KÜLTÜR ORTAMI HAZIRLIĞI: HEDEFLER VE ADIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Kültür ortamının hazırlanması arzu edilen mikroorganizmaların büyümesi için laboratuarlarda kullanılan rutin bir yöntemdir. Kültür ortamı, mikrobiyal bir popülasyonun gelişimi için gerekli tüm besin maddelerine sahip katı, sıvı veya yarı katı preparatlardır.

Genel olarak, mikroorganizmaları yetiştirme araçları, proteinler ve amino asitler bakımından zengindir ve genellikle, diğerleri arasında, vitaminler, kan, serum gibi, incelenecek organizmanın büyümesini destekleyen bazı bileşenleri içerir.

Kaynak: Pixabay.com

Bileşimi ilgili mikroorganizmanın ihtiyaçlarına bağlı olarak değiştiğinden, genel veya evrensel bir kültür ortamı yoktur. Bazı bakteriler herhangi bir kültür ortamında gelişebilir, ancak diğerlerinin özel gereksinimleri vardır.

Ne içeriyor?

Mantarlar ve bakteriler gibi mikroorganizmalar, küçük boyutları nedeniyle tek tek incelenemez. Bu nedenle, popülasyonda önemli bir artışa izin veren yapay yollarla yetiştirilmelidirler.

Örneğin, bakterileri incelemek istiyorsak, çoğalabilmeleri ve bir koloni oluşturabilmeleri (çıplak gözle görülebilen) için onlara doğru koşulları sağlamalıyız.

Kültür ortamının hazırlanması, yetiştirilecek mikroorganizmanın türüne bağlı olarak büyük ölçüde değişir. Hazırlamadan önce iş organizmasının temel beslenme ihtiyaçlarının bilinmesi gerekmektedir.

Kültür ortamında kullanılan en yaygın bileşenler, hazırlanmalarına ilişkin genel bir fikir edinmek için aşağıda açıklanacaktır:

Ağar

Kültürlerde jelleştirici olarak kullanılır ve katı veya yarı katı bir ortam ararken eklenir. Besiyerinin hazırlanmasında kullanılan ilk katılaştırıcı ajan jelatindi, ancak 1883'te agar, W. Hesse tarafından bakteriyoloji dünyasına tanıtıldı.

Bakteriyolojik agar, ana bileşeni olarak, alglerden ekstrakte edilen kompleks dalları olan bir polisakkarit içerir. Bu bileşik, dondurma ve reçel gibi yaygın yiyeceklerde koyulaştırıcı olarak kullanılır.

Mikrobiyolojide çeşitli nedenlerle çok değerli bir elementtir. Esas olarak mikroorganizmalar onu parçalayamadığı için 100 ° C'lik bir sıcaklıkta sıvılaşır ve 45 ° C veya altına ulaşana kadar sıvı halde kalır.

Katı bir besiyeri hazırlamak istemeniz durumunda, agar konsantrasyonu yaklaşık% 1,5, yarı katıların% 0,3 ila 0,5 arasında hazırlanmalıdır.

Sıvılar

Patojen organizmaların yetiştirilmesi, doğal ortamlarında olduğu gibi gelişebilmeleri için vücut sıvılarına ihtiyaç duyar. Bu nedenle tam veya defibrilasyonlu kan eklenir. Sıvı sağlıklı bir hayvandan alınır ve sterilize edildikten sonra kültür ortamına eklenir.

Alıntılar

Farklı hayvan kısımlarından (et veya karaciğer gibi) veya sebzelerden (tohumlar) elde edilirler ve bir macun veya toz formunda katı bir konsantre elde etmek için işlenirler. En yaygın olanları maya, malt ve ettir.

Peptonlar

Bu organik bileşikler, hayvan veya bitki dokularının enzimatik veya kimyasal hidrolizi ile elde edilir. Amaç, proteinlerin temel birimleri olan amino asitler açısından zengin içerik eklemektir.

Amortisörler

"Tamponlar" veya tampon sistemleri, pH'daki ani değişiklikleri önler ve vücudun tolere ettiği optimum aralığın korunmasına yardımcı olur.

Bazı bakteriler alkali ortamı tercih etse de, çoğu organizma 7 pH değerinde iyi gelişebilir. Bununla birlikte, 6 ile 9 arasındaki pH değişimlerine direnen bakteriler vardır.

PH'a duyarlı türlerde hasar, aşırı miktardaki hidrojen veya hidroksil iyonları tarafından değil, hücreye girebilecek zayıf asit veya bazların artmasıyla üretilir.

Benzer şekilde, pH göstergeleri, onu izlemek ve fermantasyon veya diğer işlemlerin neden olduğu sapmaları önlemek için eklenir.

hedefler

Bir kültür besiyeri hazırlarken temel amaç, organizmanın başarılı bir şekilde gelişmesini izole etmek için gerekli tüm bileşenleri eklemektir. İstenen ortama ulaşmak için bileşenlerin ve besin maddelerinin en etkili kombinasyonu belirlenmelidir.

Besiyerinin bileşimi ve besinlerin mevcudiyeti bu adımlara bağlı olduğundan, besiyerinin hem hazırlanması hem de depolanması başarılı büyümeyi sağlamak için kritiktir.

Mikroorganizmaların kültivasyonunun, alınan ışığın yoğunluğu, ortamın sıcaklığı ve asitlik seviyesi veya alkalinitesi gibi kültür ortamının dışındaki birkaç faktörden etkilenen bir görev olduğu dikkate alınmalıdır. Bu nedenle, bu değişkenlerin her biri dikkate alınmalıdır.

Medya türleri

Bileşimine göre

Bileşimlerine bağlı olarak üç ana ürün türü vardır: doğal veya deneysel, yarı sentetik ve tanımlanmış sentetik veya kimyasal ortam.

Doğal çevre

Doğal ortamlarda kesin kompozisyon bilinmemektedir. Bunlar süt, seyreltilmiş kan, sebze suları, et ve pepton özleri ve infüzyonları gibi bileşenleri içerir. Ekonomik nedenlerden ötürü, soya özütü, peynir altı suyu, melas vb. Gibi ucuz bileşenler sıklıkla eklenir.

Yarı sentetik ortam

Bileşimi kısmen biliniyorsa yarı sentetik ortam olarak adlandırılır. Agar içeren herhangi bir ortam, yarı sentetik bir ortam haline gelir.

Bunların arasında, diğer örnekler arasında patates dekstroz agar, czapek-dox agar, yulaf agar, et pepton agar var.

Sentetik veya kimyasal tanımlı ortam

Bu durumda, ortamın bileşimi - karbon, nitrojen, sülfür, fosfor ve ihtiyaç duyulan diğer büyüme faktörlerinin kaynaklarının miktarı bakımından - tam olarak bilinir. Diğer araştırmacılar için tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek istiyorsanız çok kullanışlıdır.

Sözde "özel büyüme gereksinimleri olan mikroorganizmalar" için gerekli bileşenlerin eklenmesi gerekir. Bu tipin bir örneği Lactobacillus'tur.

Mikroorganizma türüne göre

Benzer şekilde, üzerinde büyüyebilen mikroorganizma türüne göre kültür ortamı için başka bir sınıflandırma vardır. Bu prensibi izleyerek aşağıdaki genel, zenginleştirme, seçici ve farklı araçlara sahibiz. Her biri aşağıda açıklanmıştır:

Genel medya

Bunlar, çok çeşitli mikroorganizmaların gelişimini destekler. Herhangi bir organizmanın büyümesi için özel koşullara ihtiyacı varsa, bu tür bir kültürde başarılı bir şekilde gelişemeyecektir.

Zenginleştirme ortamı

Zenginleştirme ortamı, belirli bir mikroorganizma türünün büyümesini destekler, ancak içinde diğer mikrop türlerinin büyümesini önlemek için hiçbir madde eklenmemiştir.

Seçici medya

Bir mikroorganizmanın spesifik büyümesini ararlar, buna mantar, bakteri, protozoa ve diğerleri olarak adlandırırlar. Bunu yapmak için başkalarının gelişimini engellerler.

Bu amaca ulaşmak için, geniş bir mikroorganizma grubu için ölümcül olan ve ilgilenilen organizma için zararsız kimyasal bileşikler eklenebilir veya yalnızca hedef mikrop tarafından özümsenebilen enerji kaynakları eklenebilir.

Patojenik bir mikroorganizmayı yetiştirmek için tıbbi numuneler alınırken seçici ortam kullanılır. Burada patojenin büyümesini teşvik etmek ve hastadan normal mikrobiyal floranın gelişmesini engellemek gereklidir.

Örneğin bizmut sülfit agar, gram-pozitif bakterilerin ve gastrointestinal boşlukta bulunan çok sayıda bakterinin büyümesine izin vermez. Bu nedenle dışkı örneklerinde tifo ateşine neden olan gram negatif bakteriler Salmonella typhi'yi yetiştirmek için kullanılır.

Diferansiyel ortam

Bu tür, aynı ortamda büyüyen başka bir türe karşı onları tanımlayabilmek için ilgilenilen organizmanın bazı teşhis özelliklerini (örneğin metabolizmasındaki özellikler) kullanır.

Hem farklı ortam hem de seçici ortam, klinik mikrobiyoloji ve halk sağlığı alanında çok faydalıdır, çünkü bu disiplinler patolojiler veya kötü hijyen koşulları ile ilgili spesifik mikroorganizmaların varlığını tespit etmelidir.

Kültüre, aranan koloniye ayırt edici bir özellik kazandıran gösterge maddeler eklenebilir. Örneğin, laktoz ve bir pH göstergesi, agar-eozin-metilen mavisi (kısaltılmış EMB) ve MacConkey agarına eklenir.

Böylece bu besiyerinde laktozu fermente etme ve aldehit üretme kabiliyetine sahip bir koloni geliştiğinde, özel bir renkte gözlenebilirler.

adımlar

Şu anda kültür ortamı, liyofilize formda satın alınabilir. Bu nedenle, hazırlık daha kolaydır ve geriye kalan tek şey ürünü yeniden sulandırmaktır. Ürünün tüm endikasyonları izlenerek içerik tartılmalı (hazırlanacak nihai miktar dikkate alınarak) ve damıtılmış suda çözülmelidir.

Sıvı ortam içeriği, sonraki sterilizasyon için istenen kaplara (Petri kapları, tüpler vb.) Bölünmelidir. Katı ortamı dağıtmak için bir mikrodalga kullanarak veya malzemeyi bir su banyosuna tabi tutarak eritmek gerekir. Ortamın pH'ı ayarlanmalıdır.

Genellikle agar, test tüplerinde veya Petri kaplarında kullanılır. Agar, son terminal kenarı diyagonal olacak şekilde uygun açıyla eğimli bir konumda katılaşırsa, bu düzenleme gaga veya eğimli tüpler olarak bilinir. Agar tamamen dikey konumda katılaştığında buna "derin" denir.

Medyayı sterilize ettikten sonra - bir otoklav kullanarak - soğumalarına izin verilir. Bunlar, mikroorganizmaların bulunmadığı bir ortamda ele alınmalıdır, en yaygın olanı, çevrelerinde aseptik bir ortam sağlayan bir çakmakla çalışmaktır.

Referanslar

1. Celis, JE (2006). Hücre biyolojisi: bir laboratuvar el kitabı (Cilt 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM ve Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiyolojik teşhis. Pan-American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Mikrobiyoloji I ve II ve Parazitoloji Uygulamaları El Kitabı. Ciudad Juarez Özerk Üniversitesi.
4. Schlegel, HG ve Zaborosch, C. (1993). Genel mikrobiyoloji. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR ve Case, CL (2007). Mikrobiyolojiye giriş. Panamerican Medical Ed.