KAPSÜL BOYAMA: MANTIK VE TEKNIKLER - BIYOLOJI - 2025

Boyama kapsül kapsül denir bazı bakteri ve maya çevreleyen stres polisakarit yapının özelliğine sahip bir diferansiyel boyama tekniğidir. Kapsüllü mikroorganizmaların neden olduğu belirli patolojilerin teşhisine yardımcı olmak için klinik laboratuvarlarda kullanılır.

Bu morfolojik yapının sağlık bilimleri kariyeri öğrencilerine gösterilmesi için laboratuarların öğretiminde de kullanılır, örneğin: tıp, biyoanaliz, hemşirelik veya sitoteknoloji.

Klebsiella pneumoniae smear kapsül boyası ile boyandı. Safranin ile çini mürekkebi yöntemi. Kaynak: А.А.В

Kapsülü barındıran mikroorganizmalarda kapsülün varlığını göstermek için birkaç basit teknik vardır, bunlar: negatif boya, Anthony boyası ve önceki ikisini birleştiren bir varyant.

Negatif boyama, Cryptococcus neoformans maya varlığından şüphelenildiğinde, CSF numunelerinde esas olarak kullanılır. Bu maya, menenjitin yaygın bir nedenidir.

Bu teknik, nigrosin veya çini mürekkebi kullanır ve preparatın arka planı ile mikroorganizmanın geçirilemez kapsülü arasında bir kontrast oluşturmaya dayanır. Arka plan kararır ve kapsül renksizdir. Bu şekilde bu yapı ortaya çıkar.

Anthony tekniği ile ilgili olarak, daha çok laboratuarların öğretiminde Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae ve Neisseria meningitidis gibi bakterilerdeki polisakkarit yapısını göstermek için kullanıldığı söylenebilir.

Bu mikroorganizmaların tanımlanmasına izin veren başka rutin testler olduğundan, bu tekniğin tanı amaçlı kullanımı çok nadirdir.

temel

Kapsül, polisakkarit yapısının güçlü bir yapısıdır. Bu, mikroorganizmaları fagositozdan korur ve bu nedenle nüfuz etmesi zor bir yapıdır.

Bu nedenle kapsül lekeleri kontrast esaslıdır. Renklendiriciler, kapsül renksiz kalırken preparatın tabanını boyar.

Bu nedenle, bu tekniklerle kapsül kolaylıkla tanınabilir. Mikroorganizmanın kapsülü yoksa bu tür bir renklendirme ile ayırt edilemeyecektir çünkü her şey aynı renkte boyanacaktır.

Kapsülü renklendirmek için kullanılan tüm teknikler, farklı boyalar ve prosedürler kullanılmasına rağmen aynı mantığa sahiptir.

Teknikler par

-Anthony lekesi

Anthony'nin lekesi, leke olarak kristal menekşe kullanıyor. Bu, bakteri gövdesini ve arka planı mor olarak boyayacaktır.

Öte yandan% 20 bakır sülfat kullanılmaktadır. Bu, bir yıkama solüsyonu olarak işlev görür, yani, fazla mor kristali preparasyondan çıkararak, kapsülleri berrak hale getirir, ancak bakteri gövdesi veya arka plan rengi kaybetmez.

malzemeler

- Yanardöner süt.

- Kaymak.

-% 1 mor kristal.

-% 20 bakır sülfat.

- Optik mikroskop.

- Daldırma yağı.

İşlem

Bu teknik şunlardan oluşur:

1. Mikroorganizmayı 36 saat yanardöner sütte yetiştirin.
2. Kültürün bir damlasını bir slaydın ucuna koyun ve yanına bir damla mor bardak koyun, karıştırın ve başka bir slaydın ucuyla yayın.
3. Havayla kurutun ve ısıtmayın.
4. % 20 bakır sülfat solüsyonu ile yıkayın, kurumaya bırakın.
5. Daldırma hedefi olan bir mikroskop altında gözlemleyin. Yayılmanın sonlarına doğru arayın.

Kapsüle zarar vereceği için ısıyı ne sabitlemek ne de kurutmak için kullanmamak önemlidir. Ayrıca su ile yıkamayın.

yorumlama

Yanardöner süt, mikroorganizmanın belirgin bir kapsül geliştirmesi için gerekli besinleri sağladığı için mükemmel bir kültür ortamıdır.

Öte yandan, yanardöner süt, bakteri gövdesi ile birlikte mor renkte boyanacak kalın ve kompakt bir taban oluşturacak, ancak mikroorganizmayı çevreleyen kapsül renksiz kalacaktır. Bu nedenle bakteri gövdesi çevresinde net bir hale gözlenir.

Anthony'nin lekesiyle boyanmış Klebsiella pneumoniae yaymasının mikroskobik gözlemi üzerine grafik gösterimi. Kaynak: Yazar MSc tarafından yapılmıştır. Marielsa Gil.

avantaj

Uygulanması basit bir tekniktir. Sabitleme gerektirmez.

Ayrıca, başka kültür ortamlarının da kullanılabileceği belirtilmelidir, ancak süt ortamı daha belirgin kapsüller sağlama avantajına sahip olduğu için tercih edilir.

Dezavantajları

Negatif boyamadan biraz daha fazla emek gerektiren bir tekniktir ve görselleştirilmesi, preparatın tamamen kurumasını beklemeyi gerektirir.

-Negatif boyama

malzemeler

- Slaytlar.

- Mikroorganizma içeren kültür ortamı.

- Çin mürekkebi veya nigrosin.

- Optik mikroskop.

- Fizyolojik salin solüsyonu.

İşlem

Lamel üzerine bir damla fizyolojik salin koyun ve mikrobiyal kültürün küçük bir bölümünü çözün. Hazırlığın çok kalın olmaması önemlidir. Sonra bir damla Çin mürekkebi veya nigrosin koyun ve karıştırın.

Daha sonra sıvıyı taşmadan preparatın üzerine bir lamel tabakası yerleştirilir. Önce 10X objektife odaklanıp sonra 40X'e geçerek mikroskop altında gözlemlenir.

Bu teknik, doğrudan CSF numunelerinde de kullanılabilir. Yani, bir damla mikrobiyal kültür yerleştirmek yerine, bir damla CSF yerleştirilir.

avantaj

Uygulanması basit bir yöntemdir ve aynı zamanda ucuzdur. Preparatın sabitlenmesini veya kurutulmasını gerektirmez.

Dezavantajları

Dezavantajı, preparat kurumadan önce mikroskop altında gözlemlenmesi gerektiğidir, çünkü bu olursa mikroorganizmalar büzülür ve bu da görselleştirmeyi zorlaştırır.

Öte yandan, analist deneyimsizse yanlış pozitifler ortaya çıkabilir, çünkü lökositler genellikle mayalarla karıştırılır.

Çin mürekkebi veya nigrosin tekniği ile maya kapsüllerinin gözlemlenmesi, kültürle gösterilinceye kadar Cryptococcus neoformans için olası bir tanı olarak düşünülmelidir.

Bunun nedeni, Candida ve Rhodotorula cinsi gibi Cryptococcus neoformans'ın yanı sıra diğer Cryptococcus türleri gibi, menenjit nedeni olabilecek başka mayaların da olmasıdır.

yorumlama

Kapsüllü mikroorganizmalar varsa, sıvı içinde yüzen şeffaf cisimlerle, kapsülün varlığını vurgulayan koyu bir arka plan gözlemlenecektir.

Cryptococcus neoformans kapsülü Çin mürekkebi ile boyandı. Kaynak: Fotoğraf Kredisi: İçerik Sağlayıcı (lar): CDC / Dr. Yalın haley

Hint mürekkebi tekniği

Bu teknik, nigrosin ile de yapılabilir. Daha önce açıklanan tekniklerin bir kombinasyonudur. Bu teknik, kristal menekşe ve Hint mürekkebi veya nigrosin kullanır.

Bakteri gövdesi, negatif yüklü olduğu için kristal menekşesinden mora döner, nigrosin ise smearın altını renklendirir. Bakterinin kapsülü varsa, mikroorganizmanın etrafında şeffaf bir hale olarak görünecektir.

Kristal menekşe, şu renklerden herhangi biri ile değiştirilebilir: safranin, bazik fuksin veya metilen mavisi.

malzemeler

- Mor cam.

- Nigrozin veya Hint mürekkebi.

- Slaytlar.

- Mikroskop.

İşlem

- Mikroorganizmayı bir kültür ortamında yetiştirin.

- Bir damla kültür damlasını bir slaydın sonuna koyun ve yanına bir damla kristal çini mürekkebi veya nigrozin koyun, karıştırın ve başka bir slaydın ucuyla yayın.

- Havayla kurutun ve ısıya sabitlemeyin.

- 1 dakika mor renkli kristal solüsyonla örtün, distile su ile ancak çok hassas bir şekilde (yumuşak jet) yıkayın, açık havada kurumaya bırakın.

- Daldırma hedefi ile mikroskop altında gözlemleyin. Yayılmanın sonlarına doğru arayın.

yorumlama

Mor bir bakteri gövdesi ve koyu bir arka plan görülecektir. Kapsül varsa bakteri etrafında renksiz görünecektir.

Referanslar

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Temel Mikrobiyoloji teknikleri. Bakterilerin gözlemlenmesi. Reduca (Biyoloji). Mikrobiyoloji Serisi. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Mikrobiyoloji laboratuvarındaki temel lekeler. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Medigraphic.com'da mevcuttur
3. Gil M. Negatif boyama: mantık, teknik, avantajlar ve dezavantajlar. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Kapsül Boyası: İlke, Prosedür ve Sonuçlar. 2019. Tıbbi Mikrobiyoloji Kılavuzu. Mevcut: microbeonline.com