GRÜNWALD-GIEMSA LEKESI OLABILIR: MANTIK, TEKNIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2024

Mayıs Grünwald- Giemsa veya Pappenheim leke , bir diferansiyel boyama tekniği bu karışımlar, Giemsa ve Mayıs Grünwald ayıraçlardır. Periferik kan ve kemik iliği yaymalarında normal ve anormal kan hücrelerinin ayrıştırılmasında ve ayrıca histolojik kesitlerin ve sitolojik örneklerin boyanmasında kullanılır.

Her iki reaktif -Giemsa ve May Grünwald-, asidik ve bazik boyaların kombinasyonuna dayanan bir teknik olan Romanowsky tipi boyamadan türetilmiştir.

May Grünwald Giemsa boyası ile boyanmış Kronik Miyeloid Lösemi vakasında bölümlere ayrılmış bir nötrofil ve bir milleosit gösteren yayma. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) Wikipedia.org aracılığıyla.

Giemsa, eozin, metilen mavisi ve türevlerinin karışımını gliserol ile stabilize ederek tekniği geliştirdi. Bunun yerine, May Grünwald, çözücü olarak metanol kullanarak eozin ve metilen mavisi kullanıyor. Bu stratejik kombinasyon mükemmel sonuçlar verdi.

Hücre morfolojisinin gözlemlenmesi açısından Giemsa ve Wright boyalarına benzer şekilde hareket etse de, bu teknik sıtma, Chagas hastalığı, leishmaniasis ve trichomoniasis'e neden olan parazitlerin boyanmasını rafine ederek öncekileri iyileştirir.

Ek olarak, spermatik sıvının sitolojik incelemesi için çok yararlı bir teknik olduğu kanıtlanmıştır. Sadece spermin morfolojik özelliklerini göstererek değil, aynı zamanda lökositlerin, epitel hücrelerinin ve spermatogenez hücrelerinin yüksek verimli farklılaşmasına izin vermesiyle de öne çıktı.

temel

Teknik, asidik boyaların temel hücresel bileşenler için seçici afiniteye sahip olduğu ve asidik bileşenlerin bazik lekeleri çektiği Romanowsky lekelerinin temelini izler.

Başka bir şekilde açıklandığında, hem hücre yapılarının hem de boyaların pozitif veya negatif elektrik yükleri vardır; gibi yükler itilir ve farklı yükler çeker.

Örneğin, metilen mavisi gibi bazik boyalar pozitif yüklüdür ve negatif yüklü yapılara çekilir. Bu nedenle bu boya, negatif yüklü fosfat gruplarına sahip DNA ve RNA açısından zengin çekirdekleri boyar.

Segmentli bazofillerin granülleri ve RNA içeren mononükleer beyaz kan hücrelerinin sitoplazmaları da boyanır.

Benzer şekilde, asit boya negatif bir yük taşır, bu nedenle eritrositler ve segmentli eozinofillerin granülleri gibi pozitif yüklü yapılara bağlanır. Segmentli nötrofillerin granüllerine gelince, bunlar her iki boyayı da sabitler.

Çeşitli renklendiriciler

Bu teknikte, ortokromatik ve metakromatik boyalar arasındaki reaksiyonların bir kombinasyonu bir arada bulunur. Ortokromatikler (eozin ve metilen mavisi), ilişkili oldukları hücre yapısına bağlanır ve değişmeyen sabit bir renk sağlar.

Öte yandan, metakromatlar (metilen mavisi gök mavisi A ve gök mavisi B'nin türevleri), belirli yapıya bağlandıklarında orijinal renklerini değiştirirler ve hatta çeşitli tonlar olabilir.

Son olarak, May Grünwald çözümünün attığı adım su varlığını gerektirir, çünkü bu olmadan boya yapılara nüfuz edecek ancak sabitlenmeyecektir. Bunun gerçekleşmesi için, boyanın polar olması veya iyonlaşması ve dolayısıyla ilgili yapılara çökelmesi ve bağlanması gerekir.

Teknik

malzemeler

- Slaytlar.

- Renklendirme köprüleri.

- May-Grünwald çözümü.

- Giemsa lekesi.

- Arıtılmış su.

May Grünwald boya konsantre solüsyonu

0.25 g eozin-metilen mavisi (May Grünwald'a göre boya) tartılmalı ve 100 ml metanol içinde çözülmelidir. Daha sonra karışım 1 saat karıştırılır ve 24 saat dinlenmeye bırakılır. Süre sonunda filtrelenir.

Tekniği uygulamak için May Grünwald boyası şu şekilde seyreltilmelidir: 200 ml seyreltilmiş boya için 30 ml konsantre çözelti ölçün, 20 ml tampon çözelti ekleyin ve pH7.2-7.3'e ayarlanmış 150 ml distile su ekleyin. . Daha sonra karıştırılır ve süzülür.

Giemsa leke konsantresi

0.5 g azure-eozin-metilen mavisi (Giemsa'ya göre boya) tartılmalı, 50 ml metanol içinde çözülmeli ve karışıma 50 ml gliserin eklenmelidir.

Tekniği uygulamak için 1:10 tampon solüsyonu ile seyreltin ve 10 dakika dinlendirin. Gerekirse filtrelenebilir.

PH 7.2'de tampon çözeltisinin hazırlanması

Tartılmaları gerekir:

- 40 mg potasyum di-hidrojen fosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-sodyum hidrojen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Her iki bileşik de 100 ml su içinde çözülür.

Kan veya kemik iliği smear boyama prosedürü

İki mod vardır: klasik ve hızlı.

Klasik mod

1. Smearleri seyreltilmiş May-Grünwald solüsyonu ile 2-3 dakika kapatın.
2. Önceki çözeltiyi çıkarmak için tamponlu distile su ile yıkayın.
3. Aynı tamponlu yıkama solüsyonu ile kapatın ve 1 dakika bekletin. Buradaki fikir, önceki boyanın yapılara sabitlenmesi ve aynı zamanda hücrelerin hidratlanmasıdır.
4. Tamponlu suya 12 damla seyreltilmiş Giemsa tentürü ekleyin ve karıştırıp homojenleştirmek için üfleyin. 15 ila 20 dakika dinlendirin.
5. Sürüntüleri tamponlu damıtılmış suyla yıkayın ve kurumaya bırakın.
6. 40X objektifini kullanarak lekeli kan hücrelerine ışık mikroskobu altında odaklanın ve görüntüleyin. Gerekirse 100X kullanılabilir.

Hızlı mod

1. Sürüntüyü seyreltilmiş May Grünwald boyası ile 1 dakika kapatın.
2. Tamponlu distile su ile yıkayın.
3. Tamponlu suyla örtün ve 1 dakika dinlendirin.
4. Seyreltilmiş Giemsa boyasını ekleyin ve 5 dakika bekletin.
5. Tamponlu damıtılmış suyla yıkayın ve kurumaya bırakın.

Burada açıklanan teknikler bir kılavuzdur, ancak prosedürlerin ve boyama sürelerinin reaktifleri dağıtan ticari şirkete göre değiştiği dikkate alınmalıdır. Her ticaret evi tarafından kesin olarak belirtilen adımların takip edilmesi tavsiye edilir.

Spermatik sıvı lekelerini renklendirme tekniği

1- Sürüntüyü ince bir tabaka May Grünwald solüsyonuyla 4 dakika kapatın.

2- Renklendiriciyi çıkarın ve distile su ile yıkayın.

3- Bir kat seyreltilmiş Giemsa (1:10) damıtılmış suda 15 dakika bekletilir.

4- Boyayı çıkarın ve distile su ile yıkayın.

5- Kurumasını bekleyin ve mikroskop altında inceleyin.

May Grünwald Giemsa boyasıyla beklenen renkler

Önemli Özellikler

Teknik, reaktiflerin ve yıkama solüsyonlarının pH'sinin 7.2-7.3'e ayarlanmış olmasını gerektirir, böylece boyaların hücresel yapılar için afiniteleri bozulmaz ve beklenen nihai renk değişmez.

Uygulamalar

Bu teknik, klinik laboratuarlar tarafından periferik kan ve kemik iliği yaymalarını, doku kesitlerini ve sitolojileri boyamak için kullanılır.

Hematolojik alanda, bu teknik, şekil, boyut ve sayı bakımından hücrelerin anormalliklerinin incelenmesinde hayati önem taşımaktadır. Lösemi ve anemi gibi bazı hastalıkların teşhisi için çok değerli bir araçtır.

Ek olarak, hematolojik (Plasmodium sp ve Trypanosoma cruzi) veya histolojik (Leishmanias sp) alanlarda parazit ararken olağanüstü faydalıdır.

Vajinal sitoloji

Vajinal sitoloji ile ilgili olarak, bu teknik özellikle Trichomonas vaginalis'in gözlemlenmesi için avantajlıdır. Bu önemli bir bulgudur, çünkü varlığı daha sonra parazit ortadan kaldırıldığında ortadan kaybolan karsinom in situ görüntülerini simüle eder.

Sperm örneği

Sperm kalitesi hakkında değerli bilgiler sağladığı için sperm örneklerinin incelenmesi için ideal bir araçtır.

Sağladığı veriler, esas olarak sayı ve morfoloji ile, mevcut olabilecek ve germ hücreleri, lökositler ve epitel hücreleri gibi hayati öneme sahip eşzamanlı hücreler ile ilgilidir.

Bu analiz ile baş, boyun, orta parça ve ana parçadaki spermde görülen anormallikleri tanımlamak mümkündür.

Ek olarak, hemospermi (menide kırmızı kan hücrelerinin varlığı) ve lökospermi veya piospermi (menide lökosit sayısının artması) vakalarını göstermeye de yardımcı olabilirler.

Referanslar

1. Costamagna S, Prado M. Trichomonas vaginalis tanısı için taze testin doğrulanması, May Grünwald-Giemsa ve Gram boyaları ve kültür ortamı. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Mevcut: scielo.
2. Merck KGaA Laboratuvarı. Mayıs Grünwald eozin metilen mavisi mikroskopi için.
3. "May-Grünwald-Giemsa boyası." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 15 Kasım 2018, 14:37 UTC. 8 Ocak 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Cam Kimyasalları Panreac Laboratuvarı. Histolojik teknikler, hematoloji ve mikrobiyoloji için reaktifler. Mevcut: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Hemogramın okunması için kan yaymalarının boyanması önerisi. Ulusal ve Referans Biyomedikal Laboratuvarı. Şili Halk Sağlığı Enstitüsü.
6. Sarabia L. Spermiogram WHO kriterlerine göre. Gelişimsel Anatomi ve Biyoloji Programı. Tıp Okulu. Şili Üniversitesi. Pp.centramerica.com'da mevcuttur