Hektoen agar katı agar ortamında veya Hektoen enterik seçici ve diferansiyel bir kültürdür. Hektoen Enstitüsü'nde King ve Metzger tarafından Shigella ve Salmonella cinslerinin enteropatojenik bakterilerinin izolasyonu için oluşturulmuştur.
Ortam, proteoz pepton, maya özütü, safra tuzları, laktoz, sükroz, salisin, sodyum tiyosülfat, sodyum klorür, demir sitrat, amonyum sitrat, bromotimol mavisi, asit fuksin ve agardan oluşur. Bu formülasyon, Shigella ve Salmonella cinslerini bu besiyerinde üreyebilen diğer bakterilerden ayırt etmeyi mümkün kılar.
A. Virgin Hektoen agar B. Tohumlanmış Hektoen agar. Kaynak: Flickr.com/ Orijinal yükleyici, Fransız Wikipedia'daki Philippinjl idi.
Hektoen agar ile aynı işleve sahip başka besiyerleri olmasına rağmen, özellikle Shigella türlerini kurtarmak istediğinizde diğer besiyerlerine kıyasla daha büyük bir avantaja sahiptir.
Her iki cinsiyetten türler, kontamine gıda tüketiminden dolayı insanlarda ciddi gastrointestinal problemlere neden olur; bu nedenle bulaşma fekaldir - oral. Bu nedenle Hektoen agar kullanımı esas olarak dışkı ve gıda örneklerinin mikrobiyolojik analizinde endikedir.
temel
Hektoen Agar, besin kaynağı olarak peptonlar ve maya ekstraktı içerir ve mikrobiyal gelişim için gerekli unsurları sağlar.
Bununla birlikte, bazı bakterilerin, özellikle Gram pozitif ve bazı Gram negatiflerin büyümesini engelleyerek hareket eden safra tuzlarına da sahiptir. Bu nedenle seçici bir ortam olarak kabul edilir.
Öte yandan, Hektoen agar diferansiyel bir besiyeridir. Bu özellik, laktoz, sukroz ve salisin gibi fermente olabilen karbonhidratların, bromotimol mavisi ve asit fuksin ile temsil edilen pH gösterge sistemi ile birlikte varlığıyla verilir.
Salmonella ve Shigella cinsine ait olmayan bu besiyerinde üreyebilen tüm bakteriler, Proteus cinsi dışında somon veya portakal kolonileri geliştirecektir. Bunun nedeni, ortamın asitlenmesine neden olan ve pH göstergesini döndüren mevcut karbonhidratlardan bir veya daha fazlasının fermantasyonudur.
Kendi payına, Shigella ve Salmonella cinsi, besiyerini alkalileştiren bir enerji kaynağı olarak sadece peptonları kullanarak mevcut karbonhidratların hiçbirini fermente edemez ve bu nedenle kolonileri mavi-yeşildir.
Hidrojen sülfit (renksiz gaz) oluşturabilen bakteriler de bu ortamda ayırt edilebilir. Sodyum tiyosülfat, kükürt kaynağı olarak hareket ederken, demir sitrat geliştiricidir. Her iki bileşik de reaksiyonu gösteren siyah bir demir sülfit çökeltisinin oluşumunu mümkün kılar.
Koloninin ortasındaki siyah renkli çökelti, çevresinde şeffaf bir hale ile balık gözü görünümü verir. Bu özellik Salmonella cinsinin varlığını gösterir.
Son olarak, sodyum klorür ozmotik dengeyi korur ve agar ortama katı kıvamı sağlar.
Hazırlık
76 g susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışımı kuvvetlice çalkalayın ve 10 ila 15 dakika dinlendirin. Tamamen çözünene kadar döner hareketler vererek ısıtılabilir ve kaynatılabilir. Bu besiyeri otoklavlanmamıştır.
Ortam yaklaşık 45 ° C'lik bir sıcaklığa ulaştığında, 20 ml'lik bir hacim doğrudan steril Petri kaplarına dökülür.
Agarın katılaşmasına izin verilir. O zaman kullanıma hazırdırlar. Hemen kullanılması tavsiye edilir. Bu mümkün değilse kullanıma kadar buzdolabında bekletilir.
Oda sıcaklığına getirilmesi için ekimden önce plakalar buzdolabından çıkarılmalıdır.
Ortamın pH'ı 7,5 ± 0,2 olmalıdır. Susuz ortamın rengi mordur ve hazırlanan besiyeri kahverengimsi yeşildir.
kullanım
Hektoen agar'ın dışkı ve gıda örneklerinde Shigella ve Salmonella cinsi bakterilerin araştırılması için kullanılması önerilir.
Numune önceden selenit et suyu, sistin selenit et suyu, tetratiyonat et suyu vb. Gibi özel et suyu ile zenginleştirilmişse, bu bakterileri izole etme olasılığı önemli ölçüde artar.
Aşı sağlam olmalı ve ekim sürme yöntemi ile yapılmalıdır. Plakalar aerobiosis içinde 37 ° C'de 24 ila 48 saat süreyle inkübe edilir.
48 saat inkübasyon önerilir çünkü kolonilerin özellikleri şu anda yorumlanmaları ve farklılaşmaları açısından daha nettir.
QA
Bu besiyerinde kalite kontrolü gerçekleştirmek için, aşağıdaki gibi sertifikalı bakteri suşları kullanılır: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ve Shigella sonnei ATCC 25931.
Beklenen sonuçlar aşağıdaki gibidir: Salmonella typhimurium ve Salmonella enteritidis, siyah merkezi olan veya olmayan mavi-yeşil koloniler geliştirmelidir. Shigella türleri ise mavi-yeşil koloniler halinde büyüyecek.
Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ve Staphylococcus aureus ATCC 25923 suşları da dahil edilebilir.
Bu durumlarda, gözlemlenen özellikler şunlardır: E. coli ve K. pneumoniae, bu besiyerinde çevrelerinde aynı renkte bir çökelti bulunan somon-turuncu koloniler geliştirecektir. Oysa Proteus, siyah merkezi olan veya olmayan mavi-yeşil koloniler geliştirecektir.
S. aureus ve E. faecalis'in inhibe edilmesi gerekirken, E. faecalis bazen çok küçük, sarı koloniler halinde büyümeyi başarır.
Öte yandan, bu besiyeri otoklavlanmadığından, besiyerinin sterilitesini değerlendirmek önemlidir. Bu nedenle, hazırlanan her partiden bir ila iki aşılanmamış plak, aerobiyozda 37 ° C'de 24 saat inkübe edilmelidir.
Tabakada herhangi bir büyüme beklenmiyor.
Sınırlamalar
-Proteus türleri bu besiyerinde gelişebilir ve kolonilerinin özellikleri Salmonella veya Shigella türleri ile karıştırılabilir. Bu nedenle, herhangi bir şüpheli koloni biyokimyasal testlerle doğrulanmalıdır.
-Bu besiyerinin diğer daha az seçici agarlarla birlikte kullanılması gereklidir, çünkü aranan mikroorganizma düşük konsantrasyonlarda bulunursa, bu besiyerinde gelişmeyebilir.
-Aşırı ısı ortamın bileşimini değiştireceğinden, hazırlama sırasında aşırı ısıtmayın.
- Olağan dışı olarak, laktoz fermente eden Salmonella kolonileri fark edilmeyebilir görünebilir.
Referanslar
- Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Hektoen enterik agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 13 Mart 2019 23:38 UTC. Erişim tarihi: .wikipedia.org / Erişim tarihi: 16 Mart 2019.
- BD Laboratuvarları. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Britannia Laboratuvarları. Hektoen Enteric Agar. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. Hektoen agar. Mevcut: f-soria.es
- Difco & BBL Kılavuzu, Hektoen Enteric Agar. 2. Baskı. Mevcut: bd.com/europe