VOGES-PROSKAUER TESTI: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Voges-Proskauer testi Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin tanımlanmasında yardımcı olmak için kullanılan bir biyokimyasal bir testtir. Diğerlerinin yanı sıra Escherichia coli suşlarını Klebsiella ve Enterobacter'den ayırmak için özellikle yararlıdır.

Test, daha iyi RM ​​/ VP kısaltmasıyla bilinen Metil Kırmızısı - Voges Proskauer adlı sıvı bir kültür ortamında gerçekleştirilir. Bu ortam tamponlu polipepton, glikoz, dipotasyum fosfat ve damıtılmış sudan oluşur.

Metil Kırmızı-Voges Proskauer (RM / VP) ticari besiyeri / VP testi sırasıyla pozitif ve negatif. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, Wikimedia Commons'tan

Mevcut RM / VP ortamı, orijinal olarak daha düşük bir pepton ve glikoz konsantrasyonu içeren Clark ve Lubs ortamının bir modifikasyonudur. Böylece, pozitif Voges-Proskauer reaksiyonu için gerekli olan hidrojen iyonunun daha azı üretildi.

Test, mikroorganizmanın butilen-glikol yoluyla glikoz kullanma ve oksijen ve alkalin pH varlığında asetoin adı verilen nötr bir nihai ürün oluşturma yeteneğine dayanmaktadır.

RM / VP ortamında, Voges-Proskauer testini ortaya çıkarmanın yanı sıra metil kırmızısı testi de ortaya çıkarılabilir.

temel

Voges-Proskauer test temeli

Besiyerinde bulunan pluripeptonlar, bakteri üremesi için temel besin gereksinimlerini sağlar. Glikoz, ana bileşiktir. Birçok bakteri glikozu metabolize etme ve pirüvik asit oluşturma yeteneğine sahiptir.

Piruvik asit, glikoz metabolizmasında bir orta noktadır ve buradan her mikroorganizma farklı yollar izleyebilir. Bazıları laktik asit, asetik asit, formik asit ve süksinik asit gibi karışık asitler oluşturacak ve diğerleri 2,3-butandiol gibi nötr ürünler oluşturacaktır.

Voges-Proskauer testi, mikroorganizmanın aerobik koşullar altında 2,3-bütandiolün bir ara ürünü olan asetil metil karbinol (asetoin) oluşturma yeteneğini ortaya koymaktadır.

Asetoin indirgenir ve 2,3-butandiol oluşturur, ancak bu reaksiyon tersine çevrilebilir, bu nedenle 2,3-butandiol oksitlenirse asetoin oluşur. Bu nedenle oksijen önemlidir.

Dipotasyum fosfat, karışımı pH 6,9 ± 0,2'de tamponlayan tampondur.

Kanıt açıklama ve yorumlama temeli

Reaksiyonu göstermek için, Voges A ve Voges B olarak bilinen iki reaktif (Barrit reaktifleri) kullanılarak bir geliştirme gerçekleştirilmelidir.

Voges A,% 5 a-naftol çözeltisidir ve Voges B,% 40 potasyum hidroksit preparatıdır. Potasyum hidroksit mevcut değilse,% 40 sodyum hidroksit ile değiştirilebilir.

Α-Naftol, reaksiyon renginin yoğunluğunu artırarak testi daha hassas hale getirecek bir katalizördür. Α-naftol her zaman önce eklenmeli ve ortam oksijenle temas edecek şekilde tüp sallanmalıdır. Bu şekilde, mevcut asetoin diasetile oksitlenir ve 2,3-butandiol, asetoini oluşturmak için oksitlenir ve bunu diasetile geçirir.

Bu, α-naftolün diasetile bağlanma şeklidir, bu da amino asit arginininde bulunan guanidin çekirdeğine katılır, ikincisi pluripeptonlardan gelir.

Kendi payına, potasyum ya da sodyum hidroksit CO emici sorumludur ₂ ve peptonlar ile reaksiyona sokulmasını içerir. Bu reaksiyon, tüpü çok iyi çalkaladıktan sonra açıkça görülebilen somon pembesi renginin oluşmasına neden olur.

Rengin anında oluşması için doğru miktarlarda diasetil, pepton ve α-naftol karıştırılmalıdır. Bu olmazsa, yorumlamadan önce tüpün 15 dakika dinlenmesine izin verilir.

Test genellikle soluk pembe bir renk görülebildiğinde 2-5 dakika sonra pozitiftir. 30 dakika ile 1 saat arasında bekletilirse, rengin yoğunluğu maksimum olacaktır (yoğun kırmızı).

Et suyu sararınca negatif bir test görünecektir. 1 saat sonra test negatif çıkarsa, potasyum hidroksitin α-naftol üzerindeki reaksiyonu sonucunda bakır rengi oluşabilir.

Hazırlık

Orta MR / VP

Susuz kültür ortamının 17 gramını tartın ve bir litre damıtılmış suda çözün. 5 dakika bekletin. Tamamen çözünmesi için kaynatın. Tüplerde 3 ila 4 ml servis yapın ve otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Susuz kültür ortamı bej renklidir ve hazırlanan ortam açık kehribar rengindedir.

Ortamın nihai pH'ı 6.9 ± 0.2'dir.

Voges A reaktifi

5 g α-naftol tartın ve 50 ml etil alkol (mutlak) içinde çözün. 100 ml'ye ulaşana kadar etil alkol eklemeye devam edin.

Voges B reaktifi

40 g potasyum hidroksit tartılır ve bir beher içinde 50 ml distile su içinde çözülür. Sıcaklığı kontrol etmek için cam soğuk su banyosuna yerleştirilmelidir, çünkü preparat çözüldüğünde sıcaklık keskin bir şekilde yükselir.

Çözelti soğuduktan sonra volümetrik bir balona aktarılır ve distile su ile 100 mL'ye tamamlanır.

Voges-Proskauer test prosedürü

Voges-Proskauer testini gerçekleştirmek için, incelenen mikroorganizma ile 18 ila 24 saat saf bir kültürden bir RM / VP suyu aşılanır.

Aşı çok yoğun olmamalıdır. 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edilir, ancak bazen birkaç gün inkübasyon gerekebilir. Cowan ve Steel, Enterobacteriaceae ailesinin tüm pozitif Voges-Proskauer (VP) türlerini tespit etmek için gereken minimum inkübasyon süresinin 5 gün olduğu görüşündedir.

Test geliştirme

1 mL'lik bir bölüntüyü bir tüpe ayırın ve aşağıdaki şekilde geliştirin: 12 damla (0,6 mL) Voges A reaktifi ve 4 damla (0,2 mL) Voges B yerleştirin. Havalandırmak için karıştırın ve yerleşmeye bırakın Çevirmeden önce 5-10 dakika. Bununla birlikte, test hala negatifse, oturmasına izin verin ve 30 dakika ila 1 saat sonra tüpü gözlemleyin.

Pembemsi-kırmızı renk görünümü, Voges-Proskauer reaksiyonunun pozitif olduğunu gösterir. Ortam sarı kalırsa, reaksiyon negatiftir.

Yanlış negatiflerden kaçınmak için geliştiricileri belirtilen sıra ve miktarda eklemek çok önemlidir.

Kullanım

Voges-Proskauer testi, diğerleri arasında VP pozitif olan Klebsiella, Enterobacter, Serratia cinslerinin VP negatif olan E. coli suşlarını ayırt etmek için faydalıdır.

Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.

QA

Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium ve Enterobacter cloacae ATCC 13047 dahil olmak üzere hazırlanan ortamın kalitesini test etmek için kontrol suşları kullanılabilir.

Beklenen sonuçlar, yalnızca K. pneumoniae ve E. cloacae için pozitif Voges-Proskauer reaksiyonlarıdır. Gerisi olumsuz tepkiler veriyor.

Referanslar

1. Britannia Laboratuvarları. MR-VP Orta. 2015. Şu adresten ulaşılabilir: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratuvarları. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Mevcut: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.