BAIRD PARKER AGAR: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIM - BIYOLOJI - 2025

Agar Baird Parker bir katı ortam seçici ve diferansiyel bir kültürdür. Koagülaz pozitif stafilokokların (Staphylococcus aureus) tespiti ve sayımı için 1962'de oluşturuldu.

Kazein, et ekstresi, maya ekstresi, lityum klorür, glisin, sodyum piruvat, potasyum tellürit, agar ve yumurta sarısı emülsiyonunun pankreas hidrolizatından oluşur.

Baird Parker agar üzerinde tipik Staphylococcus aureus kolonileri. Kaynak: Daizy John

Baird Parker Agar, S. aureus'un tellüriti azaltma ve lesitinaz üretme yeteneğine dayanmaktadır. Her iki özellik de bu tür için belirli özelliklere sahip bir koloni oluşturur. Bu nedenle bu mikroorganizmanın tespit edilmesinde oldukça etkilidir.

S. aureus'un tipik kolonileri siyah veya koyu gridir, renksiz bir sınır ve onları çevreleyen ve onları diğer mikroorganizmalardan ayıran açık bir hale ile. Bu patojen klinik örneklerde, sularda, kozmetik ürünlerinde ve çiğ veya pişmiş yiyeceklerde bulunabilir.

Diğerlerinin yanı sıra gıda zehirlenmesi, haşlanmış cilt sendromu, toksik şok sendromu, apseler, menenjit, septisemi, endokardit gibi ürettiği çeşitli patolojiler nedeniyle teşhisi veya tespiti son derece önemlidir.

temel

Besleyici güç

Pankreas kazein hidrolizatı, et özütü ve maya özütü, genel mikrobiyal gelişim için gerekli olan besin, vitamin ve mineral kaynaklarıdır; piruvat ve glisin ise Staphylococcus aureus'un spesifik büyümesini destekleyen bileşiklerdir.

Seçici

Baird Parker Agar, S. aureus gelişimini desteklerken eşlik eden floranın büyümesini engelleyen maddeler içerdiğinden seçicidir. Önleyici bileşikler, lityum klorür ve potasyum tellürittir.

Diferansiyel

Bu besiyeri, S. aureus'u koagülaz negatif Staphylococci'nin geri kalanından ayırt etmeyi mümkün kılar. S. aureus, tellüriti serbest metalik siyah tellüruma indirgeme ve siyah veya koyu gri koloniler oluşturma yeteneğine sahiptir.

Benzer şekilde, yumurta sarısı, substratların lesitinaz ve lipaz enziminin varlığını göstermesini sağlar. S. aureus lesitinaz pozitiftir ve bu nedenle koloni çevresinde lesitinin hidrolize olduğunu gösteren net bir hale gözlenecektir.

Bu anlamda, etraflarında hafif bir hale bulunan bu parlak siyah veya koyu gri kolonilerin bu agarındaki görünüm S. aureus'un varlığını gösterir.

Bir çökelme bölgesi oluşursa, bu lipaz aktivitesinin göstergesidir. S. aureus'un bazı suşları lipaz pozitif ve diğerleri negatiftir.

S. aureus'un lipaz pozitif olması durumunda, siyah veya koyu gri koloninin çevresinde opak bir alan ve ardından lesitinazın etkisine bağlı olarak açık bir hale gözlenecektir.

Bu besiyerinde üreyebilen S. aureus dışındaki bakteri kolonileri, çevreleyen hale olmaksızın renksiz veya kahverengi koloniler geliştirecektir.

Atipik siyah koloniler, renksiz kenarlıklı veya kenarlıksız, ancak hafif bir hale olmadan da görülebilir. Bu koloniler dikkate alınmamalıdır, S. aureus'a karşılık gelmezler.

Hazırlık

Yumurta sarısı emülsiyonu

Taze bir tavuk yumurtası alın, iyice yıkayın ve 2 ila 3 saat% 70 alkolde bekletin. Daha sonra yumurta aseptik olarak açılır ve beyazı dikkatlice sarısından ayrılır. Daha sonra 50 ml yumurta sarısı alınır ve 50 ml steril fizyolojik solüsyon ile karıştırılır.

Potasyum tellürit% 1 w / v

Bazı ticari evler, kullanıma hazır% 1 potasyum tellürit satmaktadır. Ortam katılaşmadan önce ortama eklenir.

Bu çözeltiyi laboratuvarda hazırlamak için 1.0 g potasyum tellürit tartılır ve bir kısım su içinde çözülür. Ardından 100 ml'ye ulaşana kadar su miktarı tamamlanır. Çözelti, filtrasyon yöntemi ile sterilize edilmelidir.

Kültür ortamının hazırlanması

60 g susuz ortam tartılır ve 940 ml damıtılmış su içinde çözülür. Karışımı yaklaşık 5-10 dakika bekletin.

Çözünme sürecini iyileştirmek için ortamı sık sık karıştırarak ısı uygulayın. Bir dakika kaynatın. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

45 ° C sıcaklığa gelene kadar bekletin ve 50 ml yumurta sarısı emülsiyonu ve 10 ml% 1 tellürit ekleyin. İyice karıştırın ve 15-20 ml'yi steril Petri kaplarına dökün.

Katılaşmasına izin verin, plaketler halinde sipariş verin ve kullanıma kadar buzdolabında saklayın.

Hazırlanan besiyerinin nihai pH'ı 6.8 ± 0.2 olmalıdır.

Bir numuneyi tohumlamadan önce, plakanın oda sıcaklığına ulaşmasını bekleyin. Plakaları sürme yöntemi ile ekerek veya Drigalski spatula ile yüzey tohumlayarak tohumlayın.

Susuz ortamın rengi açık taba rengi ve hazırlanan ortamın rengi açık kehribar rengidir.

kullanım

Klinik örnekler

Klinik numuneler doğrudan ekilir, materyalin bir kısmı plakanın bir ucuna boşaltılır ve oradan tükenme ile çizilir. 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin.

Gıda örnekleri

10 gr gıda numunesi tartılır ve 90 ml% 0.1 pepton suda homojenize edilir, gerekirse buradan seyreltiler hazırlanır. Plakları, hazırlanmış solüsyonlardan 0.3 ml ile üç kez aşılayın ve bir Drigalski spatula ile yüzey üzerine tohumlayın. 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin.

Bu metodoloji, elde edilen tipik kolonilerin sayılmasına izin verir ve S. aureus varlığından g / ml örnek başına 10 CFU'nun üzerinde olduğundan şüphelenildiğinde idealdir.

S. aureus miktarının az olduğundan şüpheleniliyorsa veya eşlik eden çok fazla flora varsa, triptikaz soya suyunda numunenin% 10 NaCl ve% 1 sodyum piruvat ile zenginleştirilmesi önerilir. Bu, S. aureus'un büyümesini teşvik edecek ve eşlik eden floranın gelişimini engelleyecektir. Bulanık tüpler Baird Parker agar üzerine ekilir.

Su örnekleri

Sterilize edilmiş bir vakumlu filtrasyon sisteminde 100 ml çalışma suyu filtrelenir ve ardından 0,4 mikron mikro gözenekli membran, steril bir pens ile çıkarılır ve bir Baird Parker plakasına yerleştirilir. 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin. Bu teknik, tipik S. aureus kolonilerinin sayılmasına izin verir.

QA

Baird Parker agarın kalitesini değerlendirmek için Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 veya Proteus mirabilis ATCC 43071 gibi bilinen suşlar kullanılabilir.

S. aureus ATCC suşlarının durumunda, tellüriti düşürdüğü bilinmektedir ve bunlar lipaz ve lesitinaz pozitiftir. Bu nedenle, tatmin edici bir gelişme olmalı ve siyah bir merkeze ve renksiz bir bordüre sahip, opak bir hale ve en dışta hafif bir hale ile dışbükey koloniler büyümelidir.

S. epidermidis'in bu besiyerinde hafif bir hale olmadan kahverengimsi-gri ila siyah kolonilerle zayıf bir şekilde gelişmesi beklenmektedir.

E. coli ve P. mirabilis için tamamen veya kısmen inhibe olması beklenir. Büyüme durumunda, kahverengi koloniler opak bir alan veya hafif bir hale olmadan gelişecektir.

tavsiyeler

- Tellürit ve yumurta sarısı eklendikten sonra besiyeri ısıtılmamalıdır.

-Yumurta sarısı emülsiyonunun hazırlanması ve ortasına eklenmesi bulaşma için çok hassas bir adımdır. Çok dikkatli olunmalıdır.

- S. aureus'un tipik kolonilerinin varlığı söz konusu suş üzerine bir koagülaz testi yapılarak doğrulanmalıdır.

-Koagülaz ile şüpheli sonuçlar varsa, diğer doğrulayıcı testler yapılmalıdır.

- Tipik S. aureus kolonilerinin varlığını atipik siyah kolonilerle karıştırmamaya dikkat edin.

Referanslar

1. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Baird-Parker agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 15 Mart 2017 19:36 UTC. Mevcut: wikipedia.org/ 18 Şubat 2019 tarihinde erişildi.
2. BD Laboratuvarları. Baird Parker Agar. 2006. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
3. Britannia Laboratuvarları. Baird Parker agar tabanı. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
4. Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. 2009. Baird Parker Agar. Mevcut: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratuvarları. Potasyum tellürit. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Gıda işleyicilerinde nazofarengeal yaymalarda enterotoksijenik Staphylococcus aureus tip A'nın taşınması. Rev Med Şili 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuela Standardı Covenin 1292-89. (1989). Gıdalar. Staphylococcus aureus'un izolasyonu ve sayımı. Sencamer.gob.ve adresinde mevcuttur