ORTAM: MANTIK, HAZIRLIK, KULLANIMLAR VE SINIRLAMALAR - BIYOLOJI - 2025

N ya da glükoz fermantasyon ortamı , özel olarak enterik olmayan Gram negatif basiller adı Enterobacteriaceae dışında mikroorganizmaların önemli bir grubu, oksidatif ve karbonhidrat fermentatif metabolizma çalışma için tasarlanmış bir yarı-katı ağardır.

Hugh ve Leifson tarafından oluşturulmuştur; bu araştırmacılar, karbonhidratlardan asit üretimini araştırmanın geleneksel yollarının bu özel bakteri grubu için uygun olmadığını fark ettiler.

A. Ticari bazal OF ortamı. B. OF orta tohumlu tüpler. Kaynak: A ve B Fotoğraflar MSc tarafından yazılmıştır. Marielsa Gil.

Bunun nedeni enterik olmayan Gram negatif çubukların Enterobacteriaceae'den farklı olarak genellikle düşük miktarda asit üretmesidir.

Bu anlamda, OF ortamı, hem oksidatif hem de fermentatif yollarla oluşan küçük miktarlarda asitleri tespit edebilen özel özelliklere sahiptir. Bu farklılıklar pepton, karbonhidrat ve agar miktarıyla ilgilidir.

Bu besiyeri daha az pepton ve daha yüksek konsantrasyonda karbonhidrat içerir, böylece protein metabolizmasının bir sonucu olarak besiyerini alkalileştiren ürünleri azaltır ve karbonhidrat kullanımı nedeniyle asit üretimini artırır.

Öte yandan, agar miktarındaki azalma, hareketliliği gözlemlememize ek olarak, üretilen asidin besiyeri boyunca yayılmasına yardımcı olur.

OF ortamı pepton, sodyum klorür, bromotimol mavisi, dipotasyum fosfat, agar ve bir karbonhidrattan oluşur. En yaygın karbonhidrat glikozdur, ancak diğerleri arasında laktoz, maltoz, ksiloz gibi diğerleri üzerinde çalışmak istediği gibi kullanılabilir.

temel

Herhangi bir kültür ortamı gibi, OF besiyeri de bakteri büyümesini garanti eden besleyici maddeler içermelidir; bu maddeler peptonlardır.

Karbonhidrat enerji sağlar ve aynı zamanda mikroorganizmanın ona karşı davranışını incelemeye yarar, yani bakterilerin oksidatif, fermentatif veya sakarolitik olmayan bir organizma olarak sınıflandırılmasına izin verir.

OF ortamı 2: 1 geleneksel besiyerinin aksine 1: 5 pepton / karbonhidrat oranı içerir. Bu, peptonların bozulmasından oluşan alkali aminlerin miktarının zayıf asit oluşumunu nötralize etmemesini sağlar.

Diğer yandan, ortam sodyum klorür ve dipotasyum fosfat içerir. Bu bileşikler, ortamı ozmotik olarak stabilize eder ve sırasıyla pH'ı düzenler. Bromotimol mavisi, asit üretimi ile besiyerinin rengini yeşilden sarıya çeviren pH indikatörüdür.

Bazı mikroorganizmalar karbonhidratları oksidatif veya fermantasyon yollarıyla kullanabilirken diğerleri her iki yolu da kullanmaz.

Bu, her mikroorganizmanın özelliklerine bağlıdır. Örneğin, bazı katı aerobik mikroorganizmalar belirli karbonhidratları oksitleyebilir ve fakültatif anaeroblar çevrelerindeki ortama bağlı olarak oksitlenebilir ve fermente olabilirken diğerleri karbonhidratları (asakarolitik) oksitlemez veya fermente etmez.

Son olarak, gösterge olarak fenol kırmızısı olan özel bir OF bazı içeren CDC tarafından önerilen OF ortamının bir modifikasyonu vardır.

Oksidasyon süreci

Glikoz oksidasyon işlemi, fermantasyon işleminde olduğu gibi glikozun fosforilasyonunu gerektirmez. Bu durumda aldehit grubu, bir karboksil grubuna oksitlenir ve sonuçta glukonik asit oluşur. Bu da 2-ketoglukoniye oksitlenir.

İkincisi, iki piruvik asit molekülüne birikir veya parçalanır. Bu sistem, son elektron alıcısı olarak oksijen veya bazı inorganik bileşiklerin varlığını gerektirir.

Bu yolla asit üretimi, fermantasyon yoluyla elde edilenden daha zayıftır.

Fermantasyon süreci

Glikoz fermantasyonunun mevcut yollardan herhangi biriyle gerçekleşmesi için, önce fosforile edilerek glikoz-6-fosfat haline getirilmesi gerekir.

Glikoz fermantasyonu, ana yol Embden-Meyerhof-Parnas rotası olmak üzere birkaç yoldan gidebilir, ancak Entner-Doudoroff rotasını veya Warburg-Dickens heksoz monofosfat rotasını da kullanabilirler. pentozların degradasyonu.

Seçilen yol, mikroorganizmanın sahip olduğu enzimatik sisteme bağlı olacaktır.

Embden-Meyerhof- Parnas üzerinden

Glikozun Embden-Meyerhof-Parnas yoluyla fermantasyonunda, gliseraldehit-3-fosfat oluşana kadar daha sonra çeşitli karbon bileşiklerine indirgenecek iki trioz molekülüne bölünür. Oradan, pirüvik asit olan bir ara madde ortaya çıkar.

Buradan, bir türden diğerine değişebilen çeşitli türlerde karışık asitler oluşacaktır.

Bu sistem oksijen yokluğunda oluşur ve son elektron alıcısı olarak organik bir bileşik gerektirir.

Entner-Doudoroff yolu

Entner-Doudoroff yolu ile glikoz fermantasyonunda, glikoz 6-fosfat, glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat olur ve buradan 6-fosfoglukonat ve 2-keto-3-deoksi-6-'ye oksitlenir. sonunda pirüvik asit oluşturmak için fosfoglukonat. Bu yolun glikolizin oluşması için oksijene ihtiyacı vardır.

Pentoz bozunma yolu veya Warburg-Dickens Hexoxa monofosfat yolu

Bu rota, yukarıdaki 2'nin bir karışımıdır. Entner-Doudoroff yoluna benzer şekilde başlar, ancak daha sonra gliseraldehit-3-fosfat, Embden-Meyerhof-Parnas yolunda meydana geldiği gibi, piruvik asidin bir öncüsü olarak oluşur.

Hazırlık

Tartmak:

2 gr pepton

5 g sodyum klorür

10 g D-glikoz (veya hazırlanacak karbonhidrat)

0,03 g bromotimol mavisi

3 gr agar

0.30 g dipotasyum fosfat

1 litre damıtılmış su.

Karbonhidrat dışındaki tüm bileşikler karıştırılır ve 1 litre distile suda çözülür. Tamamen eriyene kadar ısıtın ve sallayın.

50 ° C'ye soğutulduğunda, 100 ml% 10 glikoz (süzülmüş) eklenir.

5 ml OF besiyerini pamuk kapaklı test tüplerine aseptik olarak dağıtın ve 121 ° C'de 15 pound basınçta 15 dakika otoklavlayın.

Dikey konumda katılaşmasına izin verin.

Besiyerinin pH'ı 7.1 olmalıdır Hazırlanan besiyerinin rengi yeşildir.

Buzdolabında saklayın.

Uygulamalar

OF ortamı, bir mikroorganizmanın bir karbonhidrata karşı metabolik davranışını belirlemek için özel bir ortamdır. Özellikle az, zayıf veya hiç asit oluşturmayanlar için.

ekilen

Her mikroorganizma için 2 OF tüpüne ihtiyaç vardır, her ikisi de incelenecek mikroorganizma ile aşılanmalıdır. Koloni düz bir sapla alınır ve dibe ulaşmadan tüpün ortasına bir delik açılır; Hareketliliği gözlemlemeye ilgi olmadığı sürece birkaç ponksiyon yapılabilir.

Tüplerden birine bir steril sıvı vazelin veya steril eritilmiş parafin (yaklaşık 1 ila 2 ml) katmanı eklenir ve "F" harfi ile etiketlenir. Diğer tüp orijinal olarak bırakılır ve "O" olarak etiketlenir. Her iki tüp de 35 ° C'de inkübe edilir ve 3 ila 4 güne kadar her gün gözlenir.

yorumlama

Metabolizma ve gaz üretimi

Tablo: Açık (oksidatif) ve kapalı (fermentatif) OF tüplerindeki davranışlarına göre mikroorganizmaların sınıflandırılması

Kaynak: Yazar MSc tarafından yapılmıştır. Marielsa Gil

Gaz, kabarcık oluşumu veya agarın yer değiştirmesi ile gözlenir.

Sadece glikozu oksitleyen ancak onu fermente etmeyen bir organizmanın diğer karbonhidratları fermente edemeyeceği, her halükarda onu sadece oksitleyeceği unutulmamalıdır. Bu nedenle, bu durumda, diğer karbonhidratların incelenmesi için kapalı tüp atlanacaktır.

motilite

Ek olarak, OF ortamında hareketlilik görülebilir.

Pozitif hareketlilik : aşılama alanıyla sınırlı olmayan gelişim. Tüpün yanlarına doğru büyüme var.

Negatif hareketlilik : yalnızca ilk inokülumda üreme.

QA

Aşağıdaki suşlar kalite kontrol olarak kullanılabilir: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Moraxella sp. Beklenen sonuçlar:

1. coli: Glikoz fermentörü (hem sarı hem de köpüklü tüpler).
2. aeruginosa: Glikoz oksitleyici (açık sarı tüp ve yeşil veya mavi conta).
3. Moraxella sp: Sakarolitik değildir (yeşil veya mavi açık tüp, yeşil kapalı tüp).

Sınırlamalar

-OF ortamında bazı mikroorganizmalar gelişemez. Bu durumlarda test tekrarlanır, ancak ortama% 2 serum veya% 0.1 maya özütü eklenir.

-Oksidasyon reaksiyonları genellikle sadece yüzeye yakın gözlemlenir ve besiyerinin geri kalanı, pozitif kabul edildiği gibi yeşil kalabilir.

Referanslar

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
3. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
4. Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. 2009. OF Glikoz Ortamı. Mevcut: http://f-soria.es
5. Conda Pronadisa Laboratuvarları. OF glikoz ortamı. Condalab.com'da mevcuttur
6. BD Laboratuvarları. 2007. OF Bazal Orta. Mevcut: bd.com