EMB agarı Gram negatif basillerin katı kültür izolasyonu, özellikle Enterobacteriaceae ve iddiasız diğer Gram negatif bakteriler için kullanılan bir seçici ve diferansiyel besiyeridir. Eozin-metilen mavisi anlamına gelen EAM kısaltmasıyla da bilinir.
Bu besiyeri, Holt-Harris ve Teague tarafından 1916'da oluşturuldu. Pepton, laktoz, sukroz, dipotasyum fosfat, agar, eozin, metilen mavisi ve su içerir. Özellikle sakaroz içermeyen Levine Modifiye EMB Agar kullanıldığında MacConkey Agar'a çok benzer.
EMB agar üzerinde Escherichia coli'nin metalik parlaklığı Kaynak: Carmen Moreno González, Wikimedia Commons'tan
Aslında, her laboratuvar biyokimyasal olarak farklı olmalarına rağmen aynı işlevi yerine getirdikleri için biriyle mi yoksa diğeriyle mi çalışacağına karar verir.
Proteus cinsi tarafından kümeleme üretimi açısından klasik MacConkey agar ile aynı dezavantaja sahiptir. Bu nedenle, bu fenomeni önlemek için agar konsantrasyonu% 5'e kadar arttırılabilir.
temel
Seçici
EMB agar, çoğu Gram pozitif bakterinin ve bazı güç üreyen Gram negatif çubukların büyümesini önleyen inhibitör olarak görev yapan anilin boyaları (eozin ve metilen mavisi) içerdiği için ince bir şekilde seçicidir.
Bununla birlikte, bu agar bazı Gram pozitif bakterilerin inhibe edici maddelerin varlığına direnebilmesi ve Enterococcus faecalis ve bazı Staphylococcus gibi küçük renksiz noktalı koloniler halinde büyüyebilmesi dezavantajına sahiptir.
Candida albicans kompleksi gibi çok küçük pembe koloniler verecek bazı mayalar da büyüyebilir. Klamidosporlar, numune derin tohumlanırsa bu mayadan bile gelişebilir.
Diferansiyel
Öte yandan, EMB agar da diferansiyel bir ortamdır, çünkü bu boyalar (eozin ve metilen mavisi) birlikte asidik pH'ta bir çökelti oluşturma özelliğine sahiptir, bu nedenle üretiminin göstergeleri olarak hizmet ederler.
Bu nedenle, zayıf laktoz veya sükroz fermente eden bakteriler 24 ila 48 saat içinde mor koloniler oluşturur. Örneğin, Klebsiella, Enterobacter ve Serratia cinsleri.
Yersinia enterocolitica veya Proteus penneri gibi Escherichia coli veya sükroz gibi laktozu güçlü bir şekilde fermente eden bakteriler, bu türlerde karakteristik bir metalik parlaklık veren yeşilimsi siyah bir çökelti oluşturur.
EMB levine besiyeri (sükrozsuz) kullanılırsa, Yersinia enterocolitica ve Proteus penneri'nin berrak koloniler oluşturacağına dikkat edilmelidir.
Laktozu veya sükrozu fermente etmeyen bakteriler, bakteriyel büyüme için gerekli amino asitleri ve nitrojeni sağlayan ve berrak koloniler oluşturan peptonların varlığıyla beslenir. Örneğin, diğerleri arasında Salmonella ve Shigella cinsleri.
Benzer şekilde, Acinetobacter cinsinin, bir laktoz fermenteri veya sukroz olmasa da, hücre duvarında metilen mavisini sabitleme özelliğine sahip olmasına rağmen, lavanta mavisi koloniler sunabildiğine dikkat etmek önemlidir. Bu, diğer oksidatif bakterilerde de olabilir.
Hazırlık
Orijinal kurutulmuş ortam açık bej renklidir.
Bu kültür ortamını hazırlamak için, 36 gram susuz ortam tartılmalı ve bir litre damıtılmış su içeren bir şişe içinde süspanse edilmelidir.
Karışımı 5 dakika dinlendirdikten sonra, muflayı bir ısı kaynağına alın, iyice ve sürekli olarak kaynayıp tamamen eriyene kadar karıştırın.
Daha sonra zaten çözülmüş kültür ortamı otoklav kullanılarak 121 ° C'de 15 dakika sterilize edilmelidir.
Süre sonunda otoklavdan çıkarılır ve kısa süre bekletilir. Daha sonra, hala ılık (45-50 ° C), her steril Petri kabına 15-20 ml agar servis edilir. Besiyeri turnusol mavisi olmalıdır.
Servis yaptıktan sonra, tabaklar agar hafifçe soğuyana kadar hafifçe açık bırakılır. Daha sonra örtülür ve tamamen katılaşmalarına izin verilir. Daha sonra ters çevrilmiş tabak tutuculara yerleştirilir ve kullanıma kadar buzdolabında (8 ° C) saklanır.
Bu prosedür, kontaminasyonu önlemek için tercihen laminer bir akış başlığı içinde veya bir Bunsen brülörünün önünde gerçekleştirilir.
Her ticari işletmenin, kültür ortamını hazırlamak için tartılacak miktarı göstereceğini unutmamak önemlidir.
Ortamın nihai pH'ı 7.2 ± 0.2 olmalıdır
Uygulamalar
Bu besiyeri, özellikle bu besiyerinde çok iyi büyüyen Enterobacteriaceae familyasına ait basiller gibi güç üremeyen Gram-negatif basillerin varlığından şüpheleniliyorsa, idrar ve dışkı veya herhangi bir klinik örnek ekmek için kullanılır.
Shigella ve Salmonella cinslerinin enteropatojenik bakterileri, renksiz veya hafif amber kolonileriyle ayırt edilir.
Diğerlerinin yanı sıra Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter gibi diğer laktoz fermente etmeyen basiller de büyür.
Benzer şekilde, bu besiyeri gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde çok kullanışlıdır, çünkü koliformların belirlenmesinin tam doğrulayıcı aşaması için, yani bulanık EC broth'larından E. coli'nin varlığını doğrulamak için idealdir. en olası sayı tekniği (MPN).
QA
Taze hazırlanmış kültür besiyerinin iyi çalıştığını doğrulamak için, kolonilerin özelliklerini gözlemlemek ve beklendiği gibi verdiklerini doğrulamak için kontrol suşları ekilebilir.
Bunun için ATCC suşları veya E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ve S. aureus gibi bazı Gram pozitif bakterilerin iyi tanımlanmış suşları kullanılabilir.
E. coli'nin, yeşil metalik parlaklığa sahip, iyi gelişmiş mavi-siyah koloniler oluşturması beklenmektedir. Oysa Enterobacter aerogenes ve Klebsiella sp iyi gelişmiş mavimsi-siyah mukoza kolonileri vermelidir.
Öte yandan, Salmonella typhimurium ve Shigella flexneri, renksiz veya hafif kehribar renkli büyük koloniler geliştirmelidir.
Son olarak, Pseudomonas aeruginosa cinsi düzensiz büyüklükte renksiz koloniler halinde büyürken, Gram pozitif bakteriler tamamen inhibe edilmeli veya çok küçük kolonilerle seyrek olarak büyümelidir.
Son düşünceler
Bazen sterilizasyon, metilen mavisinin azalmasına ve orta turuncu bir renk göstermesine neden olur. Metilen mavisinin okside olması ve mor rengini geri kazanması için, renk düzelene kadar hafifçe karıştırılmalıdır.
Ayrıca sterilizasyondan sonra boya çökelebilir, bu nedenle Petri kaplarına servis yapmadan önce iyice karıştırılmalıdır.
Referanslar
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. 2009. Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi için Teknikler. 2. baskı Kimya Fakültesi, UNAM. Meksika.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Peru'daki Tavuk Çiftliklerinden Broyler Tavuklarından İzole Edilen Potansiyel Olarak Patojenik Escherichia coli Suşlarının Karakterizasyonu ve Dağıtımı. Rev. Investiga. Veteriner. Peru 2012 23 (2): 209-219. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin ve Metilen Mavisi Agar. 2010. Condalab.com'da mevcuttur.
- Britannia Laboratuvarları. Levine EMB (Eosin ve Metilen Mavisi ile) 2011. britanialab.com'da bulunabilir
- BD Laboratuvarları. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Değiştirilmiş. 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA