MISIR UNU AGARI: ARKA PLAN, HAZIRLIK VE KULLANIM - BIYOLOJI - 2025

Mısır unu ağarı bazı mantar alt kültür ve Candida albicans karmaşık suşları chlamydospores gösterilmesi için yararlı olan bir katı kültür ortamı, düşük besin güçtür. İngilizcede Corn Meal Agar olarak bilinir.

Geleneksel mısır unu ortamı çok basit bir bileşime sahiptir, mısır unu, agar-agar ve su içerir. Düşük besin seviyesi nedeniyle mantar suşlarının özellikle siyah mantarlar olmak üzere orta süreler boyunca bakımında kullanım için idealdir.

A. Candida albicans Kompleksinin mısır unu agarı üzerindeki grafik temsili. B. Mikroskop altında görülen, mısır unu agarında oluşan Candida albicans Kompleksinin klamydosporları. Kaynak: A. GrahamColm / B. Yazan: CDC / Dr. William Kaplan, Nezaket: Halk Sağlığı Resim Kitaplığı.

Agarın hazırlanması sırasında% 1 Tween 80 eklenirse, Candida albicans kompleksinin sporlanması bu besiyerinde tercih edilir. Klamydosporların oluşumu bu türün karakteristiğidir ve pratik olarak insanları etkileyen tek şeydir.

Klamydosporları oluşturan başka türler de vardır, ancak penguen dışkılarında bulunan Candida australis veya nadiren karşılaşılan bir saprofit olan C. clausenii gibi insanları etkileme olasılığı düşüktür. Benzer şekilde, istisnai olarak, C. stellatoidea ve C. tropicalis türleri onları oluşturabilir.

Öte yandan, mısır unu ortamına glikoz eklenmesi, Trichophytom rubrum suşlarında pigment oluşumunu kolaylaştırır.

Cryptococcus neoformans gibi mısır unu agarında diğer cinslerden farklı olarak hif veya pseudohyphae oluşturmayan mantarlar bulunduğunun vurgulanması önemlidir.

Mısır unu agarı evde laboratuarda yapılabilir veya ticari besiyeri de kullanılabilir.

temel

Mısır unu substrattır, agar katılaştırıcı ajandır ve su çözücüdür.

Mısır unu agarı, tween 80 (sorbitan monooleat veya polisorbat polyester 80) ile desteklenebilir. Bu bileşik, emülsifiye edici gücü nedeniyle ortamın yüzey gerilimini azaltır.

Aynı zamanda, abartılı hücre çoğalmasını engelleyen ve hif büyümesini uyaran, ayrıca klamydosporların üretimini destekleyen düşmanca bir ortam yaratır; ikincisi direniş yapıları olarak değerlendirildi. Bu yapı, Candida albicans türlerinin tanımlanmasına yardımcı olur.

Bu besiyerindeki glikoz, bazı mantarların pigment oluşturma kapasitesini artırır.

Glikozlu mısır unu ortamının, Candida albicans kompleksinde klamidosporların gösterilmesi için yararlı olmadığı unutulmamalıdır.

Hazırlık

Ev Yapımı Mısır unu Agar Hazırlama

47 g sarı mısır unu tartın ve 500 ml damıtılmış suda çözün. Yaklaşık 1 saatlik bir süre boyunca preparatı karıştırarak 60 C'ye ısıtın. Daha sonra bir parça gazlı bez ve pamuktan süzülür, isteğe bağlı olarak preparat Whatman No. 2 filtre kağıdından geçirilerek tekrar süzülebilir.

Distile su ile hacmi 1000 ml'ye tamamlayın. 17 g agar-agar ekleyin, çözünene kadar ısıtın. 121ºC'de 15 dakika otoklavlayın.

Steril Petri kaplarında servis yapın. Buzdolabında saklayın.

Hazırlanan besiyerinin rengi beyazımsı olup yumrulu bir görünüme sahiptir.

Yukarıda anlatılan hazırlığa glikozlu mısır unu hazırlamak isterseniz 10 gr glikoz ekleyin.

Ticari mısır unu agarı

17 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış suda çözülür. Karışım tamamen çözünmesi için hafifçe çalkalanarak ısıtılabilir. Otoklavda 121 C'de 15 lb'de 15 dakika sterilize edin.

Steril Petri kaplarına dökün. Katılaşalım. Ters çevirin ve kullanıma kadar buzdolabında saklayın. Kullanmadan önce temperleyin.

25 ºC'de pH 6,0 ± 0,2 olmalıdır.

Tween 80'li mısır unu agarı

ISO 18416'ya uymak için mısır unu agarı aşağıdaki gibi hazırlanmalıdır:

Litre başına 65 gram tartın ve 10 ml Tween 80 ekleyin. Aşırı ısınmamaya dikkat ederek eriyene kadar birkaç dakika ısıtın ve kaynatın. 121ºC'de 15 dakika sterilize edin.

Glikozlu mısır unu agarı

Trichophyton rubrum kolonilerinin kromojenik gücünü iyileştirmek ve onları T. mentagrophytes'ten ayırt etmek için orijinal formüle% 0,2 glikoz eklenebilir. Glikoz klamidospor oluşumunu engellediği için Tween 80'e sahip olmanıza gerek yoktur.

kullanım

Esas olarak, mısır unu agarının kullanımı Candida suşlarının incelenmesi için tasarlanmıştır ve albicans türlerinde klamydosporların karakteristik gözlemi yoluyla bunların tanımlanmasına yardımcı olur. Yani, bu agarın kullanımı, bu mayaların teşhis edilmesi için yardımcı bir yöntem görevi görür.

Hem saprofitik hem de patojenik türler bu agarda gelişebilir, ancak her biri karakteristik miselyal yapıları oluşturur. Örneğin, Torulopsis cinsinin türleri miselyum üretmez ve sadece blastoconidia ile çoğalır.

Aynı şekilde, Trichosporon ve Geotrichum türleri, mısır unu agarında artroconidia üretir ve bazen birini diğerini ayırt etmek zordur.

Geotrichum cinsinin artroconidia, hokey sopasını andıran bir uzantı üretir.

Ayrıca glikoz ile takviye edilmiş mısır unu agarı kullanılarak pigment üretimi, Trichophytom rubrum'un tanımlanmasında faydalıdır.

ekilen

Primer kültür besiyerinde - Sabouraud agar - klinik örneklerden, kozmetiklerden, topraklardan ve diğerleri arasında elde edilen şüpheli Candida kolonileri mısır unu agarında alt kültürlenir. Ortam tohumlanır ve 22 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edilir. İnkübasyon süresi gerekirse uzatılabilir.

Chlamydospore gösterimi

Bu amaçla, Tween 80'li mısır unu agarı Dalmau tekniği kullanılarak inoküle edilmelidir. Bu yöntem, şüpheli koloninin bir kısmını platin tutacakla alıp ortada üç paralel kesim yaparak sapı 45º'de tutmayı içerir. Kesikler birbirinden 1 cm mesafe ile ayrılmalıdır.

Daha sonra, ekilmiş izlerin üzerine önceden alev almış bir örtü nesnesi yerleştirilir, böylece yarısı örtülür ve diğeri açılır.

Tohumlanmış plakaları 30 ° C'de 48-72 saat inkübe edin ve ardından kapak slipi aracılığıyla mikroskop altında inceleyin.

Mantar suşlarının bakımı

Suşların bakımı için tohumlanan ve yetiştirilen plaklar buzdolabında (4 ila 8 ºC) saklanır. Bu şekilde birkaç hafta sürebilir ve öğretim veya araştırma amacıyla kullanılabilirler.

QA

Sterilite kontrolü için, bir plaka, oda sıcaklığında inokülasyon yapılmadan inkübe edilir, büyüme veya renk değişikliği olmaması beklenir.

Kalite kontrolü için, Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 gibi bilinen suşlar ekilebilir.

Beklenen sonuçlar, S. aureus ve E. coli için kısmi inhibisyondur. Suşların geri kalanında tatmin edici bir büyüme beklenirken.

Aspergillus niger, yaklaşık 5 günlük bir inkübasyon süresinde siyah ve sporlanmış kolonilerle büyür.

Klamidospor üretimi ile Candida albicans maya kolonileri.

Saccharomyces cerevisiae, büyük maya hücreleri üretir.

Sınırlamalar

Kolonilerle karıştırılmaması gereken, plakanın altında sarı bir çökelti oluşur.

Referanslar

1. Neogen Laboratuvarları. Mısır Unu Agarı. Şu adreste bulunabilir: foodafety.neogen.com.
2. Culture Media Microkit. Mısır Unu Agarı. Medioscultivo.com adresinde mevcuttur.
3. Linares M, Solís F. Maya Tanımlama Kılavuzu. Şu adresten ulaşılabilir: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Halk Sağlığı, 2002; 19 (4): 206-208. Mevcut: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Genel Mikoloji. 1994. 2. Baskı, Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Karakas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
8. Castillo E. Candida cinsinin izolasyonu ve tanınması için bazı makro ve mikroskobik yöntemlerin karşılaştırmalı çalışması. Farmasötik Kimya Bilimleri Kolombiya Rev. 1970; 3 (1): 33-57. Mevcut: Ciencias.unal.edu.co