BHI AGAR: KURULUŞ, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

BHI Agar agar ortamında veya Beyin Kalp İnfüzyon bir besleyici katı kültürdür. İspanyolca'da buna beyin kalp infüzyon agarı diyoruz. Seçici olmayan bir kültür besiyeridir, yani tüm Gram pozitif ve Gram negatif bakteri türlerinin yanı sıra bazı maya ve filamentli mantarların gelişebileceği anlamına gelir.

Buzağı beyni ve kalbin infüzyonu, hayvan dokularından peptik hidrolizat, kazeinin pankreas hidrolizatı, sodyum klorür, glikoz, disodyum fosfat ve agardan oluşur.

BHI plakaları. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil.

BHI agarın bakteriyoloji laboratuvarlarında en sık kullanılan kültür besiyerinden biri olduğu unutulmamalıdır. Primer kültür, diğer seçici besiyerlerinde elde edilen kolonilerin alt kültürü olarak veya laboratuvarda suşların bakımı için takviyeler olmadan kullanılabilir.

Öte yandan, kanlı agar ve çikolata agar gibi zenginleştirilmiş besiyerinin hazırlanmasında baz olarak kullanılması ideal bir besiyeridir. Her ikisi de zorlu mikroorganizmaları beslenme açısından izole etmek için idealdir. Bununla birlikte, glikoz içerdiği için hemoliz paternlerini gözlemlemek için uygun olmadığı unutulmamalıdır.

Benzer şekilde, BHI agar, aralarında büyümesi zor patojenik mikroorganizmaların izolasyonu için özel besiyerinin hazırlanmasında kullanılabilir, bunlar arasında: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ve Histoplasma capsulatum.

Antibiyotik katkı maddesi ile BHI agar, mantarların izolasyonu için seçici bir besiyeri haline gelir.

temel

Orta derecede zorlu mikroorganizmaları izole etmek için besleyici bir kültür ortamıdır ve zenginliği kan ve diğer besin takviyeleri eklenerek artırılabilir.

Seçici olmayan bir kültür besiyeridir, bu nedenle çoğu Gram pozitif ve Gram negatif bakterinin yanı sıra bazı mantarların büyümesine izin verir. Ancak antibiyotik ilavesi ile seçici hale getirilebilir.

Besiyeri sığır beyni ve kalp infüzyonu, hayvan dokusu peptik hidrolizatı ve pankreas kazein hidrolizatı içerir; Tüm bu bileşikler vitamin, amino asit, nitrojen ve karbon kaynağı olarak işlev görür.

Glikoz, mikroorganizmaları fermente ettikten sonra enerji sağlayan bir karbonhidrattır. Bu arada, sodyum klorür ve disodyum fosfat ozmotik dengeyi korur ve nötre yakın bir pH sağlar. Son olarak, agar ortama katı kıvam verir.

Hazırlık

52 gram susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış suda çözülür. Çözünme işlemi sırasında sık sık karıştırarak, karışımı kaynayana kadar bir ısı kaynağına getirin.

BHI agar plakaları veya takozları katkı maddesi olmadan hazırlanabilir.

Takozlar

Kamaların hazırlanması için, her bir tüpün yarısı dolana kadar hazırlığı servis edin, üzerini örtün ve 121 ° C'de otoklavda 15 dakika sterilize edin, çıkarken, katılaşana kadar bir taban üzerine koyun. Daha sonra kullanıma kadar buzdolabında saklayın.

Bakterioteka için BHI dilimleri. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil.

Tabaklar

Çözünen karışım 121 ° C'de 15 dakika otoklavlanır, bırakıldıktan sonra 50 ° C'ye soğumaya bırakılır ve 20 ml ortam steril Petri kaplarında servis edilir. Katılaşmalarına izin verilir, ters çevrilir ve kullanıma kadar buzdolabında saklanır. Ekimden önce plakaların oda sıcaklığına gelmesine izin verin.

Ortamın pH'ı 7,4 ± 0,2'de kalmalıdır.

Ham ortam bej renklidir ve hazırlanan ortam açık kehribar rengindedir.

Kanlı agarın hazırlanması

Ortamı sterilize ettikten sonra, yaklaşık 45 ila 50 ° C'lik bir sıcaklığa soğutun, ardından kanı (50 mi) ekleyin, homojenleştirmek için yavaşça karıştırın ve her Petri kabına aseptik olarak 20 ml servis yapın. Plakada kabarcıklar oluşursa, onları yok etmek için daha hafif alev kabarcıkların üzerinden hızla geçirilmelidir.

Benzer şekilde, karışım 45 ila 50 ° C sıcaklığa ulaştığında ilgili katkı maddeleri eklenerek özel ortam hazırlanabilir.

Ortam kiraz kırmızısı olarak kalır.

Uygulamalar

Takviye olmadan kullanın

Katkısız BHI Agar, birincil kültür olarak ve daha sonraki tanımlamaları için düşük veya orta düzeyde talep eden mikroorganizmaların saf suşlarının ekilmesi için faydalıdır.

Açık renkli bir besiyeri olduğu için pigmentleri gözlemlemek için idealdir ve müdahale eden maddeler içermediğinden üzerinde oksidaz ve katalaz gibi bazı biyokimyasal testler gerçekleştirilebilir veya kolonilerden başka biyokimyasal testler yapılabilir. agar.

Aynı şekilde, BHI agar takozları da laboratuvarda (bakterioteka) suşların belirli bir süre bakımı için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Bakteri suşları ile yüzey tarafından tohumlanan plakalar veya takozlar, 24 ila 48 saat 37 ° C'de inkübe edilir. Bu arada mantarlarda sıcaklık ve inkübasyon süresi, aranan mantarın türüne bağlı olacaktır.

Diğer besiyerinin hazırlanması için temel agar olarak

Bu temel ile zenginleştirilmiş ve seçici besiyeri hazırlanabilir.

zenginleştirilmiş

Ana işlevi, mikrobiyoloji laboratuvarlarında rutin kullanım için kanlı agar hazırlanmasına temel teşkil etmektir. Özellikle, BHI tabanı Streptococcus sp. Bununla birlikte, glikoz içerdiğinden hemoliz paternlerini gözlemlemek için uygun olmama dezavantajına sahiptir.

Haemophilus sp izolasyonu için tavşan veya at kanı agarının hazırlanmasında da kullanılır. En iyi sonuçlar için zenginleştirme eki (IsoVitaleX) eklenebilir.

Örnekler solunum yolundan geliyorsa, eşlik eden florayı inhibe etmek ve Haemophilus türü Suşların geri kazanılma olasılığını artırmak için agara basitrasin eklenebilir.

Alternatif olarak, Corynebacterium diphtheriae'yi izole etmek için sistin tellürit içeren kanlı agar (kuzu veya insan) hazırlanabilir. Aynı şekilde, Francisella tularensis'in izolasyonu için sistin ve glikoz ilavesiyle tavşan kanlı agar hazırlamak da faydalıdır.

Agar plakaları kan tohumlama tükenmenin yapılır ve 35-37 C'de inkübe edilir ° C microaerophilicity içerisinde 24-48 saat (% 5-10 CO ₂ ).

Seçici

Antibiyotiklerin eklendiği bu besiyeri, mantarların izolasyonu için Sabouraud agarın yerini alabilir.

BHI agarın kloramfenikol - gentamisin veya penisilin -, streptomisin ve at kanı ile kombinasyonu Histoplasma capsulatum izolasyonu için idealdir.

İzole edilecek mikroorganizmaya bağlı olarak, 35-37 ° C'de veya oda sıcaklığında aerobiyozda inkübasyon önerilir. Bazen bunun için 2 plaka kullanılarak her iki sıcaklık aralığında da inkübasyon gereklidir.

Trichophyton mentagrophytes gibi bazı mantarlar, oda sıcaklığında 7 güne kadar inkübe edilmelidir.

QA

Hazırlanan her partiden, 1 plağın veya kamanın 37 ° C'de 24 saat inkübe edilmesi ve üreme olmadığının doğrulanması önerilir; Kanlı agar hazırlanırken özellikle önemlidir, çünkü kolayca kontamine bir besiyeridir.

Öte yandan besiyerinin kalitesi, bilinen veya onaylanmış standart suşların inoküle edilmesi ve gelişimlerinin gözlenmesiyle değerlendirilebilir.

Bu anlamda katkı maddesi içermeyen BHI agarı değerlendirmek için Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 veya Candida albicans ATCC 10231 suşları kullanılabilir, 37 ° C'de aerobiyozda 24 ila 48 saat inkübe edilir. Her durumda, tatmin edici bir büyüme bekleniyor.

Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 veya Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 suşları, kanlı agar plakalarını değerlendirmek için tohumlanabilir.

Bakteriyel suşlar, 24 saat boyunca mikroaerofilisitede 37 ° C'de inkübe edilirken, mantar oda sıcaklığında nemli bir odada 7 güne kadar inkübe edilir. Her durumda tatmin edici bir büyüme bekleniyor.

Referanslar

1. Britannia Laboratuvarları. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Britanialab.com'da mevcuttur.
2. BD Laboratuvarları. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Beyin Kalp İnfüzyon Agarı. 2009.
4. Neogen Laboratuvarı. Brain Heart Infusion Agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
5. Gil M. Blood agar: temel, kullanım ve hazırlık. 2018. şu adresten ulaşılabilir: lifeder.com.
6. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Beyin kalp infüzyonu. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 19 Eylül 2018 03:58 UTC. Wikipedia.org adresinde mevcuttur. 2 Mart 2019'da erişildi.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.