MEDIO MIO: KURULUŞ, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

MIO ortamı Enterobacteriaceae familyasına ait bakteri türlerinin belirlenmesinde yardımcı olmak için kullanılan bir biyokimyasal bir testtir. Oldukça besleyicidir ve glikoz, maya özü, pepton, triptein, L-ornitin hidroklorür, bromokresol moru ve agardan oluşur.

Kısaltmasının (MIO) anlamı, bu ortamda gözlemlenebilen parametrelerin her birini tanımlar; hareketlilik, indol ve ornitin. Motilite, mikroorganizmanın flagella varlığından dolayı hareket etme yeteneğidir. Bu özelliğin gözlemlenebilmesi için besiyerinin kıvamı yarı katı olmalıdır, bu nedenle preparat daha az agar içerir.

MIO ortamında sonuçların yorumlanmasının ana hatları. Kaynak: Yazar MSc tarafından hazırlanmıştır. Marielsa Gil

İndol üretimi, amino asit triptofana etki eden enzim triptofanazın varlığını gösterir ve indol üretimini görünür kılmak için açığa çıkarıcı bir reaktifin kullanılmasını gerektirir.

Son olarak, ornitin, bakterinin amino asidi dekarboksilasyon yapıp yapamayacağını, yani orinithine dekarboksilaz enzimine sahip olup olmadığını belirler.

temel

Pepton, maya özü ve triptein

Bu elementler, bu besiyerinin besin gücüne katkıda bulunur. Bakteriyel gelişim için bir besin kaynağı ve gerekli amino asitler olarak hizmet ederler.

Buna ek olarak, triptein, triptofanı indirgeyici deaminasyon yoluyla indirgeyen, indol, pirüvik asit, amonyak ve enerji salgılayan enzim triptofanazın varlığını gösteren bir triptofan kaynağıdır.

Indol renksizdir, bu nedenle varlığı, her ikisi de p-dimetilaminobenzaldehit içeren beş damla Ehrlich veya Kovacs reaktifi eklenerek ortaya çıkar.

Bu bileşiğin aldehit grubu, agar yüzeyinde halka şeklinde fuşya kırmızısı bir ürün oluşturarak indol ile reaksiyona girer.

Herhangi bir renk izi pozitif bir test olarak değerlendirilmelidir. Renk zamanla azaldığı için kanıt hemen okunmalıdır.

Ayrıca, bu test ornitinin motilite ve dekarboksilasyon sonuçları not edildikten sonra ortaya çıkarılmalıdır.

yorumlama

Pozitif test: Kovacs reaktifi damlaları eklenirken fuşya kırmızısı bir halka oluşması.

Negatif test: halka oluşumu yok.

motilite

Bakterinin hareket etme yeteneği, bulutlu bir ortam gözlemlendiğinde veya ilk aşılamanın etrafında genişleyen kalın bir büyüme çizgisi varsa ortaya çıkacaktır.

İnce bir büyüme çizgisi gözlemlenerek negatif bir hareketlilik testi kanıtlanacak ve etrafındaki her şey büyümesiz olacaktır.

Reaktifin eklenmesi tüm ortamı bulanıklaştırdığı için, indol ortaya çıkmadan önce motilitenin okunması önemlidir.

Hareketli ancak yavaş büyüyen bakterilerde, bu besiyeriyle hareketliliklerini göstermek zordur. Bu durumda, orta hareketlilik veya düşme-bekletme yöntemi gibi diğer testlerin veya yöntemlerin kullanılması önerilir.

glikoz

Glikoz, enerji sağlamanın yanı sıra çevreyi asitleştiren, amino asit ornitinin dekarboksilasyonunun meydana gelmesi için gerekli bir koşul olan fermente edilebilir karbonhidrattır.

Glikoz fermentasyonu her zaman Enterobacteriaceae ailesine ait tüm bakterilerin glikozu fermente etmesi ilkesinden başlayarak gerçekleşmelidir.

L-ornitin

Bakterilerin ornitin dekarboksilaz enzimini üretmesi durumunda, bu, besiyeri glikoz fermantasyonu ile asitlendirildikten sonra hareket edebilir.

Ornitin dekarboksilaz enzimi, ortamı tekrar alkalileştiren putresin adı verilen bir amin üreten amino asidin karboksil grubuna etki eder.

Bu test 24 saatlik inkübasyondan sonra okunmalıdır, çünkü daha önce okumaya çalışırsanız, testi yanlış bir negatif ile yanlış yorumlayabilirsiniz.

Oluşan ilk reaksiyonun glikoz fermantasyonu olduğu unutulmamalıdır, bu nedenle ortam ilk aşamada (ilk 10 ila 12 saat) sarıya döner. Daha sonra ornitin dekarboksilasyonu meydana gelirse, besiyeri mora dönecektir.

Kovacs reaktifinin eklenmesi besiyerinin rengini değiştirdiğinden, indolü ortaya çıkarmadan önce ornitin dekarboksilasyon testini yorumlamak önemlidir.

yorumlama

Negatif test: sarı renkli veya sarı arka plana sahip ortam.

Pozitif test: ortam tamamen mor.

PH göstergesi

Bu durumda bromokresol moru kullanılır; ortamda pH'da bir değişiklik olduğunu ortaya çıkarmaktan sorumlu kişi. Asitlendiğinde gösterge sarıya döner ve alkalileştirildiğinde maviye döner.

Tohumlama ve geliştirme tekniği

MIO ortamını ekmek için düz bir öze veya iğne kullanılır ve bununla birlikte çalışılacak koloninin bir kısmı toplanır.

MIO'nun ortasında düz bir çizgi üzerinde derin bir delme yapılır. Çift ponksiyon yapılması tavsiye edilmez, çünkü delmeler aynı yerde yapılmazsa yanlış bir hareketlilik görüntüsü verebilir.

Aerobiosis içinde 37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin. Sonuçlara şu sırayla bakın: motilite, ornitinin dekarboksilasyonu ve sonunda indolü ortaya çıkarın.

Aseptik olarak 2 ml besiyerinin çıkarılması, steril bir tüpe aktarılması ve indol testinin orada yapılması tavsiye edilir, böylece negatif ise orijinal tüpün geri kalanı indolü tekrar ortaya çıkarmak için 24 saat daha inkübe edilebilir.

İndol gelişimi şu şekilde gerçekleştirilir: MIO ortamına 3 ila 5 damla Kovacs reaktifi ilave edilir ve kuvvetlice karıştırılır. Kırmızı fuşya yüzüğün olup olmadığı gözlenir.

Hazırlık

MIO ortamı

31 g MIO besiyerini tartın ve bir litre damıtılmış suda çözün.

Karışım bir dakika kaynayana kadar ısıtın, agar tamamen çözülene kadar sık ​​sık çalkalayın. 4 ml besiyerini pamuk kapaklı 13/100 test tüpüne dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve yarı katı bir blok oluşacak şekilde bir rafta düz durmaya bırakın.

2-8 ° C buzdolabında saklayın. Bakteri suşunu ekmeden önce ısınmasını bekleyin.

Susuz ortamın rengi bej ve hazırlanan ortamın rengi hafif opalesan mordur.

Hazırlanan ortamın son pH'ı 6.5 ± 0.2'dir

Ortam, asidik pH'ta sararır ve alkali pH'ta mordur.

Kovacs Reaktifi (Indol Test Geliştiricisi)

Bu reaktif şu şekilde hazırlanır:

150 ml amil, izoamil veya butil alkol (üçünden herhangi biri) ölçülür. İçinde 10 g p-dimetilaminobenzaldehit çözülür. Ardından yavaş yavaş 50 ml konsantre hidroklorik asit eklenir.

Hazırlanan reaktif renksiz veya açık sarıdır. Amber şişede muhafaza edilmeli ve buzdolabında muhafaza edilmelidir. Koyu kahverengi bir renk bozulduğunu gösterir.

Ayrıca Kovacs reaktifi Ehrlich reaktifi ile ikame edilebilir. Daha duyarlı olan ikincisi, bazı fermente olmayan Gram negatif çubuklar ve belirli anaeroblar gibi, onu çok küçük miktarlarda üreten bakterilerdeki indolü ortaya çıkarmak için tercih edilir.

kullanım

Bu besiyeri, Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin tanımlanması için bir dizi biyokimyasal testi tamamlayan bir testtir.

Ornitin dekarboksilasyon verileri, pozitif test yapan Shigella sonnei'yi, negatif test eden Shigella boydii, Shigella flexneri ve S. dysenterieae'den ayırmaya yarar.

Ayrıca, negatif test eden Klebsiella cinsini, türlerinin çoğunun pozitif test ettiği Enterobacter cinsinden ayırır.

Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.

QA

Bir grup MIO ortamı hazırlandığında, bir kontrol testi gerçekleştirilebilir. Bunun için, besiyerinin davranışını gözlemlemek için bilinen veya sertifikalı suşlar kullanılır.

Kullanılabilen suşlar Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ve Proteus mirabilis'tir.

Beklenen sonuçlar E. coli ve M. morganii'dir. Dan M: +, I: + ve O: +.

Klebsiella pneumoniae tamamen negatiftir (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ve Enterobacter aerogenes, M: + I: - ve O: + verir.

Referanslar

1. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
4. Britannia Laboratuvarları. MIO Medio 2015. Britanialab.com'da bulunabilir
5. BD Laboratuvarları. BBL Motility Indole Ornitine (MIO) Orta. 2007. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
6. Valtek Laboratuvarları. Orta MIO Motilite, Indol, Ornitin. 2010. andinamedica.com adresinden ulaşılabilir.