Agar Biggy bir katı ortam seçici ve diferansiyel bir kültürdür. Ana Candida türlerinin izole edilmesi ve tanımlanmasına yardımcı olmak için tasarlanmıştır. BIGGY adı, İngilizce Bizmut Glikoz Glisin Mayasındaki kısaltmadan gelir.
Orijinal formül Nickerson tarafından oluşturuldu, bu yüzden bu besiyeri aynı zamanda Nickerson agar olarak da bilinir. Şu anda maya ekstresi, glisin, dekstroz, amonyum sitrat, bizmut sitrat, sodyum sülfit ve agardan oluşmaktadır.
BIGGY agar'ın grafik gösterimi. Kaynak: Flickr.com
BIGGY agar, Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei ve C. kefyr türlerinin farklılaşması için formüle edilmiştir, ancak Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum gibi diğer türler de büyür. ve Saccharomyces cerevisiae.
İyi bir duyarlılığa ve özgüllüğe sahiptir, ancak benzer işleve sahip diğer ortamlarla karşılaştırıldığında, ikinci sıradadır ve CHROMagar tarafından aşılmıştır. Bu nedenle, birçok laboratuvar çok daha pahalı olmasına rağmen ikincisini tercih etmektedir.
BIGGY agar ve diğer benzer araçların kullanımının hızlı bir varsayımsal tanımlamaya yardımcı olduğu, ancak asla doğrulayıcı olmadığı açık olmalıdır. Bu nedenle, ek tanımlama yöntemleri mevcut olmalıdır; örneğin, Vitek 32 ve API 20 tanımlama sistemleri.
temel
BiGGY agar, diğer cinsler de büyüyebilmesine rağmen, mayaların, özellikle Candida cinsinin izolasyonu için kısmen seçici bir besiyeri olarak kabul edilir.
Aynı zamanda diferansiyel bir ortamdır çünkü dahil olan türe bağlı olarak görünüm, renk, şekil ve boyut bakımından farklı özellikler gözlemlenecektir. Kolonilerde farklı renklerin gelişmesi nedeniyle kromojenik bir ortam olarak kabul edilir.
Maya kolonilerinin rengi, agardaki bizmut sülfit varlığından kaynaklanmaktadır. Nickerson, Candida cinsinin mayalarının bizmut sülfitin hücre dışı bir indirgemesini gerçekleştirerek onu bizmut sülfite (çözünmeyen siyah bir madde) dönüştürdüğünü fark etti. Bu, açık kahverengi ila siyah kolonilerle sonuçlanır.
Bu agar, maya gelişimi için temel besin ve enerji kaynağı olan maya özü ve dekstroz içerir. Glisin, belirli bakterilerin büyümesini engellerken, maya büyümesini uyarıcıdır.
Bu aynı anlamda, amonyum ve bizmut sitrat ve ayrıca sodyum sülfit, bakteri büyümesinin inhibitörleri olarak hareket eder. Agar, besiyerine katı kıvam veren ajandır.
Hazırlık
45 g susuz kültür ortamını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde çözün. Karışımı çalkalayın ve tamamen çözünene kadar 1 dakika kaynatın. Bu kültür ortamı otoklavlanamaz.
Bir su banyosunda yaklaşık 45 ° C'ye soğutulduktan sonra, steril Petri kaplarına 20 ml dökün.
Susuz ortamın rengi sarımsı gridir ve sarımsı beyaz bir jeldir, burada hafif bir topaklanma çökeltisi gözlemlenebilir.
PH 6.8 ± 0.2 olmalıdır.
Hazırlanan besiyeri buzdolabında (4 ° C) saklanmalı ve ışıktan korunmalıdır. Otoklavlanamayan bir besiyeri olduğu için en kısa sürede kullanılmalıdır. Hazırlanmasından 3 gün önce kullanılması tavsiye edilir.
kullanım
Plakalar oda sıcaklığında (25 ° C) 24, 48 ve 72 saat inkübe edilir ve inkübasyon süresi 5 güne kadar uzatılabilir.
Candida'nın her türü, onları diğerlerinden ayıran belirli özellikler geliştirir. Besiyerinin üreticileri, her tür için aşağıdaki özellikleri açıklar:
-Candida albicans kompleksi: Bu agarda hafif bir miselyal sınır ile pürüzsüz, yuvarlak, kahverengi veya siyah koloniler halinde gelişir. Koyu rengin ortaya dağılmaması dışında.
-Candida tropicalis: siyah merkezi ve hafif miselyal sınırı olan parlak, küçük, koyu kahverengi koloniler. Koyu renk, bu türün tipik bir özelliği olan ortaya doğru yayılır, 72 saat inkübe edildikten sonra.
-Candida krusei kahverengiden siyaha çalan kenarları olan büyük, düz, kaba görünümlü koloniler geliştirir.
-Candida parakrusei: orta büyüklükte koloniler, çoğu zaman pürüzlü, düz. Renk parlak koyu kırmızımsı kahverengiden açık kırmızımsı kahverengiye kadar değişebilir. Kolonilerin sınırları geniş, sarımsı miselyuma sahiptir.
-Candida stellatoidea: orta, düz koloniler geliştirir, koyu kahverengi, neredeyse siyahtır. Miselyal gelişimi çok azdır.
Yücesoy ve Marol tarafından 2003 yılında yapılan bir çalışma, CHROMagar besiyerinin farklı Candida türlerinin farklılaşması ve tanımlanmasında BIGGY agara göre daha iyi duyarlılık ve özgüllüğe sahip olduğunu göstermiştir.
QA
Sterilite kontrolü için, aşılanmamış plakalar 25 ° C'de karanlıkta 24 ila 48 saat inkübe edilir, herhangi bir üreme veya renk değişikliği olmaması beklenir.
Besiyerinin kalite kontrolü için önerilen ATCC suşları şunlardır:
Candida albicans ATCC 60193 kompleksi, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Bunların hepsinde yukarıda tarif edildiği gibi büyüme beklenir.
Aşağıdaki suşlar da kullanılabilir:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ve Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. İlk ikide toplam inhibisyon beklenir, ancak kısmen büyüme durumunda koloniler krem renginde olacaktır.
S. aureus durumunda, tamamen inhibe olması beklenir, ancak kısmen büyürse kolonileri beyazdır.
Sınırlamalar
Bazı bakteriler bu besiyerinde üreyebilir ve bir Candida kolonisini simüle ederek rengi koyulaşabilir, ancak koloniye bulaşıp mikroskop altında gözlemlendiğinde kolayca atılır.
Tablo: Yücesoy M ve Marol S'nin çalışmalarına göre BIGGY agarda bazı mayaların kolonilerinin özellikleri.
Kaynak: Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida ve BIGGY agarın maya türlerinin belirlenmesi için performansı. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Referanslar
- Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida ve BIGGY agarın maya türlerinin belirlenmesi için performansı. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Teknik Veri Sayfası BIGGY Agar. Şu adresten ulaşılabilir: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratuvarları. BÜYÜK agar. Condalab.com'da mevcuttur
- BD Laboratuvarları. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. bd.com'da bulunabilir