KINYOUN BOYAMA: MANTIK VE TEKNIKLER - BIYOLOJI - 2025

Kinyoun boyama leke bakteriler için kullanılan bir boyama tekniği ve dirençli asit alkol parazitleri. Ziehl-Neelsen renklendirmesinin değiştirilmesinden doğmuştur; Her iki teknik de aynı şekilde yorumlanır, ancak iki unsurda farklılık gösterir: ana reaktifin hazırlanmasında ve Kinyoun tekniğinin ısı kullanmaması.

Bu nedenle soğuk modifiye Ziehl-Neelsen veya Kinyoun soğuk boyası olarak da bilinir. Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypical mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ve Cyclosporas cayetanensis boyamasında endikedir.

Cryptosporidium parvum, Kinyoun boyası ile boyandı. Punlop Anusonpornperm, Wikimedia Commons'tan

Nocardia'nın kısmen asit-alkole dirençli olduğu için bu teknikle zayıf bir şekilde boyandığını belirtmek gerekir, bu nedenle bu cins için metodolojide bir değişiklik vardır.

Buna karşılık, soğuk Kinyoun tekniği, Didier tarafından coccidia (Cryptosporidium parvum ve Isospora belli) ve microsporidia sporlarının (Enterocytozoon bieneusi ve Encephalitozoon intestinalis) saptanması için modifiye edilen trikrom tekniği ile birleştirilmiştir.

temel

Ana boyama reaktifi, mikobakterilerin ve bazı parazitlerin lipit bakımından zengin mumsu hücre duvarı (mikolik asitler) içinde bulunan karbolik asitlere bağlanma özelliğine sahip olan karbolfuksin veya karbol fuksindir.

Bu bağ, asit ağartıcı tarafından dengelenmez; bu nedenle mikroorganizmalar aside dirençli olarak tanımlanır.

Boyayı ısı ile sabitleyen Ziehl-Neelsen tekniğinin aksine, Kinyoun tekniğinde bu adım gerekli değildir, çünkü bu teknik için hazırlanan karbolik fuksin solüsyonu yüksek konsantrasyonda fenol içerir.

Fenol, hücre duvarındaki lipit materyalini çözerek karbolfuksin boyasının girmesine izin verir. Boya nüfuz ettikten sonra asit alkol yıkamasına rağmen sabit kalır.

Bu şekilde, aside dirençli mikroorganizmalar karakteristik kırmızı renge bürünürken, aside dirençli olmayan her şeyin rengi bozulur ve maviye boyanır.

Teknik

malzemeler

- Modifiye edilmiş carbol fuchsin.

- Alkol -asit.

- Metilen mavisi.

Kinyoun carbol fuchsin'in hazırlanması

- Temel fuşsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkol (% 95): 20 ml.

- Distile su: 100 ml.

Bazik fuksin sürekli karıştırılarak alkolde yavaşça çözülmelidir. Daha sonra kristalize fenol 56 ° C'de bir su banyosunda eritilir. Yukarıda hazırlanan fuksin çözeltisine çözüldükten sonra 8 ml eklenir.

Asit alkolün hazırlanması

- Konsantre hidroklorik asit: 3 ml.

- Etanol (% 95): 97 ml.

Ölçülmeli, birleştirilmeli ve karıştırılmalıdır.

Metilen mavisi kontrast boyasının hazırlanması

- Metilen mavisi: 0,3 gr.

- Distile su: 100 ml.

Tartılır ve çözülür.

Kinyoun boyama tekniği

1- Doğrudan numuneden balgam, akciğer sıvısı, idrar tortusu, beyin omurilik sıvısı veya dışkı olabilen bir smear hazırlayın; veya birincil kültür ortamında geliştirilen saf kolonilerden elde edilen bir mikroorganizma süspansiyonundan.

2- Sürüntüyü ısı ile sabitleyin.

3- Sürüntüyü boyama köprüsüne yerleştirin ve hazırlanan Kinyoun carbol fuchsin reaktifi ile kapatın. 3 ila 5 dakika dinlendirin.

4- Distile su ile yıkayın.

5- Asidik alkol ile 3 dakika ağartın ve tekrar distile su ile yıkayın.

6- Renk kalmayana kadar tekrar asit alkol ile 1-2 dakika ağartın.

7- Distile su ile yıkayın ve süzgeci dikey pozisyonda bırakarak süzün.

8- Preparatı metilen mavisi ile örtün ve 4 dakika etki etmesini bekleyin.

9- Distile su ile yıkayın ve kurumaya bırakın.

10- 40X ve ardından 100X'te inceleyin.

Aside dirençli mikroorganizmaların boyanmasını iyileştirmek ve hızlandırmak için, 30 veya 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin'e 1 damla ıslatıcı (Tergitol No. 7 gibi) ekleyin.

Bazı laboratuarlar metilen mavisi kontrast boyasını parlak yeşil veya pikrik aside dönüştürür; ilki arka plana yeşil bir renk verir ve ikincisi sarı bir renk oluşturur.

Nocardias için Özel Kinyoun Tekniği

Nocardia cinsine ait bakterilerin boyanmasını iyileştirmek için Kinyoun boyasının bir modifikasyonu kullanılır. Teknik aşağıdaki gibidir:

1- Smearı 3 dakika Kinyoun carbol fuşsin ile kapatın.

2- Distile su ile yıkayın.

3-% 3 oranında hazırlanan asit alkol ile artık renk kaybolmayana kadar kısaca renklendirin.

4- Distile su ile tekrar yıkayın.

5- Preparatı metilen mavisi ile örtün ve 30 saniye etki etmesini bekleyin.

6- Distile su ile yıkayın ve kurumaya bırakın.

Didier tarafından modifiye edilmiş birleşik karbol fuksin ve trikrom tekniği

Bu teknik, aynı zamanda coccidia ve Microsporidium sp sporları için dışkı örneklerinin analizi için önerilir. İzlenecek prosedür aşağıdaki gibidir:

1- Smearı 10 dakika Kinyoun carbol fuksin ile kapatın.

2- Renklendiriciyi çıkarın ve distile su ile yıkayın.

3- Hidroklorik asit alkol ile 30 saniye ağartın.

4- Distile su ile tekrar yıkayın.

5- Sürüntüyü trikrom solüsyonu ile 37 ° C'de 30 dakika kapatın.

6- Distile su ile yıkayın.

7- Asetik asit alkol ile 10 saniye ağartın.

8- Sürüntüyü% 95 etanol kullanarak 30 saniye yıkayın.

QA

Pozitif bir kontrol olarak Mycobacterium tuberculosis suşları ile smearlar hazırlanır ve bakterilerin uygun rengi (kırmızı-fuşya) aldığını doğrulamak için hazırlanan reaktiflerle boyanır.

Negatif kontroller, asit alkol dışındaki herhangi bir suş ile sürüntüler hazırlayarak, böylece numunenin tamamının zıt renk aldığını doğrulayarak da kullanılabilir.

Ziehl-Neelsen tekniğine kıyasla Kinyoun tekniği

Kinyoun tekniği, ısıtma aşamasını ortadan kaldırdığı için daha basittir, ancak ana avantajı, uzun vadede yüksek derecede toksik ve kansere neden olan buharların emisyonunu önlemesidir. Bu nedenle, Kinyoun boyası boyama personeli için daha güvenlidir.

Reaktiflerin aşındırıcı ve ağartıcı yanıcı olduğu için ciltle doğrudan temas etmemesine dikkat edilmesi gerekir.

Dezavantajlara gelince, negatif bir yayma, organizmanın mevcut olmadığını göstermez. Dahası, hücresel debrisin varlığı yanlış pozitiflere yol açarak tanıda kafa karışıklığına yol açabilir.

Referans

1. Uygulamalı Klinik Kimya. (2016). BK Kinyoun Kit. Bulunduğu yer: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. HIV'de Kinyoun boyası ve iki Coccidia. Tıp Dergisi MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
5. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. "Kinyoun lekesi." Vikipedi, bedava ansiklopedi. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 Şubat 2018. Web. 5 Ocak 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E.Coccidia ve Microsporidia'nın eşzamanlı teşhisi için bir boyama tekniğinin uygulanması. Cumhuriyet Üniversitesi Hijyen Enstitüsü. Montevideo. Uruguay. Bulunduğu yer: hygiene.edu.uy