- temel
- Hazırlık
- Safra eskülin agarının ev yapımı hazırlanması
- Safra eskülin agarının ticari bir besiyerinden hazırlanması
- Uygulamalar
- ekilen
- yorumlama
- QA
- Sınırlamalar
- Referanslar
Safra eskülin, agar seçici ve diferansiyel maddesinin katı bir kültürdür. Belirli bir mikroorganizmanın safra içeren bir ortamda üreme yeteneğini belirlemek ve ayrıca glukozid eskülini eskülin ve glikoza parçalamak için tanısal bir test olarak kullanılır.
Bu tanı testi, D grubuna (safra eskülin pozitif) ait Streptococcus cinsinin türlerini, bu teste olumsuz tepki veren diğer Streptococcus gruplarından ayırmak için kullanılır.
Bir Enterococcus suşu ile tohumlanmış safra eskülin agar plakası (test pozitif). Kaynak: Makine tarafından okunabilen yazar sağlanmadı. Philippinjl varsayıldı (telif hakkı taleplerine dayanarak).
Viridans grubunun bazı Streptococcus'larının eskülini hidrolize edebildiği, ancak% 40'lık bir konsantrasyonda safra varlığında büyüyemediği, bu nedenle bu besiyerinde bu grup için reaksiyonun negatif olduğu belirtilmelidir.
Öte yandan, safra eskülin ortamı, Listeria monocytogenes veya Aerococcus sp türlerinin teşhisi için de yararlıdır, çünkü bu mikroorganizmalar safra eskülin pozitiftir.
Esculin Bile Agar; pepton, et ekstresi, öküz safra, eskülin, demir sitrat, agar ve damıtılmış sudan oluşur. Bazı ticari evler, ortamın bileşimi içinde sodyum azit içerir.
Tüm bileşiklere ayrı ayrı sahipseniz, besiyeri laboratuvarda hazırlanabilir veya ticari dehidrate ortamdan hazırlanabilir.
temel
Safra eskülin ortamı peptonlar ve et özü içerir, her iki bileşik de mikroorganizmaların büyümesi için gerekli besinleri sağlar.
Aynı zamanda eskülin içerir; Bu bileşik, basit bir monosakkaritin (glikoz), bir asetal veya glukozidik bağ ile bağlanan 6,7-dihidroksikumarin veya esculetin (aglukone) adı verilen bir bileşikle birleşmesiyle oluşan bir glikozittir.
Test, bakterinin eskülini hidrolize edip edemediğini göstermeye dayanmaktadır. Bu meydana gelirse, eskülin eskülin ve glikoza parçalanır. Esculetina, ortamda bulunan demir ile reaksiyona girerek koyu kahverengi, neredeyse siyah bir bileşik oluşturur.
Bu, ferrik sitratın bir reaksiyon geliştirici olarak hareket ettiği anlamına gelir. Bu özellik, Bile Esculin Agar'ı diferansiyel bir besiyeri yapar.
Safra, bazı mikroorganizmaların büyümesini engelleyen bir inhibitördür, bu nedenle bakteri, eskülini parçalamadan önce safra varlığında büyüyebilmelidir. Bu nedenle, bu ortam seçici kabul edilir.
Bu ortamda gelişebilen bakteriler esas olarak bağırsak ortamında yaşayanlardır.
Bu anlamda, bazı ticari şirketler, enterik Gram negatif basillerin büyümesini daha da engellemek için ortama sodyum azit ekleyerek, Streptococcus'un büyümesi için ortamın seçiciliğini arttırır.
Son olarak, agar ortama katı kıvamı verir ve su, bileşiklerin çözücüsüdür.
Hazırlık
Safra eskülin agarının ev yapımı hazırlanması
Tartmak:
5 gr pepton
3 gr et özü
40 gr sığır safrası
1 gr eskülin
0.5 g demir sitrat
15 g agar
1000 ml damıtılmış su
Sodyum azit eklenmesi durumunda 0.25 g / litre tartılır ve karışıma eklenir.
Bileşenleri litre damıtılmış suda çözün, bileşikler tamamen çözünene kadar ısıtın. 5 ml'yi 16 x 125 mm vidalı kapaklı test tüplerine dağıtın. 121 ° C'de 15 pound basınçta 15 dakika otoklavlayın.
Otoklavdan çıkarın ve tüpleri bir destek üzerine yatırın, böylece agar geniş bir gaga şeklinde katılaşır.
Kullanana kadar buzdolabında saklayın. Ekimden önce oda sıcaklığına getirin.
Safra eskülin agar plakaları da hazırlanabilir; bu durumda, karışımın tamamı bir şişede otoklavlanır ve ardından steril Petri kaplarına dağıtılır. Katılaşmalarına ve buzdolabında saklanmalarına izin verin.
Ortamın pH'ı 6,6 ± 0,2 olmalıdır.
Safra eskülin agarının ticari bir besiyerinden hazırlanması
Ekte belirtilen miktarı tartın. Bu, bir iş evinden diğerine değişebilir. Ardından, yukarıda açıklanan prosedürün aynısını uygulayın.
Ortamın pH'ı 6,6 ± 0,2 olmalıdır. Susuz ortamın rengi açık bejdir ve hazırlanan ortam koyu kehribar rengidir.
Ticari safra eskülin ortamı. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil.
Uygulamalar
Safra eskülin ortamı, esas olarak Grup D Streptococcus'u (safra eskülini pozitif), Streptococcus gruplarının geri kalanından (safra eskülini negatif) ayırt etmek için kullanılır.
Aşırı tuzlu broth büyüme testini safra eskülin testi ile birleştirmek, Enterococcus adı verilen özel bir Grup D Streptococcus grubunu tanımlayabilir.
Bu özel Streptococcus grubu, yukarıda bahsedilen cinsin D grubuna aittir ve D grubunun geri kalanı gibi safra varlığında eskülini hidrolize edebilir, ancak aynı zamanda aşırı tuzlanmış bir ortamda (BHI % 6.5 sodyum), fark yaratan bir özellik.
Bu nedenle, eskülin safrayı hidrolize eden ancak aşırı tuzlanmış et suyunda büyümeyen Streptokoklara enterokok dışı Grup D Streptokoklar denir.
ekilen
Ortamı tercihen saf bir Todd-Hewitt 24 saatlik broth'tan inoküle edin.
Bir Pastör pipeti ile besiyerinin yüzeyine 2 damla ekleyin ve platin halka ile ortama yayın.
35 ° C'de 48 saat inkübe edin, inkübasyon süresi dolduğunda pozitif reaksiyon olup olmadığını görmek için izlenebilir. Süre sonunda reaksiyon negatif kalırsa, 72 saate kadar inkübe edilebilir.
yorumlama
Pozitif reaksiyon : flüt gagasında koyu kahverengi, neredeyse siyah bir renk görünümü (tüp testi durumunda) veya koloniler etrafında agarın kararması (plaka testi durumunda).
Negatif reaksiyon : besiyerinde kararma oluşmaz veya 72 saatlik inkübasyondan sonra tüpün yarısından azında siyah bir renk görülür. Öte yandan, siyah renk görünümü olmadan besiyerinde bakteri üremesi negatif bir test olarak kabul edilmelidir.
QA
Besiyerinin kalitesini değerlendirmek için, pozitif kontrol olarak bir Enterococcus faecalis ATCC 29212 suşu ve negatif kontrol olarak D grubuna ait olmayan bir Streptococcus suşu bulunmalıdır.
Sınırlamalar
-Sodyum azit içermeyen medya, enterik Gram negatif basillerin büyümesine izin verir. Bazıları ortayı karartabilir.
- Bazı ticari evler düşük konsantrasyonda safra (% 10) ekler ve bu nedenle D grubuna ait olmayan bazı Streptococcus besiyerinde gelişebilir ve eskülini hidrolize edebilir ve bu da yorumlamada hatalara neden olabilir.
Referanslar
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
- Lab. Britannia. Azide agar ile eskülin safra. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
- "Bile Esculin Agar." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 22 Ağu 2017, 17:30 UTC. 22 Nisan 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
- Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Neogen Laboratuvarları. Safra eskülin agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com