KARANLIK ALAN MIKROSKOBU: ÖZELLIKLER, PARÇALAR, FONKSIYONLAR - BIYOLOJI - 2025

Karanlık alan mikroskobu bazı laboratuarlarda kullanılan özel bir optik alettir. Bu, parlak alan mikroskobunda yapılan bir değişikliğin sonucudur. Karanlık alan mikroskobu, trans-aydınlatma veya epi-aydınlatma ile gerçekleştirilebilir.

Birincisi, ışık ışınları yoğunlaştırıcıya ulaşmadan önce araya giren cihazların kullanılmasıyla kondansatöre doğrudan ulaşan ışık ışınlarının engellenmesine dayanır.

Karanlık alan mikroskobu / Karanlık alan mikroskoplarında görülen Treponemler. Kaynak: Dietzel65 / Judith Miklossy, Sandor Kasas, Anne D Zurn, Sherman McCall, Sheng Yu ve Patrick L McGeer

İletilen ışığa sahip karanlık alan, son derece ince parçacıkları gözlemleyerek yapıları vurgulamayı mümkün kılar. Yapılar, koyu bir arka plan üzerinde bir miktar kırılma veya parlaklık ile görülür.

Epi-aydınlatma etkisi, olay veya eğik ışıkla elde edilirken. Bu durumda mikroskop, hilal şeklinde özel bir filtre ile donatılmalıdır.

Olay aydınlatması ile gözlenen yapılar, yüksek rölyefte görsel bir etki sunarak karakterize edilir. Bu özellik, asılı parçacıkların kenarlarını vurgulamayı mümkün kılar.

Aydınlık alan mikroskobunun aksine, karanlık alan mikroskobu, herhangi bir boyama türü olmaksızın, asılı partiküller içeren taze preparatların görselleştirilmesi için özellikle yararlıdır.

Bununla birlikte, kuru preparatlar veya lekeli preparatlar için kullanılamaması da dahil olmak üzere birçok dezavantaja sahiptir. İyi bir çözünürlüğü yok. Ek olarak, iyi bir görüntü sağlamak için, hedeflerin sayısal açıklığı yoğunlaştırıcınınkini aşamaz.

karakteristikleri

Karanlık alan mikroskobunun bileşimi, her iki mikroskobun temelleri zıt olduğu için, parlak alana göre önemli modifikasyonlar sunar.

Parlak alanda ışık ışınları yoğunlaştırılır, böylece doğrudan numuneden geçerler, karanlık alanda ışınlar dağılır, böylece yalnızca eğik ışınlar numuneye ulaşır. Bunlar daha sonra aynı numune tarafından dağıtılır ve görüntü hedefe doğru iletilir.

Numunesiz bir slayta odaklanacak olursanız, koyu bir daire gözlemlenir, çünkü numune olmadan ışığı hedefe doğru dağıtacak hiçbir şey yoktur.

Görme alanında istenen etkiyi elde etmek için, belirli kondansatörlerin yanı sıra ışık ışınlarını kontrol etmeye yardımcı olan diyaframların kullanılması gerekir.

Karanlık bir görüş alanında, süspansiyondaki elementler veya parçacıklar parlak ve kırılgan görünürken, alanın geri kalanı karanlıkken mükemmel bir kontrast oluşturur.

Eğik veya gelen ışık kullanılırsa, gözlemlenen yapılarda yüksek rölyefli kenar efekti elde edilir.

Karanlık alan mikroskobunun parçaları

Kaynak: amazon.com

-Mekanik sistem

Tüp

Objektif tarafından yansıtılan ve büyütülen görüntünün göz merceğine veya göz merceklerine ulaşana kadar hareket ettiği cihazdır.

Karıştırmak

Farklı hedeflerin bulunduğu destektir. Hedefler sabit değildir, kaldırılabilirler. Tabanca, operatörün ihtiyacı olduğunda hedefin değiştirilebileceği şekilde döndürülebilir.

Makro vida

Bu vida numuneyi odaklamak için kullanılır, numuneyi hedefe yaklaştırmak veya uzaklaştırmak için ileri veya geri hareket ettirilir ve hareket grotesktir.

Mikrometre vidası

Mikrometre vidası, numuneyi hedefe yaklaştırmak veya uzaklaştırmak için ileri veya geri hareket ettirilir. Mikrometrik vida, neredeyse algılanamayan çok ince veya hassas hareketler için kullanılır. Nihai odak noktasına ulaşan odur.

merdane

Numunenin slayt üzerinde duracağı destektir. Işık huzmelerinin geçtiği merkezi bir açıklığı vardır. Makro ve mikrometre vidaları hareket ettirildiğinde, vidanın hareketine bağlı olarak kademe yukarı veya aşağı hareket eder.

Araba

Taşıyıcı, tüm numunenin amaç doğrultusunda geçmesine izin verir. İzin verilen hareketler ileri geri ve tersi ve soldan sağa ve tam tersidir.

Forseps tutma

Bunlar sahne üzerinde bulunur, metalden yapılmıştır ve gözlem sırasında kaymasını önlemek için sürgüyü tutmaya yöneliktir. Numunenin gözlemlenirken sabit kalması önemlidir. Bağlantı elemanları, tam olarak slaytı alacak şekilde boyutlandırılmıştır.

Kol veya tutamak

Kol, tüpü taban ile birleştirir. Burası, bir taraftan diğerine hareket ederken mikroskobun tutulması gereken yerdir. Bir elinizle kol tutulur ve diğer elinizle taban tutulur.

Taban veya ayak

Adından da anlaşılacağı gibi mikroskobun temeli veya desteğidir. Taban sayesinde mikroskop düz bir yüzey üzerinde sabit ve sabit kalabilir.

-Optik sistem

hedefler

Silindir şeklindedirler. Alt kısımda örnekten gelen görüntüyü büyüten bir mercek var. Hedefler çeşitli büyüklüklerde olabilir. Örnek: 4.5X (büyüteç), 10X, 40X ve 100X (daldırma hedefi).

Daldırma hedefi bu şekilde adlandırılmıştır çünkü hedef ile numune arasına birkaç damla yağ yerleştirilmesini gerektirir. Diğerlerine kuru hedef denir.

Hedefler sahip oldukları özelliklerle basılır.

Örnek: üreticinin markası, alan eğriliği düzeltmesi, sapma düzeltmesi, büyütme, sayısal açıklık, özel optik özellikler, daldırma ortamı, tüp uzunluğu, odak uzunluğu, lamel kalınlığı ve kod halkası renk.

Lenslerin altta bulunan bir ön lensi ve üstte bulunan bir arka lensi vardır.

Oküler

Eski mikroskoplar monokülerdir, yani tek göz merceği vardır ve modern mikroskoplar dürbündür yani iki göz merceği vardır.

Göz mercekleri silindiriktir ve içi boştur. Bunların içinde lens tarafından oluşturulan sanal görüntüyü genişleten yakınsak lensler bulunur.

Göz merceği tüpe katılır. İkincisi, objektif tarafından iletilen görüntünün göz merceğine ulaşmasına izin vererek onu tekrar büyütür.

Göz merceğinin üst kısmında göz merceği adı verilen bir mercek bulunur ve alt kısmında toplayıcı adı verilen bir mercek bulunur.

Aynı zamanda bir diyaframa sahiptir ve bulunduğu yere bağlı olarak bir adı olacaktır. Her iki mercek arasında bulunanlara Huygens mercek, 2 mercekten sonra yer alıyorsa Ramsden mercek olarak adlandırılır. Başkaları olmasına rağmen.

Göz merceğinin büyütmesi, mikroskoba bağlı olarak 5X, 10X, 15X veya 20X arasında değişir.

Operatörün numuneyi görebilmesi, göz merceği veya göz merceklerinden geçer. Bazı modeller, sol göz merceğinde hareketli ve görüntü ayarına izin veren bir halka ile birlikte gelir. Bu ayarlanabilir halkaya diyopter halkası denir.

-Aydınlatma sistemi

Lamba

Işık kaynağıdır ve mikroskobun altında bulunur. Işık halojendir ve aşağıdan yukarıya doğru yayılır. Genel olarak mikroskopların sahip olduğu lamba 12 V'tur.

Diyafram

Karanlık alan mikroskoplarının diyaframında iris yoktur; bu durumda lambadan gelen ışınların doğrudan numuneye ulaşmasını engeller, numuneye sadece eğik ışınlar dokunacaktır. Numunede bulunan yapılar tarafından dağılan bu kirişler, hedefi geçecek olanlardır.

Bu, karanlık bir alanda yapıların neden parlak ve aydınlık göründüğünü açıklıyor.

kondansatör

Bir karanlık alan mikroskobunun yoğunlaştırıcısı, parlak bir alandan farklıdır.

İki tip vardır: kırılma kapasitörleri ve yansıma kapasitörleri. İkincisi de iki kategoriye ayrılır: paraboloidler ve kardiyoidler.

Kırılma kapasitörleri

Bu tür bir kondansatör, ışık ışınlarını kırmak için araya yerleştirilmiş bir diske sahiptir, ön merceğin üzerine veya arka tarafa yerleştirilebilir.

Kondansatörün ön merceğinin önüne mercekten (diyafram) daha küçük siyah kartondan yapılmış bir disk yerleştirmek yeterli olduğundan, bu türden bir kondansatörü doğaçlama yapmak çok kolaydır.

Aydınlık alan ışık mikroskobu, bu ucu kullanarak karanlık alan mikroskobuna dönüştürülebilir.

Yansıma kapasitörleri

Stereoskopik mikroskoplar tarafından kullanılanlardır. İki tür vardır: paraboloidler ve kardiyoidler.

• Paraboloidler: Bir parabole benzerliklerinden dolayı paraboloid denen bir tür eğriliği vardır. Bu tip kondansatör, Treponemleri gözlemlemeye izin verdiği için sifiliz çalışmasında yaygın olarak kullanılmaktadır.
• Kardioid : Kondansatörün eğriliği bir kalbe benzer, dolayısıyla "kardioid" adı, aynı adı taşıyan kondansatördür. Ayarlanabilir diyaframa sahiptir.

Özellikleri

-Klinik örneklerde Treponema pallidum varlığını araştırmak için kullanılır.

-Borrelias ve Leptospiras'ı gözlemlemek de faydalıdır.

-Özel yapıları detaylandırmak gerekmediği sürece, hücrelerin veya mikroorganizmaların in vivo davranışını gözlemlemek için idealdir.

-Kapsülü veya mikroorganizmaların duvarını vurgulamak için idealdir.

avantaj

-Kırılma yoğunlaştırıcılı karanlık alan mikroskopları daha ucuzdur.

-40X büyütmede kullanımı çok faydalıdır.

Bulundukları ortama benzer bir kırılma indisine sahip örnekleri gözlemlemek için idealdirler. Örneğin, kültür, maya veya spiroket gibi hareketli bakterilerdeki hücreler (Borrelias, Leptospiras ve Treponemas).

-Hücre in vivo olarak gözlemlenebilir, bu da davranışının değerlendirilmesine izin verir. Örneğin, Brown hareketi, flagella ile hareket, yalancı ayaklıların emisyonu ile hareket, mitotik bölünme süreci, larvaların yumurtadan çıkması, mayaların tomurcuklanması, fagositoz vb.

-Yapıların, örneğin kapsül ve hücre duvarı gibi kenarlarının vurgulanmasına izin verir.

- Ayrıştırılmış partikülleri analiz etmek mümkündür.

-Renklendiricilerin kullanımına gerek yoktur.

Dezavantajları

-Müstahzarlar monte edilirken özellikle dikkatli olunmalıdır çünkü çok kalın olursa iyi gözlenmez.

-Görüntülerin çözünürlüğü düşük.

-Kırılma yoğunlaştırıcı kullanan karanlık alan mikroskopları çok düşük bir parlaklık yüzdesine sahiptir.

- Bir daldırma hedefi (100X) ile görüntü kalitesini iyileştirmek için, hedeflerin sayısal açıklığını azaltmak ve böylece aydınlatma konisininkini artırmak gerekir. Bunun için, hedefin sayısal açıklığını düzenleyebilen ek bir diyaframın dahil edilmesi esastır.

-Hayati boyalar olmadıkça kuru müstahzarları veya renkli müstahzarları görselleştiremezsiniz.

-Belirli yapıların, özellikle iç yapıların görselleştirilmesine izin vermez.

- Karanlık alan mikroskopları daha pahalıdır.

Referanslar

1. "Karanlık alan mikroskobu." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 26 Ağu 2018, 00:18 UTC. 30 Haz 2019, 01:06
2. Agudelo P, Restrepo M, Moreno N.Kan örneklerinden ve kültürden karanlık alan mikroskobu altında gözlem yoluyla leptospirosis teşhisi. Biyomedikal. 2008; 28 (1): 7-9. Scielo.org adresinden ulaşılabilir
3. Rodríguez F. Optik mikroskop türleri. Klinik ve Biyomedikal Laboratuvar Blogu. Franrzmn.com adresinde mevcuttur
4. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Karanlık alan mikroskobu. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 19 Ekim 2018 00:13 UTC. Mevcut: wikipedia.org
5. Bhatia M, Umapathy B, Navaneeth B.Leptospiroz tanısında karanlık alan mikroskobu, kültür ve ticari serolojik kitlerin değerlendirilmesi. Indian J Med Microbiol. 2015; 33 (3): 416-21. Mevcut: nlm.nih.gov