LIA (LIZIN DEMIR) AGAR: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2024

Agar LIA (Lizin Demir) Enterobacteriaceae ailesinin bakterileri tanımlamak için kullanılan bir biyokimyasal testtir. Bu ortam, Falkow formülüne dayalı olarak Edwards ve Fife tarafından oluşturuldu.

Başlangıçta bu test peptonlar, maya özütü, glikoz, L-lizin, bromokresol moru ve damıtılmış su içeren bir et suyuydu. Edwards ve Fife, agar-agar, ferrik amonyum sitrat ve sodyum tiyosülfat ekledi.

Lizin dekarboksilasyonu için pozitif ve negatif test. Kaynak: Yazar MSc'nin fotoğraf ve diyagram özelliği. Marielsa Gil

Test, temel olarak, amino asit L-lizinin karboksil grubu ile reaksiyona girebilen enzim lizin dekarboksilaz varlığının gösterilmesinden oluşur. Lizin deaminaz enziminin varlığından dolayı amino asidin deaminasyonu meydana gelebilir.

Ek olarak, ortamın bileşimi, bazı bakteri türlerinin hidrojen sülfit üretme yeteneğini gösterir. Son olarak, ortamda gazın oluşup oluşmadığını gözlemlemek de mümkündür.

temel

Peptonlar ve maya özü

Çoğu kültür besiyeri gibi, Lysine Iron Agar da bakteri gelişimi için gerekli besin kaynağını sağlayan bileşenler içerir. Bu bileşenler, peptonlar ve maya özütü ile temsil edilir.

glikoz

Aynı şekilde, bu agar da fermente olabilen bir karbonhidrat olarak glikoz içerir. Enterobacteriaceae ailesindeki tüm bakterilerin glikozu fermente ettiği bilinmektedir.

Bu adım çok önemlidir, çünkü enzim lizin dekarboksilaz enziminin substratı üzerinde etki etmesi için gerekli bir koşul olan ortamın asitleştirilmesinden sorumlu olacaktır.

Bazı bakteri türlerinde glikoz fermantasyonuna bağlı olarak gaz üretimi gözlemlenebilir.

Gaz, tüpte agarın yer değiştirmesi, tüpün dibinde boş bir alan bırakması veya ortamın iki veya daha fazla porsiyona ayrılmasıyla kanıtlanır.

L-lisin

Lizin dekarboksilatlandıktan sonra bir diamin (kadaverin) ve karbon dioksit oluşur.

Dekarboksilasyon, koenzim piridoksal fosfat varlığında meydana gelir. Bu reaksiyon geri döndürülemez.

PH göstergesi (bromokresol mor)

Ortamda çeşitli reaksiyonlarla meydana gelen tüm pH değişiklikleri, mor bromokresol pH indikatörü ile tespit edilir.

Bu anlamda asitleşme olduğunda besiyeri sarıya döner ve alkalizasyon olduğunda besiyeri orijinal mor veya mor renge döner.

Lizin deaminaz enziminin varlığından dolayı lizin deaminasyonu meydana geldiğinde, yüzeyde Proteus, Providencia ve bazı Morganella türlerinde tipik olan kırmızımsı bir renk oluşur.

Bunun nedeni, deaminasyon işlemi sırasında, amonyum sitrat ile oksijen varlığında reaksiyona giren ve yukarıda belirtilen renge neden olan alfa-keto-karbonik asit oluşmasıdır.

Ferrik amonyum sitrat ve sodyum tiyosülfat

Öte yandan, hidrojen sülfit üreten bakteriler, H ₂ S'nin geliştiricisi olan sodyum tiyosülfat (kükürt kaynağı) ve ferrik amonyum sitratın varlığıyla kanıtlanacaktır .

Tiyosülfat redüktaz enzimine sahip bakteriler, mevcut sodyum tiyosülfatı indirgeyerek, sülfit ve hidrojen sülfit (H ₂ S) oluşturarak hareket etme kabiliyetine sahiptir .

İkincisi renksiz bir gazdır, ancak demir tuzu ile reaksiyona girdiğinde, çözünmeyen bir bileşik olan (görünür siyah çökelti) demirli metalik sülfit oluşturur.

Bununla birlikte, bu ortamla H ₂ S oluşturma yeteneği çok güvenilir değildir, çünkü H ₂ S üretebilen bazı lizin dekarboksilaz negatif bakteriler , ortamın asitliği müdahale ettiğinden siyah çökeltiyi oluşturmayacaktır. Bu nedenle, demir içeren diğer ortamlarla kontrol etmeniz önerilir.

Testin yorumlanması

Lizin dekarboksilasyonu

Tüpler 24 saatlik inkübasyondan sonra okunmalıdır, aksi takdirde reaksiyonun yanlış yorumlanması ve yanlış negatiflerin bildirilmesi riski vardır.

Unutulmamalıdır ki oluşacak ilk reaksiyon glikoz fermantasyonu olacaktır, bu nedenle 10 ila 12 saat sonra tüm tüpler sararır.

İnkübasyon süresinin (24 saat) sonunda mor veya mor bir yüzeye sahip sarı bir arka plan gözlenirse, reaksiyon negatiftir. Yüzeyin mor rengi, peptonların kullanılmasıyla besiyerinin alkalileşmesine karşılık gelir.

Olumlu bir reaksiyon, tüpün tabanının ve yüzeyinin tamamen mor olduğu, yani orijinal rengine döndüğü yerdir.

Bu nedenle, testin pozitifliğini belirleyen, ortamın temeli veya arka planıdır. Renk konusunda şüpheniz varsa, aşılanmamış bir LIA tüpü ile karşılaştırılabilir.

Lizinin deaminasyonu

Lizin deaminasyonunu gösteren bir tüp kırmızımsı kestane rengi bir yüzeye ve sarı (asit) bir arka plana veya tüm tüpün kırmızımsı kestane rengine sahip olacaktır.

Bu reaksiyon, lizin dekarboksilasyonu için negatif, ancak lizin deaminasyonu için pozitif olarak yorumlanır.

Bu tepki bezel üzerinde tanımlanır ve yorumlanır.

Hidrojen sülfit üretimi (H

Ortamın tamamında veya bir kısmında siyah bir çökeltinin görülmesi ile pozitif bir reaksiyon gözlemlenir. Genellikle eğimin kenarı ile taban arasındadır.

Çökelti tüp boyunca meydana gelirse, ortada meydana gelen diğer reaksiyonları göstermeyecektir.

Sonuçların kaydı

Testi yorumlarken sonuçlar şu şekilde kaydedilir:

Önce eğim okunur, sonra alt veya blok, sonra H ₂ S üretimi ve son olarak gaz üretimi.

Örnek: K / A + (-). Bu şu anlama gelir:

• K: Alkalin çerçeve (mor renk)
• A: Asidik arka plan (sarı), yani negatif dekarboksilasyon reaksiyonu ve negatif deaminasyon.
• +: Hidrojen sülfit üretimi
• (-): Gazsız.

Hazırlık

35 g kurutulmuş demir agar lizin ortamını tartın ve bir litre damıtılmış suda çözün.

Agar tamamen eriyene kadar ısıtın, bunu yapmak için sık sık karıştırarak bir dakika kaynatın. 4 ml besiyerini pamuk kapaklı 13/100 test tüpüne dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve derin bir taban ve kısa bir eğim olacak şekilde belirli bir açıyla bekletin.

2-8 ° C buzdolabında saklayın. Bakteri suşunu ekmeden önce ısınmasını bekleyin.

Susuz ortamın rengi bejdir ve hazırlanan besiyeri kırmızımsı mordur.

Hazırlanan ortamın son pH'ı 6,7 ± 0,2'dir.

Ortam pH 5.2 veya altında sarıya döner ve pH 6.5 ve üzerinde mordur.

Uygulamalar

Bu test, diğer biyokimyasal testlerle birlikte Enterobacteriaceae ailesinin basillerinin tanımlanması için kullanılır.

Ortam, düz bir öze veya iğne ile tohumlanır, tüpün dibine bir veya iki delik açılır ve ardından ortamın yüzeyi bir zikzak çizilir.

Aerobiosis içinde 35-37 ° C'de 24 saat inkübe edin. Gerekirse 24 saat daha inkübasyona bırakılır.

Laktoz negatif Citrobacter türlerini Salmonellas sp.

Kaynak: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.

Referanslar

1. Mac Faddin J. (2003). Klinik önemi olan bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editör Panamericana. Buenos Aires. Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
4. Britannia Laboratuvarları. Lizin demir agar. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
5. BD Laboratuvarları. BBL Lysine Iron Agar Slantları. 2007. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
6. Valtek Laboratuvarları. Medium LIA 2009. andinamedica.com'da bulunabilir