CLED AGAR: GEREKÇE, KULLANIMLAR VE HAZIRLIK - BIYOLOJI - 2024

CLED agar (Sistin-laktoz-Elektrolit-Eksikli), üriner sistem enfeksiyonlarının teşhisi için kullanılan katı bir kültür ortamı diferansiyel vardır. Kültür ortamının bileşimi, üriner patojenlerin iyi büyümesi için tasarlanmıştır ve koloni oluşturan birimlerin (CFU) miktarının belirlenmesi için idealdir.

CLED kültür besiyeri seçici değildir, çünkü içinde Gram negatif ve Gram pozitif mikroorganizmalar gelişebilir. Ancak bu bir sorun değildir, çünkü çoğu İYE'ye yalnızca bir tür mikroorganizma neden olur.

CLED agar

Polimikrobiyal enfeksiyon durumunda 2 veya 3 farklı bakteri kapabilirsiniz, ancak çok nadirdir ve çoğu zaman kontamine örneklerdir.

Bu besiyerinde büyüyebilen Gram negatif bakteriler arasında Enterobacteriaceae familyasına ait basiller ve diğer enterik basiller bulunur; idrar örneklerinde en sık izole edilen üropatojenler şunlardır: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa ve diğerleri.

Aynı şekilde, bu besiyerinde üreyebilen Gram pozitif bakteriler arasında Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp ve Candida albicans kompleksi gibi mayalar bile büyüyebilir.

Bununla birlikte, besiyerinin kimyasal bileşimi nedeniyle, diğerleri arasında Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis gibi bazı zorlu genitoüriner patojenlerin büyümesine izin vermez.

CLED Agar Gerekçesi

CLED kültür besiyerinde enerji kaynağı olarak et özütü, kazeinin pankreas hidrolizatı ve jelatin hidrolizatı bulunur. İddiasız bakterilerin gelişimi için besin sağlarlar.

Koliformların büyümesine izin veren ve küçük boyutları ile ayırt edilebilen bir amino asit olan sistin de içerir.

Aynı şekilde, fermente edilebilir bir karbonhidrat olarak laktoz içerir, bu nedenle bu ortam farklıdır; fermente eden bakterileri laktoz içermeyen fermentasyondan ayırt edebilme.

Fermente bakteriler besiyerinin pH'ının asit üretimi ile değişmesine ve sarı koloniler geliştirmesine neden olurken, fermente olmayan bakteriler besiyerinde değişiklik oluşturmaz, bu nedenle yeşil orijinal agar rengini alırlar.

Fermantasyon reaksiyonu, bu ortamda bromotimol mavisi olan pH indikatörünün varlığı sayesinde ortaya çıkar.

Öte yandan, ortamın düşük elektrolit konsantrasyonu, Proteus cinsinin kümelenme etkisi adı verilen tipik invazif büyümesini engeller. Bu, Proteus cinsinin mevcut olup olmadığı da dahil olmak üzere CFU'ların sayılmasına izin verdiği için diğer ortamlara göre bir avantaj oluşturur.

Bununla birlikte, elektrolitlerin düşük konsantrasyonu, Shigella cinsinin bazı türlerinin büyümesini engeller, bu, diğer ortamlara kıyasla bir dezavantajdır.

CLED agar (Bevis) için gerekçe

Orijinal bileşime asit fuksin (Andrade indikatörü) ekleyen Bevis tarafından yapılan bu besiyerinin bir varyantı veya modifikasyonu vardır. Fermentasyonu fermente olmayan bakterilerden ayırmak için bromotimol mavisi ile birlikte çalışır.

Geleneksel ve değiştirilmiş besiyeri arasındaki fark, kolonilerin aldığı renktir. Laktoz fermente eden bakteriler söz konusu olduğunda, koloniler pembe veya kırmızı bir halo ile kırmızımsı-turuncu olurken, fermente olmayanlar mavimsi-gridir.

Uygulamalar

CLED agar, yalnızca idrar örneklerinin tohumlanması için kullanılır. Bu besiyerinin kullanımı özellikle Avrupa laboratuvarlarında yaygındır, Amerika'da ise daha az kullanılmaktadır.

Örnek toplama, güvenilir sonuçlar elde etmek için aşağıdakiler dahil belirli parametreleri karşılamalıdır:

• Numune almadan önce antibiyotik almamak.
• Örneği invaziv yöntemlerle almak mümkün olmadığında, daha konsantre olduğu için sabah ilk saatin idrarını tercihen alın.
• Örnek almadan önce cinsel organları iyice yıkayın.
• İlk idrara çıkma akışını atın ve ardından kabı yerleştirin.
• İyi etiketlenmiş steril bir kapta 25 ila 30 ml idrar toplayın.
• Hemen buzla çevrili laboratuvara götürün.
• Yayınlandıktan sonraki 2 saat içinde işlenmeli veya maksimum 24 saat 4 ° C'de soğutulmalıdır.

İdrar numunelerinin tohumlanması

İdrar numunesi 1:50 oranında seyreltilmelidir.

Seyreltme için 0,5 ml hasta idrarı koyun ve 24,5 ml steril fizyolojik solüsyonla seyreltin.

0.1 ml seyreltilmiş idrarı ölçün ve CLED besiyerinde drigalski spatula ile yayılan yüzey. Bu, kolonileri saymak için en iyi tohumlama yöntemidir. Bu nedenle idrar örneklerinde kullanılır, çünkü sonuçlar CFU / ml cinsinden ifade edilmelidir.

Elde edilen kolonileri ölçmek için şu şekilde devam edin: plakadaki kolonileri sayın ve 10 ile ve sonra 50 ile çarpın. Bu size CFU / ml idrar miktarını verir.

yorumlama

100.000 CFU / ml'nin üzerindeki sayımlar -– İdrar enfeksiyonunu gösterir

1000 CFU / ml'nin altındaki sayımlar - Enfeksiyon yok

1000-10.000 CFU / ml arasında sayar -– Şüpheli, olası kontaminasyon, örneklemeyi tekrarlayın.

İD

CLED agarda yetiştirilen koloniler bir Gram'a sahip olmalıdır ve mikroorganizmanın morfotintoryal özelliklerine bağlı olarak belirli bir alt kültür yapılır.

Örneğin, bir Gram negatif basil ise, laktozun fermantasyonunun ya da olmamasının desteklendiği bir MacConkey agar üzerine ekilecektir. Ek olarak, oksidaz testini gerçekleştirmek için bir besleyici agar eklenir.

Gram, Gram pozitif koklar ortaya çıkarsa, tuzlu mannitol agarda ve besleyici agarda alt kültürlenebilir. İkincisi, katalaz testi yapılır. Son olarak, mayalar gözlemlenirse, Sabouraud agar üzerine ekilecektir.

Birçok laboratuvar CLED besiyerini kullanmaktan kaçınır ve idrar numunelerini tohumlamak için yalnızca kanlı agar, MacConkey ve besleyici agar kullanmayı tercih eder.

Hazırlık

Bir litre damıtılmış su içeren bir şişede 36.2 g CLED agar tozu çözülür. 5 dakika bekledikten sonra yeniden süspanse edilen agarı ısıtın ve 1 dakika kaynatmak için sürekli karıştırın.

Daha sonra otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Süre sonunda otoklavdan çıkarılır ve 45 ° C'ye soğumaya bırakılır. Daha sonra her steril Petri kabına 15-20 ml servis edilir.

Plaka servis prosedürü, kirlenmeyi önlemek için laminer akış başlığı içinde veya Bunsen brülörünün önünde gerçekleştirilmelidir.

Servis edilen tabaklar katılaşmaya bırakılır, ters çevrilmiş bir rafta düzenlenir ve kullanıma kadar buzdolabında (2-8 ° C) saklanır.

Hazırlanan besiyerinin son pH'ı 7,3 ​​± 0,2 olmalıdır.

Referanslar

1. Üriner enfeksiyonun mikrobiyolojik tanısı için öneriler. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
2. Panchi J. Mesane kateterizasyonu geçiren yatan hastalarda idrar yolu enfeksiyonlarına neden olan mikrobiyal ajanın tanımlanması. 2016. Klinik Laboratuvarda Lisans derecesi almaya hak kazanmak için lisans çalışması. Ambato Teknik Üniversitesi. Ekvador.
3. Britannia Laboratuvarları. CLED ortamı. Britanialab.com'da mevcuttur.
4. Renylab Laboratuvarları. Kullanım talimatları, CLED Agar. 2013 Şu adresten ulaşılabilir: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Mikrobiyoloji Temel El Kitabı. Şu adreste bulunabilir: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. İdrar kültürü rutininde CLED agar seçeneği. İleriye dönük ve karşılaştırmalı bir değerlendirme. Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. Garcia P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Hizmeti.