ZIEHL-NEELSEN BOYASI: MANTIK, REAKTIFLER VE TEKNIK - BIYOLOJI - 2025

Ziehl-Neelsen bir boyama tekniği mikroorganizmaları dirençli alkol asit (ARA) tanımlamak için. Bu mikrobiyoloji prosedürünün adı yazarlarına atıfta bulunur: bakteriyolog Franz Ziehl ve patolog Friedrich Neelsen.

Bu teknik, gözlemlemek, farklılaştırmak ve daha sonra tanımlamak istediğiniz yapılar arasında kontrast oluşturmak için farklı boyaların kullanılmasını ifade eden bir tür diferansiyel boyamadır. Ziehl-Neelsen boyası, belirli mikroorganizma türlerini tanımlamak için kullanılır.

Ziehl-Neelsen boyası

Bu organizmalardan bazıları mikobakteriler (örn., Mycobacterium tuberculosis), nokardia (örn., Nocardia sp.) Ve bazı tek hücreli parazitlerdir (örn. Cryptosporidium parvum). Bakterilerin çoğu, Gram boyama adı verilen yaygın bir teknikle sınıflandırılabilir.

Bununla birlikte, bazı bakteri grupları, onları tanımlayabilmek için başka yöntemlere ihtiyaç duyar. Ziehl-Neelsen boyası gibi teknikler, eski boyayı hücre duvarına sabitlemek için boyaların ısıyla kombinasyonunu gerektirir.

Ardından iki sonuca izin veren bir ağartma işlemi gelir: asitler ve alkoller tarafından renk değişikliğine karşı direnç veya hassasiyet.

temel

Bu boyama tekniğinin mantığı, bu mikroorganizmaların hücre duvarının özelliklerine dayanmaktadır. Duvar, mikolik asit adı verilen bir tür yağ asitlerinden oluşur; Bunlar çok uzun zincirlere sahip olmaları ile karakterize edilir.

Yağ asitleri çok uzun yapılara sahip olduklarında boyaları daha kolay tutabilirler. Hücre duvarındaki yüksek mikolik asit içeriği nedeniyle bazı bakteri türlerinin Gram boyama ile boyanması çok zordur.

Ziehl-Neelsen boyası, temel bir leke olan fenolik bileşik karbol fuksin kullanır. Bu, oda sıcaklığında dokuda mumsu olan hücre duvarının yağ asitleri ile etkileşim yeteneğine sahiptir.

Balmumu eridiği ve boya molekülleri hücre duvarına daha hızlı girdiği için karbol fuksin boyaması ısı varlığında artar.

Daha sonra kullanılan asit, duvarları boyayla yeterince ilişkili olmadığı için boyanmamış hücrelerin rengini bozmaya yarar; bu nedenle asit ağartıcının gücü asit boyayı çıkarabilir. Bu renk değişikliğine direnen hücrelere aside dirençli denir.

İkincil renklendirici

Numunenin renk giderilmesinden sonra, ikincil boya adı verilen başka bir boya ile karşılaştırılır. Genellikle metilen mavisi veya malakit yeşili kullanılır.

İkincil boya, arka plan malzemesini boyar ve sonuç olarak ilk adımda boyanan yapılarla kontrast oluşturur. Aside dirençli hücreler kırmızı rengini korurken, yalnızca rengi bozulmuş hücreler ikinci boyayı (zıt boyayı) emer ve renklerini alır.

Bu prosedür, aside dirençli basil olarak adlandırılan Mycobacterium tuberculosis ve Mycobacterium leprae'nin tanımlanmasında sıklıkla kullanılır.

Reaktifler

Birincil renklendirici

% 0.3 karbol fuksin (süzülmüş) kullanılır. Bu boya alkollerin bir karışımından hazırlanır: etanol (% 90) veya metanol (% 95) içindeki fenol ve bu karışımda 3 gram bazik fuksin çözülür.

Beyazlatma solüsyonu

Bu adımda% 3 alkollü asit veya% 25 sülfürik asit solüsyonları kullanılabilir.

İkincil boya (karşı boya)

Örnekleri kontrastlamak için en çok kullanılan boya genellikle% 0,3 metilen mavisidir. Bununla birlikte,% 0.5 malakit yeşili gibi diğerleri de kullanılabilir.

Teknik

Aside dirençli boyama prosedürü

Bakteriyel yayma hazırlayın

Bu hazırlık, sterilite önlemleri izlenerek temiz ve kuru bir slayt üzerinde yapılır.

Leke kurutma

Smearın oda sıcaklığında kurumasına izin verin.

Numuneyi ısıtın

Aşağıdaki slayta ateş uygulanarak numune ısıtılmalıdır. Smear balgamla hazırlanmadığında (beyazlatmak için sodyum hipoklorit ile muamele edildi) ve hemen lekelenmeyecekse alkol fiksasyonu yapılabilir.

M. tuberculosis çamaşır suyu ile ve boyama işlemi sırasında çıkarılır. Tedavi edilmeyen balgamın ısı fiksasyonu M. tuberculosis'i öldürmez, alkol fiksasyonu bakterisidaldir.

Lekeyi kapat

Leke, karbol fuksin solüsyonu (birincil bazik boya) ile kaplanır.

Lekeyi ısıtın

Bu 5 dakika boyunca yapılır. Bir buhar çıkışını fark etmelisiniz (yaklaşık 60 ° C). Örneği fazla ısıtmamak ve yakmaktan kaçınmak önemlidir.

Lekeyi ısıtmakla ilgili olarak, karbol fuksini ısıtırken, özellikle boyama işlemi, önceki boyamadan yüksek derecede yanıcı kimyasalların toplandığı bir tepsi veya başka bir kap üzerinde yapılıyorsa, büyük özen gösterilmelidir.

Birkaç damla asidik alkol, metanol veya% 70 etanol ile nemlendirilmiş önceden yanmış bir pamuklu çubuk kullanılarak slaytların altına sadece küçük bir alev uygulanmalıdır. Yangın tehlikesi oluşturduğundan, etanole batırılmış büyük bir pamuklu çubuk kullanmaktan kaçının.

Lekeyi yıka

Bu yıkama temiz su ile yapılmalıdır. Musluk suyu temiz değilse, smearı tercihen filtrelenmiş veya damıtılmış suyla yıkayın.

Lekeyi asit alkol ile kapatın

Bu asit alkol% 3 olmalıdır. Kapsama 5 dakika boyunca veya lekenin rengi yeterince değişinceye kadar, yani soluk pembe renkte olana kadar gerçekleştirilir.

Asidik alkolün yanıcı olduğu dikkate alınmalıdır; bu nedenle çok dikkatli kullanılmalıdır. Tutuşma kaynaklarının yakınında olmaktan kaçının.

Lekeyi yıka

Yıkama, temiz, damıtılmış su ile yapılmalıdır.

Smearı leke ile kapatın

1 ila 2 dakika malakit yeşili (% 0,5) veya metilen mavisi (% 0,3) leke olabilir, smear ince ise daha uzun süre kullanılır.

Lekeyi yıka

Yine temiz (damıtılmış) su kullanılmalıdır.

Tahliye etmek

Slaytın arkası temizlenmeli ve kuruması için leke bir drenaj rafına yerleştirilmelidir (kurutma için emici kağıt kullanmayın).

Bulaşmayı mikroskop altında inceleyin

100X objektif ve daldırma yağı kullanılmalıdır. Smearı sistematik olarak tarayın ve ilgili gözlemleri kaydedin.

Sonuçları yorumlayın

Teorik olarak, kırmızımsı bir rengi boyayan mikroorganizmalar, aside dirençli pozitif (AAR +) olarak kabul edilir.

Tersine, mikroorganizmalar, karşı boya olarak kullanılan boyaya bağlı olarak mavi veya yeşile boyanırsa, aside dirençli negatif (AAR-) olarak kabul edilirler.

Referanslar

1. Apurba, S. ve Sandhya, B. (2016). Pratik Mikrobiyolojinin Temelleri (1. baskı). Jaypee Brothers Tıp Yayıncıları.
2. Bauman, R. (2014). Vücut Sistemine Göre Hastalıklı Mikrobiyoloji (4. baskı). Pearson Education, Inc.
3. Heritage, J., Evans, E. & Killington, A. (1996). Giriş Mikrobiyolojisi (1. baskı). Cambridge University Press.
4. Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V. (2006). Mikrobiyolojide Laboratuvar El Kitabı ve Çalışma Kitabı: Hasta Bakımına Uygulamalar (11. baskı). McGraw-Hill Eğitimi.
5. Vasanthakumari, R. (2007). Ders Kitabı Mikrobiyoloji (1. baskı). BI Yayınları PVT.