ORTA SIM: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

SİM ortamı , özel olarak, özellikle, Enterobacteriaceae bazı bakterilerin tanımlanması için tasarlanmış bir yan katı ve ayırıcı ağar vardır. Triptein, pepton, demir sülfat, amonyum sülfat, sodyum tiyosülfat ve agardan oluşur.

Bu ortam, üç önemli testin yürütülmesine izin verir: hidrojen sülfit (H ₂ S) üretimi, indol oluşumu ve hareketlilik, dolayısıyla SIM kısaltması. Büyük faydası nedeniyle bir bakteriyoloji laboratuvarında bulunamaz.

A. Ticari SIM ortamı B. SIM H2S (-), Indol (-) ve Motilite (+) Testi ve SIM H2S (+), Indol (-), Motilite (+) Testi. Kaynak: A. Fotoğraf MSc yazar tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil B. Mfloayza

Diğer ortamlardan farklı olarak, bazı bakterilerin hareket kapasitesinin tespit edilebilmesi için yarı katı olması gerekir. Bu anlamda, bu test Enterobacteriaceae için çok iyi sonuç verir, ancak asılı damla gibi diğer yöntemlerin tercih edildiği fermente olmayan Gram-negatif çubuklarda çalışmaz.

SIM ortamı, bazı bakterileri diğerlerine göre karakterize eden belirli belirli özellikleri ayırt etmeye izin verir. Örneğin Escherichia coli, H ₂ S (-), Indol (+) ve motilite (+) olarak ayırt edilirken, Proteus mirabilis H ₂ S (+), indol (-), hareketlilik (+) şeklindedir.

temel

Farklı kabul edilen bir kültür ortamıdır, çünkü kullanımı hidrojen sülfür üretebilen mikroorganizmaları üretmeyenlerden ayırır; aynı zamanda, triptofandan indol oluşturanları, olmayanlardan da vurguluyor ve son olarak hareketli bakterileri hareketsiz olanlardan ayırıyor.

Güç kaynağı

Herhangi bir kültür ortamı gibi, talep etmeyen mikroorganizmaların gelişebilmesi için gerekli besinleri sağlayan elementlere sahiptir. Bu elementler peptonlar ve triptein ile temsil edilir.

Ortamdaki mikroorganizmanın gelişimi, bu besiyerinin değerlendirdiği özelliklerin varlığını veya yokluğunu gözlemleyebilmek için gereklidir.

Hidrojen sülfit üretimi

SIM kısaltmasının S harfi, hidrojen sülfit (H ₂ S) üretimini ifade eder . Hidrojen sülfit oluşturabilen bakteriler, sülfürü sodyum tiyosülfattan alacaktır.

H kez ₂ S -colourless gaz oluşturulur, bu demir sülfid, açıkça görülebilir (siyah çökelti) oluşturulması, ortam içinde demir tuzu ile reaksiyona girer. H ₂ S oluşturmayan bakteriler , ortamı orijinal renginde (bej) bırakır.

Siyah çökeltinin varlığı, hareketliliğin yorumlanmasını engelleyebilir. Bununla birlikte, en fazla hidrojene ₂ S- Enterobacteriaceae üreten Salmonella, Proteus ve Citrobacter olarak, pozitif hareketli olduğu bilinmektedir. Ayrıca, hemen hemen tüm ortamı kaplayan siyah çökelti, pozitif hareketlilik gösterir.

Indol oluşumu

SIM kısaltmasının ikinci harfi, indol oluşumunu temsil eden "I" dir.

Bu anlamda triptein, bir besin kaynağı olmanın yanı sıra başka bir temel işlevi de yerine getirir. Bu pepton, triptofan adı verilen bir amino asit açısından zengindir, bu nedenle triptofanaz üreten bakterileri gösterebilir.

Bu enzim, amino asit triptofanı parçalamaktan ve bunun sonucunda indol (renksiz madde), pirüvik asit ve amonyum oluşumundan sorumludur.

Bu nedenle, bu reaksiyonu göstermek için açığa çıkarıcı bir madde (Ehrlich reaktifi veya Kovac reaktifi) eklemek gerekir. Ya indol ile reaksiyona girerek agar yüzeyinde kırmızı-fuşya halka şeklinde bir madde oluşturur. Fuşya yüzük ortaya çıkarsa, indol testi pozitif olarak yorumlanır.

Bu enzime sahip olmayan bakteriler halkayı oluşturmaz ve negatif indol testi olarak yorumlanır.

İndol testinin en son yorumlanması gerektiğine dikkat etmek önemlidir, çünkü reaktif eklendikten sonra ortam bulanık hale gelir ve bu da motilitenin görselleştirilmesini zorlaştırır.

motilite

Son olarak SIM kelimesinin "M" harfi hareketlilik anlamına gelir. Hareketliliği değerlendirmek için, bu ortam stratejik olarak yarı katıdır, çünkü bu özellik bakteri hareketinin olup olmadığını gözlemleyebilmek için gereklidir. Flagella içeren bakteriler, bu pozitif testi verenlerdir.

Hem ilk inokülumda hem de çevresinde türbidite gözlemlendiğinde pozitif bir test ortaya çıkacaktır. Oysa hareketsiz bakteriler yalnızca ilk aşılama yolunda gelişir.

Hazırlık

Orta SIM

30 g susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışım 5 dakika bekletilir ve daha sonra tamamen eriyene kadar sık ​​sık karıştırılarak kaynamaya kadar ısıtılır.

Karışımı pamuk kapaklı test tüplerine dağıtın ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın. Tüp rafını otoklavdan çıkarın ve ortamın blok şeklinde olması için dikey konumda katılaşmasına izin verin.

Muhafazası için kullanılıncaya kadar buzdolabında bekletilir. Hazırlanan besiyerinin nihai pH'ı 7,3 ​​± 0,2 olmalıdır.

Besiyerinin aşılanması sırasında oda sıcaklığında olmalıdır. Orta renk bejdir.

Kovac reaktifi

150 ml amil veya izoamil veya butil alkol ölçün. (Bahsedilen üçten birini kullanın).

10 g p-dimetilaminobenzaldehidi çözün. Sonra yavaşça 50 ml konsantre hidroklorik asit ekleyin.

Kullanıma hazır reaktif renksiz veya açık sarıdır. Kehribar rengi bir şişede saklanmalı ve buzdolabında saklanmalıdır. Koyu kahverengiye dönerse kullanmayınız; bu hasarlı olduğunu gösterir. Bu reaktif, Enterobacteriaceae söz konusu olduğunda tercih edilir.

Erlich reaktifi

2 g p-dimetilaminobenzaldehidi tartın ve 190 ml saf etil alkol içinde çözün ve 40 ml konsantre hidroklorik asit ile yavaşça karıştırın. Kovac reaktifiyle aynı şekilde saklayın. Ehrlich reaktifi en çok fermente olmayan ve anaerobik bakteriler için kullanılır.

Uygulamalar

SIM ortamı, bakteriyoloji laboratuvarlarında oldukça kullanılır. Avantajı, Enterobacteriaceae'nin tanımlanmasında aynı tüpte üç temel özelliğin gözlemlenebilmesidir.

ekilen

Bu besiyerini ekmenin doğru yolu, üzerinde çalışılacak saf koloninin bir kısmının alındığı ve besiyerinin merkezine dikey olarak yerleştirildiği iğneyi kullanmaktır. Tek bir hamle yapılmalıdır. Delinme tüpün dibine ulaşmamalıdır, doğru olan derinliğin sadece üçte ikisini kaplamaktır.

Pozitif hareketliliğin yanlış yorumlanmasına yol açabileceğinden, inokülumun tekrarlanması önerilmez. Aşılanan ortam aerobik olarak 37 ° C'de 24 saat inkübe edilir.

Süre bittikten sonra H ₂ S üretiminin olup olmadığı gözlemlenir ve motilite okunur. Son olarak, 3 ila 4 damla Ehrlich veya Kovac reaktifi eklenerek indol açığa çıkarılır, hafifçe karıştırılır ve yorumlanır.

Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.

QA

Sterilite kontrolü olarak, bir veya iki tüp aşılamadan 37 ° C'de 24 saat fırında inkübe edilir. Bu süreden sonra herhangi bir büyüme veya renk değişikliği olmaması beklenir.

Kalite kontrol olarak, Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315 gibi bilinen sertifikalı suşlar kullanılabilir.

Beklenen sonuçlar şunlardır: Escherichia coli H ₂ S negatif, indol ve pozitif hareketlilik, Enterobacter aerogenes sadece pozitif hareketlilik, Salmonella typhimurium H ₂ S ve negatif indol ile pozitif hareketlilik. Proteus vulgaris pozitif, Klebsiella pneumoniae ve Shigella negatiftir.

Sınırlamalar

-Diğer suşların yanı sıra bazı Morganella morganii suşları, melanin üretimine bağlı olarak bu besiyerinde kahverengimsi bir pigment oluşturabilir, bu, demir sülfit çökeltisi ile karıştırılmamalıdır. Deneyimsiz profesyonellerde bu durum H ₂ S testinin yorumlanmasında yanlış pozitifler oluşturabilir .

-Sıkı aerobik bakteriler yalnızca tüpün yüzeyinde büyüyerek hareketliliğin yorumlanmasını zorlaştırır.

Referanslar

1. BD Laboratuvarları. BBL SIM Orta. 2008. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
2. Neogen Laboratuvarları. SIM Orta. Bulunduğu yer: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Orta. 2009. Şu adresten ulaşılabilir: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratuvarı. Orta SIM. Şurada bulunabilir: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratuvarları. Orta SIM. 2015. Studyres.es/doc adresinde bulunabilir
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.