ÇIKOLATA AGAR: TEMELI, KULLANIMLARI VE HAZIRLANMASI - BIYOLOJI - 2025

Çikolata agar katı bir kültür ortamı, zenginleştirilmiş, non - Seçici olmayan - diferansiyel. İçinde her türlü bakteri üreyebilse de, esas olarak beslenme açısından talep gören mikroorganizmaların izolasyonu için kullanılır.

Bu nedenle özellikle CSF ve eklem sıvısı gibi normalde steril olan numunelerin tohumlanmasında faydası artmaktadır. Aynı zamanda polimikrobiyal numunelerin ekilmesi için seçilen araçlara dahil edilmesine rağmen, bu durumlarda, eşlik eden florayı inhibe eden antibiyotiklerin eklenmesi gerekir.

Bakteri üremesine sahip çikolata agar

Bu besiyeri, çikolataya çok benzeyen karakteristik bir kahverengi renge sahiptir, dolayısıyla adı. Hazırlık kanlı agara çok benzer, ancak bu durumda kırmızı kan hücrelerinin parçalanması için kanın ısıtılması gerekir.

Kanlı agar gibi hazırlanışı çok hassastır, çünkü kolayca kirlenir. Bu nedenle, birçok laboratuvar, kalitesini garanti eden ticari şirketler tarafından önceden hazırlanmış bu besiyerini almayı tercih eder.

temel

Bu besiyeri, besin açısından zengin bir agar tabanı ve ısıtılmış kandan oluşur. Kırmızı kan hücrelerinin hemolizi, Haemophilus cinsi gibi bazı mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan faktör X'i (hemin) ve faktör V'yi (NAD) sağlar. Ayrıca Neisserias sp izolasyonu için çok faydalıdır.

Kanlı agar gibi, ihtiyaca bağlı olarak farklı ortamlar baz agar olarak kullanılabilir. En çok tavsiye edilenler Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar ve Thayer Martin agar olmasına rağmen, kullanılan besiyerleri arasında beyin kalp infüzyonu ve triptikaz soya agarı bulunmaktadır.

Çikolata agarının bazı varyantları, ticari olarak temin edilebilen Isovitalex veya Polivitex adı verilen güçlendirilmiş bir ek içerir.

Bu takviyeler, B ₁₂ vitamini , L-glutamin, adenin, guanin hidroklorür, p-aminobenzoik asit, nikotinamid adenin dinükleotit (NAD), tiamin pirofosfat, ferrik nitrat, tiamin hidroklorür, sistein hidroklorür, L-sistin ve glikoz içerir.

Çikolata agarın kanlı agardan daha zengin olduğuna dikkat etmek önemlidir, ancak hemoliz modellerinin gözlemlenmesine izin vermez.

Uygulamalar

Kaynak: pixnio.com. Yazar:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Columbia agar ile hazırlanmış çikolata agar

Bu besiyeri, kazein ve kalbin pankreas sindirimi, etin peptik sindirimi, sodyum klorür, agar, maya özü ve mısır nişastası içerir. Aynı zamanda vitaminler, mineraller ve esansiyel amino asitler açısından da zengindir.

Bu ısıtılmış kan bazı, Neisseria cinsi bakterilerin izolasyonu için idealdir. Diğer yandan, besiyerine ek olarak Brucella için bir takviye eklenirse, söz konusu mikroorganizma izole edilebilir. At kanı kullanılarak sonuçlar iyileştirilir.

GC bazlı agar ile hazırlanmış çikolata agar (gonokoklar için)

Bu besiyeri peptonlar, mısır nişastası, monobazik ve dibazik tamponlar, sodyum klorür ve agar içerir.

Ticari olarak hazırlanmış çikolata agar sunumlarının çoğu bu bazla birlikte gelir ve ısıtılmış kan içermez, bunun yerine sentetik bir hemin karışımı ve büyüme faktörleri, vitaminler, mineraller, amino asitler, faktör V ve glikozdan oluşan bir kimyasal destek içerir.

Müeller Hinton agar ile hazırlanan çikolata agar

Streptococcus pneumoniae gibi güç üreyen mikroorganizmaların antimikrobiyal duyarlılığını% 5 ısıtılmış koyun kanı kullanarak test etmek için kullanılır.

Aynı zamanda, Neisserias ve Haemophilus'un birincil izolasyonu için de kullanılır, ancak özellikle Haemophilus izolasyonu durumunda, zengin bir faktör X ve V kaynağı olduğu için at kanı kullanılması tercih edilir.

Öte yandan ekilecek örnek steril olmayan bir bölgeden geliyorsa, bölgenin normal florasını engellemek için antibiyotik ilavesi önerilir.

Haemophilus cinsine ait bakterilerin varlığından şüphelenilen solunum örnekleri için örnek, basitrasin Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ve saprofitik Neisserias'ın büyümesini inhibe etmek için kullanılır.

Haemophilus ducreyi'den şüphelenilen genital şans örnekleri durumunda, aşağıdaki şekilde hazırlanan bir çikolata agarı başarıyla kullanılmıştır: Müeller - Hinton agar,% 5 çikolatalı at kanı,% 1 Isovitalex zenginleştirme ve 3 µg / ml vankomisin.

Thayer Martin agar ile hazırlanan çikolata agar

Bu besiyeri, Neisseria gonorrhoeae'nin izolasyonu için özeldir. Eşlik eden florayı engellemek için antibiyotik içermelidir. Kuzu kanı kullanılır.

Hazırlık

Kullanılacak baz agarın hazırlanması için endikasyonları görmelisiniz. Susuz ortamın kabının arkasında bulunurlar. Genellikle bir litre kültür ortamı hazırlamak için ne kadar tartmanız gerektiğini açıklarlar.

İhtiyaç duyulan kesin miktar laboratuvarda hazırlanabilir, bir litreden fazla veya az olabilir.

Hesaplamalar

İstenilen hacmi hazırlamak için ne kadar tartılacağını hesaplamak için üç kuralı kullanılır. Misal:

1 litre için 40 gr ağırlığında ve laboratuvar 800 ml gerektiriyorsa şöyle söylenir:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formül aşağıdaki gibi olacaktır:

X = 32 gr (800 ml için tartılacak miktar).

Tartın ve çözün

Gerekli miktar tartılır ve suyla birlikte bir şişeye konur.

Orta ateşte ısıtın ve susuz ortam tamamen çözülene kadar döner hareketlerle yavaşça karıştırarak 1 dakika kaynatın.

Sterilizasyon

Balon, ortamı 121 ° C'de 20 dakika süreyle sterilize etmek için otoklava yerleştirilir.

Kan kümeleşmesi

Otoklavdan çıkarken, kanı yerleştirmek ve ortam kahverengiye dönene kadar karıştırmak için ortam sıcaklığı yaklaşık 56 ila 70 ° C arasında olana kadar beklemeye bırakılır.

Takviye ekliyorsanız, bunu yapmanın tam zamanı. Daha sonra karıştırın ve her steril Petri kabına 20 ml servis yapın.

Prosedürün tamamı, bir laminer akış başlığında veya Bunsen brülörünün çevresinde yapılmalıdır.

Katılaşana kadar bekletin ve ters çevrilmiş olarak buzdolabında saklayın.

Kan kullanmadan çikolata agar hazırlamanın başka bir yolu

Baz ortamı yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanır, ticari olarak elde edilen dehidre edilmiş hemoglobin otoklavda çözülür ve sterilize edilir.

Her iki çözelti de 50 ° C'ye soğumaya bırakılır, birleştirilir ve ek eklenir. Aseptik koşullar altında karıştırın ve ardından steril Petri kaplarında servis yapın.

QA

Kırmızı kan hücrelerini parçalamak ve aynı zamanda ısıya duyarlı olan faktör V'yi korumak için ideal olduğundan, kanın belirtilen sıcaklıkta yerleştirilmesi önemlidir.

Agar yüzeyinde kabarcık kalmamalıdır. 100 plaklık her bir partiden, sterilitelerini doğrulamak için 37 ° C'de 24 saat fırında bir veya iki plaka inkübe edilmelidir.

En iyi sonuçlar için çikolata agar hazırlandıktan kısa bir süre sonra kullanılmalıdır.

Kontrol bakteri suşları, klinik öneme sahip ana güç üreyen mikroorganizmaların büyümesi için taze besiyerinin etkinliğini değerlendirmek için laboratuvarda tutulmalıdır.

Referanslar

1. Garcia P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Hizmeti.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mikrobiyoloji Laboratuvarı'nda GC-Biocen Agar temel kültür besiyerini kullanma fizibilitesi. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Mevcut: scielo.sld.
5. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Çikolata agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 17 Aralık 2018, 19:54 UTC. Şu adresten ulaşılabilir: en.wikipedia.org.