Simmons sitrat agar biyokimyasal tanımlama test mikroorganizmaları, özellikle de gram olarak kullanılan bir katı madde orta - negatif basiller. Orijinal ortam 1923'te Koser tarafından oluşturuldu.
Koser's Sitrat ortamı, sodyum fosfat, amonyum fosfat, monopotasyum fosfat, magnezyum sülfat ve sodyum sitrat içeren bir besiyerinden oluşuyordu.
A. Dehidre edilmiş Simmons Citrate Agar ticari besiyeri B. Hazırlanan Simmons Citrate Agar. Kaynak: A. Fotoğraf MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil B.Roto2esdios, Wikimedia Commons'tan
Görülebileceği gibi, ortamdaki tek karbon kaynağı sitrattır ve nitrojen amonyum fosfattır, bu elementlerin kaynağı olarak proteinler ve karbonhidratlar çıkarılır, bunlar genellikle diğer ortamlarda bulunurlar.
Bu nedenle, bu besiyerinde aşılanan bakteriler ancak sitrattan karbonu alabiliyorsa çoğalabilir. Ortamda bulanıklık varsa test pozitifti, ancak spesifik olmayan bulanıklığın oluşması dezavantajına sahipti.
Bu sorun, Koser'in orijinal formülüne bromotimol mavisi ve agar eklenerek Simmons tarafından çözüldü. İlke aynı olsa da farklı yorumlanıyor.
temel
Bazı bakteriler, fermantasyon veya laktik asit üretimi olmadığında hayatta kalma kabiliyetine sahiptir ve diğer substratların kullanımıyla enerji elde etme ihtiyacı duyar. Bu testte sunulan tek karbon kaynağı sitrattır.
Bu koşullar altında hayatta kalabilen bakteriler, trikarboksilik asit döngüsü veya sitrat fermantasyon döngüsü kullanarak geleneksel yola alternatif olarak sitratı hızla metabolize eder.
Sitratın bakteriler tarafından katabolizması, koenzim A'nın müdahalesi olmaksızın enzimatik bir mekanizmayı içerir. Bu enzim, sitrikaz (sitrat oksaloasetat-liyaz) veya sitrat desmolaz adıyla bilinir. Reaksiyon, bu durumda magnezyum tarafından sağlanan iki değerlikli bir katyonun varlığını gerektirir.
Reaksiyon, oksaloasetat ve piruvat üretir, bu daha sonra nitrojen kaynağının kullanılmasıyla oluşan alkali pH'ın ortasında organik asitlere yol açar. Bu organik asitler, çevreyi daha da alkalileştiren karbonatlar ve bikarbonatlar üreten bir karbon kaynağı olarak kullanılır.
Ekim modu
Simmons sitrat besiyeri, düz bir öze veya iğne kullanılarak balık kuyruğuna hafifçe inoküle edilmeli ve 35-37 ° C'de 24 saat inkübe edilmelidir. Zaman geçtikten sonra sonuçlar gözlemlenir.
Tohumlama sadece agarın yüzeyinde yapılır. Delmeyin.
yorumlama
Ortam orijinal renkte (yeşil) kalırsa ve görünür bir büyüme yoksa, test negatiftir, ancak ortam maviye dönerse, pH göstergesi tarafından tespit edilen alkali ürünlerin varlığını gösterir. Bu durumda test pozitiftir.
Sitrat (+) ve (-). Kaynak: MSc. Marielsa Gil
Bunun nedeni, bakteri sitratın karbonunu kullanması durumunda, amonyak saldığı amonyum fosfatın nitrojenini de alarak ortamı alkalileştirebilmesidir.
Öte yandan besiyerinde bakteri üremesi gözlemleniyor ancak renk değişikliği yoksa test de pozitif kabul edilmelidir, çünkü büyüme varsa bakterinin karbon kaynağı olarak sitratı kullanabileceği anlamına gelir, Şu anda pH'ta bir değişiklik olmamasına rağmen (bazen zaman alabilir).
Son rengin yorumlanmasında herhangi bir şüphe varsa, aşılanmamış sitrat tüpü ile karşılaştırılabilir.
Hazırlık
Bir litre su için 24,2 g susuz besiyerini tartın. Karıştırın ve yaklaşık 5 dakika dinlendirin. Sık sık çalkalayarak 1 veya iki dakika ısıtarak besiyerini çözmeyi bitirin.
4 ml'yi test tüplerine dökün ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın. Otoklavı terk ederken, bir destek yardımıyla, agar küçük blok veya dipli ve daha fazla eğimli bir oluk gaga şeklinde katılaşacak şekilde eğin.
Sitrat ortamının nihai pH'ı 6.9'dur (yeşil renk). Bu ortam pH'daki değişikliklere çok duyarlıdır.
PH 6 veya altında, ortam sarıya döner. Bakteri testinde bu renk gözlenmez.
Ve pH 7,6 veya üzerinde, ortam koyu Prusya mavisine döner.
kullanım
Simmons Citrate Agar, belirli mikroorganizmaların, özellikle Enterobacteriaceae familyasına ait basillerin ve diğer glikoz olmayan fermente edici basillerin tanımlanması için kullanılır.
Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
Son düşünceler
Simmons sitrat besiyeri çok hassas bir testtir, çünkü bazı hatalar yapılırsa yanlış pozitifler elde edilebilir.
Alınması gereken özen şunlardır:
Aşı
Besiyerinin geri kalanını etkilemeden ekim yerinde bakırımsı sarı bir renk oluşmasına neden olabileceği için çok kalın veya yüklü bir bakteri aşısı yapılmamalıdır, ancak üreme olduğuna inanılmasına yol açabilir. Testin olumlu olduğu anlamına gelmez.
Ayrıca, kalın bir aşı, yanlış bir pozitif oluşturabilir çünkü ölmekte olan bakterilerin hücre duvarlarında önceden oluşan organik bileşikler, pH göstergesini döndürmek için yeterli karbon ve nitrojen salabilir.
Bu nedenle ideal olan, fazla malzeme almamak için platin sap yerine iğne kullanarak ekim yapmaktır.
ekilen
Öte yandan, söz konusu mikroorganizmanın tanımlanmasına yönelik biyokimyasal testler dizisi tohumlanırken, başka bir ortamdan proteinlerin veya karbonhidratların taşınmasını önlemek için ilk aşılanacak sitrat testinin olması önemlidir.
Bu durumda yanlış bir pozitif elde etmek mümkündür, çünkü yanlışlıkla eklenen bu maddelerden herhangi biri metabolize olur ve pH'ta bir değişikliğe neden olur.
Maddelerin taşınmasını önlemenin bir başka yolu da özeyi iyice yakmak ve bir test ile diğeri arasında yeni bir inokülum almaktır.
İnokülumu gerçekleştirmek için koloniye dokunurken de dikkatli olunmalıdır, çünkü yukarıda açıklanan nedenlerle, agarın bir kısmının bakterilerin geldiği kültürden çekilmesinden kaçınılmalıdır.
Bu anlamda, Matsen, Sherris ve Branson, diğer karbon kaynaklarının transferini önlemek için sitrat testini inoküle etmeden önce inokülumu fizyolojik solüsyonda seyreltmeyi önermektedir.
Renk yoğunluğu
Test pozitif olduğunda üretilen rengin yoğunluğunun ticari eve göre değişiklik gösterebileceği dikkate alınmalıdır.
Ek olarak, 24 saatte pozitif test yapan mikroorganizmalar vardır, ancak pH'ta bir değişiklik oluşturmak için 48 saat veya daha uzun süre gerektiren başka suşlar da vardır.
Referanslar
- Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- BD Laboratuvarları. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Britannia Laboratuvarları. Simmons Citrate Agar. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
- Valtek Tanı Laboratuvarları. Simmons Citrate Agar. 2016. andinamedica.com adresinden ulaşılabilir.