antikorları alt sınıfına sahip olmaları, bu nedenle Rose Bengal reaktifi ile reaksiyona girebildikleri ancak ateşli antijenlerle reaksiyona giremeyecekleri gerçeğiydi.
Bu anlamda, ateşli antijen tekniğinin reaktiflerinin, bu tür bir vakayı tespit edebilmeleri için asidik bir pH'a değiştirilmesini önerdiler.
temel
Rose Bengal Reaktifi, bir antijenik süspansiyondan oluşur. Asidik laktat tamponunda (pH 3.6) seyreltilmiş S99 Brucella abortus suşu, artı fenol ve Rose Bengal boyasından oluşur.
Bu nedenle, numunede aranan şey anti-Brucella antikorlarıdır, bunlar mevcutsa, reaktif antijeni ile reaksiyona girecek ve makroskopik olarak görünür bir aglütinasyon reaksiyonu gözlemlenecektir. Test, IgM antikorlarını veya IgG antikorlarını saptar.
Bu, hastalığı hem IgM antikorlarının hakim olduğu akut aşamasında hem de IgG antikorlarının baskın olduğu kronik aşamasında tespit edebileceği anlamına gelir.
Bu, testin duyarlılığını arttırdığı için bir avantajdır, ancak aynı zamanda, IgM ve IgG antikorları ile reaksiyon aynı olduğundan, bir aşama ile diğerini ayırt etmediği için bir dezavantajdır.
Test her zaman bir negatif kontrol ve bir pozitif kontrol ile birlikte yapılmalıdır. Negatif kontrol, antikor içermeyen hayvan serumu içerir ve pozitif kontrol, 50 IU / ml anti-Brucella antikorları ile hayvan kaynaklı serum içerir.
Kullanım
Bruselloz, kronik ve tehlikeli olma eğiliminde olan ciddi bir hastalıktır, bu nedenle erken teşhis edilmesi çok önemlidir. Bu bir zoonozdur ve insanlar kontamine materyalle doğrudan temas yoluyla enfekte olabilir, en savunmasız insanlar veteriner hekimler ve hayvan bakıcılarıdır.
Enfeksiyon, diğer enfeksiyon türlerinin yanı sıra enfekte çiğ et yemekten de kaynaklanabilir.
Bu hastalık yerel veya sistematik olarak saldırır. Sistemik form en ciddidir çünkü retikulum endotel sistemi (karaciğer, dalak, kemik iliği), deri (selülit ve lenfadenopati), solunum sistemi (pnömoni), kas-iskelet sistemi (artrit) dahil olmak üzere çeşitli organlar etkilenebilir. sakroiliit ve spondilit), diğerleri arasında.
Rose Bengal testi, ilk taramayı gerçekleştirmek için çok faydalı bir tekniktir çünkü çok ucuzdur, kullanımı kolaydır ve büyük bir özgüllüğü ve hassasiyeti vardır.
Yanlış negatif ve yanlış pozitif vakaları çok nadirdir ve çok düşük antikor titreleri (<25 IU / ml) veya aşırı yüksek (> 1000 IU / ml) olan kişilerde ortaya çıkabilir.
süreç
malzemeler
-Gül Bengal Takımı
-Ağlama plakası beyaz zemin
-50 µl pipet
Döndürücü (isteğe bağlı)
-Vorteks
Teknik (kalitatif yöntem)
Ticari Rose Bengal kitleri, kullanıma hazır reaktiflerle birlikte gelir.
-Çalışmaya başlamadan önce reaktifleri ısıtın.
- Aglütinasyon plakalarında, her biri farklı bir numune için çizilmiş daireler vardır. Birincisi negatif kontrol için, ikincisi numune için ve üçüncüsü pozitif kontrol için olmak üzere 3 daire kullanın.
-Kontrollerden ve numuneden bir damla veya 50 µl yerleştirin.
-Bir girdap kullanarak Rose Bengal reaktifini karıştırın. Önceden yerleştirilmiş olanların yanına bir damla koyun.
- Tahta kürdan ile karıştırın (her numune veya kontrol için bir tane kullanın). Dairesel hareketler yapın ve tüm daireyi kaplayacak şekilde yayın.
Kaynak: Videodan alınan görüntüler: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Düzenlenmiş resim düzeni.
-Plakayı 80 ila 100 RPM'de otomatik bir döndürücüye yerleştirin veya 4 dakika boyunca manuel olarak döndürün. Bu sürenin sonunda ispatı okuyun.
-Kontrollerin beklendiği gibi verdiğini doğrulayın. Test numunesinin reaksiyonunu kontrollerle karşılaştırın. Aglütinasyon gözlenirse pozitif, aglütinasyon yoksa negatif olarak bildirin.
Pozitif bir test, hastanın 25 IU / ml anti-Brucella antikorlarına eşit veya daha yüksek bir miktara sahip olduğunu gösterir.
Pozitif (aglütinasyonlu) ve negatif (aglütinasyonsuz) reaksiyonun yorumlanması. Kaynak: Citrulline. Düzenlenmiş görüntü.
Teknik (yarı niceliksel)
Niteliksel reaksiyonda numune güçlü bir şekilde pozitifse, yarı nicelleştirilebilir. Bunun için fizyolojik salin solüsyonu ile numunenin seri çift seyreltileri yapılır. Daha önce açıklanan prosedür, her seyreltme ile gerçekleştirilir.
Ayrıca aglütinasyon makroskopik olarak gözlemlenerek yorumlanır. Sonuç, pozitif bir sonucun gözlendiği en yüksek seyreltmenin titresi olacaktır.
Anti-Brucella antikorlarının yaklaşık değerini hesaplamak için aşağıdaki formül kullanılır:
25 IU / ml x reaksiyon titresi = IU / ml
Örneğin, yarı kantitatif testteki bir hasta ½, ¼ ve 1/8 dilüsyonda pozitif test ederse ve 1/16 dilüsyondan itibaren negatif olmaya başlarsa bu, hastanın titresi 8 olduğu anlamına gelir. .
Formülü uygulamak:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
- Kitlerin bir son kullanma tarihi vardır ve bunlara uyulmalıdır. Reaktifin son kullanma tarihi geçmişse kullanılmamalıdır.
-Kullanım sırasında reaktifin katı partiküller içermediğinden emin olun, çünkü bu bir bozulma belirtisidir.
-2 ile 8 ° C arasında tutun
-Dondurmayın, bu eylem reaktife telafi edilemeyecek şekilde zarar verir.
-Testi her zaman negatif ve pozitif kontrollerle birlikte gerçekleştirin.
-Teknik serum örneklerini belirli bir derecede lipemi ve hemoliz ile tolere eder, ancak aşırı lipemik ve hemolizli serumların kullanılması tavsiye edilmez, her iki koşul da testin sonuçlarını değiştirir.
-Analize başlamadan önce reaktifleri daima oda sıcaklığına getirin.
-Önerilen süreden daha uzun süren reaksiyonları yorumlamayın, çünkü bu yanlış pozitif raporunu oluşturur, çünkü belirli bir süre sonra reaktif çökelerek pozitif bir reaksiyonu simüle eder.
-Teknik% 100 duyarlıdır ve% 98 özgüllüğü vardır.
- 1000 IU / ml'lik yarı kantifikasyondan sonra bir prozon etkisi gözlemleme olasılığı vardır (antijen miktarına kıyasla fazla antikora bağlı yanlış negatif).
Referanslar
- Rubio M, Barrio B ve Díaz R. Serum aglütinasyonunun negatif olduğu insan bruselloz vakalarını teşhis etmek için Rosa de Bengala, Coombs ve karşı immünoelektroforez testlerinin değeri. Mikrobiyoloji Bölümü. Klinik Mikrobiyoloji Hizmeti. Üniversite Kliniği. Navarra Üniversitesi. 406-407. Mevcut: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Bruselloz." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 6 Aralık 2019, 14:37 UTC. 18 Ara 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratuvarları. Monlab Bengal Gülü - test. 2016. Monlab.es/ adresinden ulaşılabilir
- Carrillo C, Gotuzzo E. Bruselloz. Rev. Peru. Med Exp. Halk Sağlığı 1997; 14 (1): 63-66. Mevcut: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Brusellozlu bir ailenin klinik, serolojik ve polimeraz zincir reaksiyonu takibi. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Mevcut: scielo.conicyt.