KOAGÜLAZ TESTI: MANTIK, PROSEDÜR VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Koagülaz testi enzimi koagulaz varlığını ortaya çıkarmak için kullanılan bir laboratuvar tekniktir. Bu enzim plazmayı koagüle etme özelliğine sahiptir. 1903'te Loeb, bu enzimi tanımlayan ilk kişiydi.

Bu test, onu üreten klinik öneme sahip tek mikroorganizma olduğu için Staphylococcus aureus suşlarını stafilokokların geri kalanından ayırmaya izin veren Gram pozitif, katalaz pozitif koklar üzerinde gerçekleştirilir.

Her iki görüntü de pozitif bir Koagülaz Testi gösteriyor. Kaynak: Soldaki resim: Philippinjl. Sağdaki resim: Fotoğraf MSc yazar tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil.

Bu anlamda, negatif test yapan Staphylococaceae Ailesi üyelerine genellikle koagülaz negatif Staphylococcus adı verilir.

S. aureus dışında koagülaz üretebilen Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius ve S. delphini gibi bazı suşlar vardır.

Bununla birlikte, ilk üçü veterinerlik düzeyinde klinik öneme sahiptir ve çok nadiren insanlarda enfeksiyonlara neden olan bir ajan olarak bulunabilirken, S. delphini yalnızca deniz ortamlarında bulunur.

Ayrıca, S. hyicus ve S. intermedius mannitolü fermente etmediğinden ve S. schleiferi spp coagulans maltozu veya trehalozu fermente etmediğinden, S. aureus bu karbonhidratları fermente ettiğinden kolaylıkla ayırt edilebilirler.

Koagülaz enziminin varlığı, suşların virülansına bağlanmıştır. Bununla birlikte, önemli enfeksiyonlar üretebilen diğer virülan koagülaz negatif türler gözlendiğinden, bu teori çökmektedir.

temel

yorumlama

5-20 saniye içinde aglütinasyon (güçlü pozitif test).

20 saniye ile bir dakika arasında meydana gelen değişken aglütinasyon (gecikmiş pozitif test).

Bir dakika sonra bir miktar aglütinasyon (şüpheli kanıt). Testin tekrarlanması veya tüp yöntemiyle onaylanması önerilir.

Aglütinasyon yoktur (negatif test).

SSF ile sonuç. Her zaman negatif vermesi gerekir, otomatik olarak pozitif verirse test sonucu geçersiz olur.

-Tüp koagülaz testi

malzemeler

-Steril test tüpü

-Plazma

37 ° C'de Meryem Banyosu

Teknik

0.5 ml plazmayı steril bir pipetle 12 x 75 test tüpüne pipetleyin.Platin halkayı 2 ila 4 saf koloni ile yükleyin ve katı bir kültürden 18 ila 24 saat boyunca çalışın ve plazmada çözün. dikkatlice karıştırın ve 37 ° C'de 4 saat inkübe edin.

Tüpü ilk saat içinde çalkalamadan inceleyin, sadece hafifçe eğin. Hala bir pıhtı görülmüyorsa 4 saat tamamlanana kadar her 30 dakikada bir gözlenmeye devam edilebilir. 4 saat sonra hala negatifse, 24 saate kadar ancak oda sıcaklığında bırakılabilir. Sonucu gözlemleyin ve bildirin.

Deneyimlere dayanarak, bazı mikrobiyologlar testi gerçekleştirmek için sıvı ortamda 18 saatlik bir kültürden 500 µl bakteriyel süspansiyon kullanılmasını önermektedir.

Özellikle kan bankasından elde edilen insan plazması kullanılmışsa, kolonileri katı ortamdan emülsiyonlaştırmaya göre daha hızlı ve daha güvenilir sonuçlar sunduğu görülmektedir.

Bir et suyundan suşların kullanılması, plazmada koagülazın etkisini inhibe edebilen insan anti-stafilokokal antikorların olası varlığını seyreltmeye yardımcı olur.

yorumlama

Tüm sıvıyı (tam pıhtı) kapsayan bir pıhtı görülürse veya kalan sıvıda hiç bulunmayan pıhtı (kısmi pıhtı) pozitif bir test olarak kabul edilmelidir.

Pıhtı oluşmazsa, yani süspansiyon homojen kalırsa test negatiftir.

-Fibrinojen kullanarak koagülaz testi

Fibrinojen, plazma ile aynı şekilde kullanılır ve hem lam hem de tüp testleri için kullanılır. Plazma için tarif edildiği gibi ilerleyin ve aynı şekilde yorumlayın.

Kullanım

Staphylococcus aureus'u koagülaz negatif stafilokoklardan ayırmak için kullanılır.

QA

Pozitif kontrol olarak kullanılmak üzere S. aureus suşunun taze kültürlerini hazır bulundurun. Bir S. epidermidis suşu da bir negatif kontrol olarak mevcuttur.

Sınırlamalar

S. aureus pıhtıyı çözen bir fibrinolizin ürettiğinden, pozitif test 24 saat inkübasyonda bırakılmamalıdır.

-Güvenilir bir test için, taze veya yeni sulandırılmış plazma kullanılmalı ve taze bakteri kültürlerinin kullanılması önemlidir (18 ila 24 saat). Bu, yanlış negatifleri önler.

-Test, bir negatif ve bir pozitif kontrol ile birlikte yapılmalıdır.

-Bazı katı ortam koagülaz testini etkileyebilir. Tuzlu mannitol agardan kolonilerin kullanılması tavsiye edilmez.

-Sitratlı plazma kullanılıyorsa, yanlış pozitiflerden kaçınmak için ml plazma başına 5 ünite heparin yerleştirilmesi önerilir. Bunun nedeni, S. aureus dışındaki bazı mikroorganizmaların sitratı parçalayıp plazmanın pıhtılaşmasına neden olabilmesidir. Bu durumda Gram ve katalaz testi yapılması tavsiye edilir.

-Yüksek konsantrasyonlarda fibrinolizin üreten ve yeni oluşan pıhtıyı hızla seyrelten S. aureus suşları olduğu için tüp testinde reaksiyonu her 30 dakikada bir izlemek önemlidir. Yanlış negatiflerden kaçının.

-Testi izlerken, tüpü aniden sallamaktan kaçının, bu daha sonra eski haline dönmeyecek olan pıhtı oluşumunun başlamasını bozarak yanlış negatiflere neden olabilir.

Referanslar

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
3. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
4. Pro-Lab Laboratuvarları. Tavşan plazmayı koagüle eder. Pro-lab.com adresinde mevcuttur
5. "Koagülaz." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 12 Şubat 2019, 04:23 UTC. 22 Nisan 2019, 15:50 wikipedia.org.