CZAPEK AGAR: MANTIK, HAZIRLIK, KULLANIMLAR VE SINIRLAMALAR - BIYOLOJI - 2025

Czapek (CZA) özel saprofıtik bakteriler ve mantarlar yetiştirilmesi için tasarlanmış seçici bir katı ortamdır. Polonya kökenli botanikçi Friedrich Johann Franz Czapek ve Amerikalı kimyager Arthur Wayland Dox tarafından yaratıldı; bu nedenle bu agar, Czapek-Dox besiyeri olarak da bilinir.

Orijinal ortam sıvıydı, ancak daha sonra katı bir ortam yapmak için agar ilave edildi. Czapek besiyeri sodyum nitrat, bipotasyum fosfat, magnezyum sülfat, potasyum klorür, demir sülfat, sükroz, agar ve damıtılmış sudan oluşur.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Kaynak: A. Medmyco / B. Fotoğraf: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Czapek agarın pH'ı 7,3'tür, ancak% 10 laktik asidin eklendiği, pH'ı 3,5'te kalan bir varyant vardır. Bu asit ortamı, asidofilik mikroorganizmaların kültivasyonu için kullanılır.

Öte yandan, bazı ticari evler gliserofosfat ile magnezyum sülfat ve bipotasyum fosfatı değiştirerek Czapek agar bileşimini değiştirdiler; bu modifikasyon, geleneksel formülle gözlemlenen magnezyum fosfat çökeltisinin oluşmasını önler. Benzer şekilde, maya özütünün eklendiği başka bir varyant vardır.

Son olarak, Czapek agar, Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp ve Penicillium sp çalışmaları için Amerikan Halk Sağlığı Derneği APHA tarafından tavsiye edilmektedir. Bu türler çevresel mikroorganizmalar ve fırsatçı patojenler olmaları ile karakterize edilir.

temel

Bu besiyeri sükroz içerir; Bu karbonhidrat karbon kaynağı olarak görev yaparken sodyum nitrat nitrojen kaynağıdır, ancak diğer ortamlardan farklı olarak sağlanan nitrojen inorganiktir.

Bu nedenle, Czapek besiyeri seçici olarak kabul edilir, çünkü yalnızca tek nitrojen kaynağı olarak inorganik bileşikleri kullanabilen mikroorganizmalar büyüyebilir.

Ortamın ozmolaritesini düzenleyen bir madde olarak bipotasyum fosfattır. Magnezyum sülfat, potasyum klorür ve demir sülfat, saprofitik (serbest yaşayan) mikroorganizmaların büyümesi için gerekli mineralleri sağlar. Bu formül bir magnezyum fosfat çökeltisi oluşturur.

Son olarak, agar-agar, ortama katı kıvamı sağlayan bileşiktir ve su, tüm bileşenler için çözücüdür.

Modifiye edilmiş Czapek agar formülü ile çökelti oluşmaz ve bazı mantarların büyüme performansını artırır.

Acid Czapek Agar'ın aşırı asiditesi, onu daha seçici bir besiyeri haline getirir ve yalnızca inorganik nitrojen kullanabilen asidofilik mikroorganizmaların büyümesine izin verir. Bu arada, Czapek-maya agar bazı mantarların performansını artırır.

Hazırlık

Orta Czapek-Dox

49 g susuz kültür ortamını tartın ve damıtılmış suda çözün. Kaynayana kadar ısı uygulayın. Karışımı tamamen çözülene kadar sık ​​sık sallayın.

-Czapek Agar Takozları

Çözünmüş karışımı tüplere dağıtın ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın. Otoklavdan çıkarırken, tüpleri yerleştirmeden önce homojenize edin ve katılaşmaya bırakın.

-Czapek agar plakaları

Çözülmüş karışımı 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın ve 50 ° C'ye soğumaya bırakın, homojenleştirin ve 20 ml steril Petri kaplarına dökün. Katılaşın, ters çevirin ve kullanıma kadar buzdolabında saklayın.

PH 7,3 ± 0,2'de kalmalıdır. Susuz ortamın rengi beyazdır ve hazırlanan ortam hafif kehribar rengindedir ve topaklaşan bir çökeltinin varlığından dolayı hafif bulanıktır.

Asidik pH'ta Czapek ortamı

Daha önce tarif edildiği gibi hazırlayın, ancak hazırlanan her litre ortam için 10 ml steril% 10 laktik asit ekleyin. Değiştirilmiş Czapek ortamı pH 3.5 ± 0.2'de olmalıdır.

Modifiye Czapek Medium

45.4 g susuz besiyerini tartın ve 1 litre su içinde çözün. Hazırlığın geri kalanı yukarıda açıklananla aynıdır. Susuz ortamın rengi beyazdır ve hazırlanan ortam beyazımsıdır. Ortamın nihai pH'ı 6.8 ± 0.2'dir.

Czapek-maya besiyeri

Czapek Maya Ekstresi Agarı (CYA) olarak da adlandırılır. Klasik Czapek agar ve maya ekstraktının unsurlarını içerir.

kullanım

Czapek besiyeri diğerlerinin yanı sıra toprak, sebze, tahıl, hava, böcek örneklerinde saprofitik mikroorganizmaları aramak için kullanılır.

Asidik pH'ta Czapek agar, asidofilik mikroorganizmaların büyümesi için kullanılırken, modifiye edilmiş Czapek agar, özellikle Candida albicans kompleksi türlerinde klamydosporların oluşumu için kullanışlıdır.

Son olarak, Czapek-maya agarı Aspergillus ve Penicillium izolasyonu için çok faydalıdır.

ekilen

-Çapek agar

Toprakta Actinomycetes aramak için, aşağıdaki şekilde ilerleyin: numune fenolize su ile 30 dakika muamele edilir ve ardından 1 mL süspansiyon Czapek agar üzerine ekilir. 28 ° C'de 5 ila 7 gün inkübe edin.

Sebze, tahıl ve böcek örnekleri için doğrudan agar üzerine yerleştirilir. Ayrıca agar yüzeyine 0.1 ml seyreltme ve tohumlama yapabilirsiniz.

-Modifiye Czapek agar

Tohumlama için düz bir öze veya iğne kullanılır, swab ile emprenye edilir ve agar, plağın tabanına değene kadar bir delik yapılarak inoküle edilir. 28 ° C'de 24 saat inkübe edin ve klamidosporların oluşup oluşmadığını görmek için plakanın üstünde ve altında mikroskop altında inceleyin.

Kuluçka sıcaklığı ve süresi

İnkübasyon sıcaklığı ve süresi izole edilecek mikroorganizmanın türüne bağlı olarak değişir. Plakalar genellikle bir ila iki hafta süreyle 20 ila 25 ° C sıcaklık aralığında inkübe edilir.

Bununla birlikte, bazı suşlar için özel koşullar vardır. Örneğin, Aspergillus cinsinin çoğu türü, 30 ° C'de optimum şekilde büyür; ancak A. fumigatus 50 ° C'de büyür.

İnkübasyon süresi ile ilgili olarak bir veya iki hafta normaldir, ancak Candida albicans 25 ° C'de 24 ila 48 saat içinde gelişebilir.

Bu besiyerindeki bazı kolonilerin özellikleri

-Penicillium atrovenetum

27 ° C'de 12 günlük inkübasyonda gelişir. Kolonileri küçüktür (25 mm).

Koloniler, belirli bir beyaz sınır ve merkezde yaşlandıkça griye dönen mavi-yeşil bir tonla kadifemsi bir görünüme sahiptir. Koloninin arka tarafı turuncudur ve pigment üretimi nedeniyle ortayı aynı renk yapar.

-Aspergillus niger

Beyazdan sarıya miselyum ve siyah sporlarla gelişir.

-Candida albicans

Kremsi açık bej koloniler gelişir. Modifiye edilmiş Czapek agarda klamidosporlar oluşturur.

Aspergillus parasiticus

25 ° C'de 7 günde koyu yeşil miselyum gelişir.

QA

Kültür ortamının kalitesini değerlendirmek için, sertifikalı kontrol suşları ekilebilir, örneğin: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger, yaklaşık 5 gün içinde beyaz ila sarı miselyum ve siyah sporlar geliştirirken, Candida albicans 25 ° C'de 24 saatlik inkübasyonda tatmin edici bir gelişim gösterecektir; koloniler krem ​​renklidir.

Sınırlamalar

Bazı çalışmalar, Actinomycetes geri kazanımı için en iyi verime sahip agarın patates dekstroz agar, ikinci sırada Czapek agar olduğunu, ancak Aspergillus ve Penicillium'un geri kazanımı için Czapek agarın en yüksek iyileşme oranını sağlayan agar olduğunu ortaya koymuştur.

Referanslar

1. Dávila M, vd. Tarımsal önemi olan fitopatojenik mantarlara karşı antagonistik aktinomisetler. Rev. Mex. Bilim. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Depolanan yeşil kahvede (Coffea arabica) okratoksin A üreten Aspergillus niger suşlarının izolasyonu. Rev. Mex. Mikrofon. 2010; 32: 63-68. .Scielo.org adresinde mevcuttur.
3. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Czapek orta. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 13 Ocak 2019, 20:30 UTC. Şu adresten ulaşılabilir: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratuvarları. Değiştirilmiş Czapek-Dox Agar. Condalab.com'da mevcuttur
5. Culture Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible: Medioscultivo.com