Endo agar veya Endo ortamı bir katı ortam, ayırıcı ve seçicilik kültürünün bir dereceye kadar olan. Orijinal formül 1904 yılında Endo tarafından laktoz fermentasyonunu fermente olmayan bakterilerden ayırmak için oluşturuldu. Başlangıçta Salmonella typhi'nin izolasyonu için tasarlanmıştı, ancak daha sonra besiyerinin amacı koliform aramaya döndü.
Endo Agar'ın prensibi aynı kaldı, ancak formülasyonu yıllar içinde sayısız değişikliğe uğradı. Şu anda besiyeri, hayvan dokusunun peptik sindirimi, laktoz, dipotasyum hidrojen fosfat, sodyum sülfit, bazik fuksin ve agardan oluşmaktadır.
A: Virgin Endo Agar B: Tohumlanmış Endo Agar, agarın ortasında bir E. coli suşunun metalik parlaklığını fark edebilirsiniz. Kaynak: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Besiyerinin ana kullanımı, Enterobacteriaceae ailesine ve diğer yakın ailelere ait Gram negatif basillerin izolasyonu ve farklılaşması ile ilişkilendirilmiştir.
Uzun süre su, süt ürünleri ve gıda örneklerinde koliformların saptanmasında kullanıldı, ancak bugün bu besiyerinin kullanımı benzer işlevlere sahip başkaları tarafından değiştirildi. Bununla birlikte, bazı mikrobiyoloji laboratuvarları bu agarı Enterobacteriaceae'nin klinik kaynaklı örneklerden izolasyonu için kullanır.
temel
Endo agar, iddiasız mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan amino asitler, nitrojen, karbon ve enerji kaynağı görevi gören peptonlar içerir.
Öte yandan, agarın hafif seçici karakteri, sodyum sülfit ve bazik fuksin ilavesiyle sağlanır; her iki bileşen de Gram pozitif bakterilerin çoğunun büyümesini kısmen veya tamamen engeller.
Farklı karakter, bu durumda laktoz ve bazik fuksin olan ve aynı zamanda bir pH indikatörü olarak da hizmet eden fermente edilebilir karbonhidratın varlığı ile verilir.
Bu agar üzerinde büyüyen ve laktozu fermente edebilen Gram-negatif bakteriler güçlü pembe koloniler oluşturacaktır; Escherichia coli'nin patognomonik olması nedeniyle yanardöner yeşilimsi metalik parlaklığa sahip koyu kırmızı kolonilerin oluşumu. Bu, karbonhidrat fermantasyonundan yüksek asit üretiminden kaynaklanmaktadır.
Kolonilerin etrafındaki besiyerinin de güçlü bir pembe renge döndüğü unutulmamalıdır. Laktozu fermente etmeyen Gram negatif çubuklar, ortama veya renksizliğe benzer soluk pembemsi koloniler oluşturur.
Dipotasyum hidrojen fosfat besiyerinin pH'ını dengeler ve agar katı kıvamı sağlayan bileşendir.
Hazırlık
Endo agar
41.5 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Ortam tamamen çözülene kadar karışımı sık sık karıştırarak ısıtın. Otoklavda 121 ° C'de 15 lb basınçta 15 dakika sterilize edin.
Otoklavdan çıkarırken, yaklaşık 45-50 ° C'ye kadar soğumaya bırakın, servis yapmadan önce karışımı homojen hale getirmek için sallayın. 20 ml'yi steril Petri kaplarına dökün.
Buzdolabında saklamadan önce plakaların katılaşmasına, ters çevrilmesine ve bir plaket içinde saklanmasına veya koyu renkli kağıtla sarılmasına izin verin. Hazırlanan besiyerini doğrudan ışıktan korumak çok önemlidir. En iyi uygulama, tam olarak ihtiyacınız olan miktarı hazırlamaktır.
Buzdolabında saklanırsa, kullanmadan önce plakaların ısınmasına izin verilmelidir.
Besiyerinin pH'ı 7.2 ile 7.6 arasında olmalı ve hazırlanan besiyerinin rengi soluk pembedir.
M-Endo agar varyantı
Endo agarın (m-Endo), McCarthy, Delaney ve Grasso'nun formülünü izleyen, daha fazla bileşik içeren ve preparasyon şeklinde değişen başka bir versiyonu vardır.
Bu varyant şunları içerir: laktoz, triptoz, kazeinin enzimatik sindirimi, hayvan dokusunun enzimatik sindirimi, sodyum klorür, dibazik potasyum fosfat, sodyum sülfit, maya özütü, monobazik potasyum fosfat, bazik fuksin, sodyum deoksikolat, lauril sülfat sodyum ve agar.
Bu durumda 51 g susuz ortam tartılır ve 20 ml etanol içeren 1 litre damıtılmış su içinde süspanse edilir.
Ortam tamamen çözülene kadar karıştırırken hafifçe ısıtın. Aşırı ısıtılmamalı ve otoklavlanmamalıdır. Karışım homojen hale geldiğinde steril Petri kaplarında servis edin ve katılaşmaya bırakın.
kullanım
Bazı ülkelerde, gıda ve su örneklerinde toplam ve fekal koliformları saymak için hala kullanılmaktadır, özellikle dışkı kontaminasyonunun ana göstergesi olarak Escherichia coli varlığı.
M-Endo Agar, Amerikan Halk Sağlığı Derneği (APHA) tarafından dezenfeksiyon ve atık su arıtma programlarının izlenmesi ve kontrolü ile içme suyu kalitesinin değerlendirilmesi için tavsiye edilmektedir.
En yaygın kullanılan yöntem, numuneyi Lauril sülfat et suyu ile 2 ila 4 saat zenginleştirdikten sonra membran filtrasyonudur.
Bulutlu EC broth'larından E. coli varlığını doğrulamak için özellikle tam doğrulama aşamasında olmak üzere, en olası sayı tekniği (MPN) ile gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde EMB agar yerine kullanılabilir.
QA
Hazırlanan Endo agar partisinin kalitesini değerlendirmek için bilinen veya sertifikalı kontrol suşları ekilir.
Bu amaçla kullanılabilecek suşlar arasında Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus 14CC14CC 11700 .
Suşlar tükenerek tohumlanır ve aerobiosis içinde 37 ° C'de 24 saat inkübe edilir.
Beklenen sonuçlar:
- Escherichia coli için: metalik parlaklığa sahip güçlü kırmızı koloniler.
- E. cloacae ve K. pneumoniae için koloniler pembe mukoid olmalıdır.
- S. typhimurium, S. flexneri ve P. mirabilis durumunda, koloniler genellikle soluk pembe veya renksizdir.
- Son olarak, E. faecalis'in kısmen inhibe edilmesi beklenmektedir, bu nedenle büyümesi çok küçük, güçlü pembe kolonilerle zayıf olmalıdır.
Sınırlamalar
-Endo besiyerinin seçici gücü düşük olduğundan Staphylococcus, Enterococcus gibi bazı Gram pozitif mikroorganizmaların ve hatta mayaların gelişmesi mümkündür.
-Pseudomonas sp ve Aeromonas sp gibi Enterobacteriaceae Ailesine ait olmayan diğer basiller bu besiyerinde gelişebilir. Bu türlerin özellikleri renksiz düzensiz kolonilerdir.
-Bu hazırlanan ortam ışığa karşı çok hassastır, bu nedenle uzun süre maruz kalması gösterge sistemini bozarak ortama geri dönüşü olmayan bir şekilde zarar verir.
- Besiyerinin bileşenleri kanserojen olarak kabul edilir, bu nedenle doğrudan temastan kaçınılmalıdır.
- Susuz ortam çok higroskopiktir ve orijinal kabında oda sıcaklığında, sıkıca kapatılmış ve kuru bir ortamda tutulmalıdır.
Referanslar
- BD Laboratuvarları. Endo Agar. 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Neogen Laboratuvarları. M Endo Agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
- Endo Agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 7 Eylül 2017, 08:27 UTC. 28 Şub 2019, 22:55. Şu adresten ulaşılabilir: en.wikipedia.
- MercK Laboratuvarı. Endo agar. 2019. Merckmillipore.com adresinde bulunabilir
- Teknik Sayfa Laboratuvarları. M –Endo Agar LES. 2015. liofilchem.net adresinde bulunabilir