AGAR BAYAN: KURULUŞ, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Agar MRS , özellikle genus Lactobacillus'un, izolasyon ve laktik asit bakteri sayımı için kullanılan bir seçici katı ortam kültürdür. Bu agar, 1960 yılında aynı adı taşıyan Man, Rogosa ve Sharpe tarafından yaratılmıştır, ancak karmaşıklığı nedeniyle MRS kısaltması sıklıkla kullanılmaktadır.

Proteoz pepton, et ekstresi, maya ekstresi, glikoz, sorbitan monoleat, dipotasyum fosfat, sodyum asetat, amonyum sitrat, magnezyum sülfat, manganez sülfat ve agardan oluşur.

Lactobacillus sp. İle tohumlanmış Man Rogosa ve Sharpe Agar (MRS). Kaynak: Yazarlar tarafından bu makale için bağışlanan fotoğraf: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. başlıklı araştırma sırasında çekilen fotoğraf: Anne sütü ve bebek dışkılarında probiyotik potansiyeli olan laktik asit bakterileri ve Bifidobakterilerin değerlendirilmesi .

Bu bileşim, dışkı, vajinal akıntı, oral numuneler ve anne sütü gibi klinik numunelerden ve ayrıca süt ürünleri ve etli yiyeceklerden laktik asit bakterilerinin uygun şekilde gelişmesine izin verir.

Laktik asit bakterileri nadiren hastalık süreçlerine karıştığı için klinik laboratuvarlarda rutin olarak kullanılmaz. Bununla birlikte, gıda mikrobiyolojisi alanında, MRS agar kullanımı daha sıktır.

Öte yandan, bu besiyeri, amacı laktik asit bakterilerinin incelenmesi olan bazı Araştırma Merkezleri tarafından kullanılmaktadır.

temel

Man, Rogosa ve Sharpe agar oldukça karmaşık bir bileşime sahiptir. Bileşenlerinin her birinin işlevini parçalayarak temeli açıklanabilir.

Proteoz pepton, et özütü, maya özütü ve glikoz, bakteri büyümesi için gerekli olan karbon, nitrojen, vitamin ve minerallerin kaynağını sağlayan besinlerdir. Dahası, glikoz çoğu kültür ortamında kullanılan evrensel enerji kaynağıdır.

Öte yandan, laktik asit bakterilerinin büyümesini desteklemek için, Lactobacillus ve ilgili bakterilerin metabolizmasında gerekli olan kofaktörlerin (katyonların) varlığı gereklidir; Bu bileşikler sodyum, magnezyum ve manganez tuzlarıdır.

Benzer şekilde, sorbitan monoleat veya polisorbat 80, besin olarak emildikleri için önemli bir yağ asidi kaynağıdır.

Ayrıca sorbitan monoleat ve amonyum sitrat, eşlik eden floranın, özellikle Gram negatif bakterilerin gelişimini inhibe ederek bu agarın seçici karakterini sağlayarak etki eder.

Son olarak, besiyerine katı kıvamı sağlayan agar-agar'dır.

Man Rogosa Sharpe agar'ın başka varyantları da vardır; bunlardan biri, diğer mikroorganizmaların yanı sıra bifidobakterilerin izolasyonu için çok yararlı olan sistein (MRSc) ile desteklenmiştir. Öte yandan, süt ürünlerinde bifidobakterilerin seçici sayımı için özel olan, neomisin, paromomisin, nalidiksik asit ve lityum klorür ile takviye edilmiş MRS ortamı vardır.

Hazırlık

68,25 gram susuz besiyerini tartın ve bir litre damıtılmış suda çözün. 5 dakika bekletin. Tamamen çözünmesi için sık sık karıştırarak bir ısı kaynağına çevirin ve 1-2 dakika kaynatın. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Otoklavı terk ederken, birkaç dakika beklemeye bırakın ve hala sıcakken steril Petri kaplarına dağıtın.

Plakaları katılaştırın ve ters çevirin, plaka raflarında sipariş edin ve kullanıma kadar buzdolabında saklayın. Kullanmadan önce plakaların oda sıcaklığına ısınmasına izin verin.

Ortamın pH'ı 6.4 ± 0.2 olmalıdır. Bazı ticari evler 5,5 ila 5,9 arasında pH önerir.

Susuz ortam bej renklidir ve koyu kehribar renginde hazırlanır.

Hem kurutulmuş ortam hem de hazırlanan plaklar 2-8 ° C'de saklanmalıdır.

Uygulamalar

MRS agar plakaları yüzeye tohumlanabilir (tükenme veya Drigalski spatula). Ayrıca derinliğe göre ekilebilir. Plakalar microaerophilicity, 37 ° C (% 4 O inkübe edilmelidir ₂ ve% 5-10 CO ₂ 24 ila 72 saat boyunca).

Ekim yöntemi, takip edilen amaca (izolasyon veya sayma) göre seçilir.

Kolonilerin özellikleri

Lactobacillus'un olası kolonileri beyazımsı renkte büyür ve bu agar üzerinde mukoid veya kremsi bir görünüme sahiptir. Daha sonra tanımlanmaları gerekir.

Laktik asit bakterilerinin izolasyonu

Bunun için yüzey tohumlaması kullanılır. Ekilecek numuneler, önceki bir prosedür gerektirir.

Anne sütü numuneleri söz konusu olduğunda, yağlı tabakayı çıkarmak için 1 ml numunenin 14.000 rpm'de 10 dakika santrifüj edilmesi önerilir. 900 µl atılır ve kalan 100 µl'de çökelti askıya alınır ve MRS agar yüzeyine dökülür ve ardından Drigalski spatula ile eşit olarak dağıtılmalıdır.

Dışkı örnekleri söz konusu olduğunda, bir (1) gram dışkı tartılır ve 1/10 seyreltmeye karşılık gelen 9 mL% 0.1 steril pepton su içinde homojenize edilir. Daha sonra, nihai olarak 10-4'lük bir seyreltme ^elde edilene kadar seri seyreltmeler yapılır .

Son olarak, 10, 100 ul ^-2 , 10 ^-3 ve 10 ^-4 seyreltmeler alınır ve her biri seyreltme Drigalski spatula ile eşit bir şekilde dağıtılması, ağar MRS ile tohumlanır.

Laktik asit bakteri sayısı

Bu durumda ekim derinliğe göre yapılır.

Anne sütü örnekleri için 1 mL alınır ve steril bir konik plastik tüpe yerleştirilir. MRS agar yaklaşık 40 ° C sıcaklıkta 25 mL nihai hacme ilave edilerek homojen bir karışım elde edilir. Daha sonra homojen bir şekilde steril Petri kaplarına dökülür ve polimerizasyona kadar bekletilir.

Dışkı örnekleri için daha önce tarif edildiği gibi seyreltmeler yapılır. Her dilüsyondan 1 mL alın ve steril konik plastik tüplere yerleştirin. Erimiş MRS agar 25 mL hacme eklenir.

Her bir seyreltmenin karışımı, steril Petri kaplarına eşit olarak dökülür. Son olarak polimerizasyona kadar dinlenmeye bırakılır.

Man Rogosa ve Sharpe (MRS) agar üzerinde koloni sayımı. Kaynak: Bu makale için bağışlanan fotoğraf. Yazarlar: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Araştırma sırasında çekilen fotoğraf: Anne sütü ve bebek dışkısında probiyotik potansiyeli olan laktik asit bakterileri ve Bifidobakterilerin değerlendirilmesi.

Araştırma seviyesi

Laktik asit bakterileri üzerine yapılan araştırmalar her geçen gün daha fazla ilgi görüyor; Araştırmacılar, diğer kullanımların yanı sıra, özellikle süt ürünleri imalatında standardizasyon için yeni türler ve bunların başlangıç ​​mayaları olarak potansiyelleri hakkında bilgi edinmeye çalışıyorlar.

Bu anlamda Alvarado ve ark. (2007), zanaatkar Venezuela And füme peynirinde bulunan laktik asit bakterilerini izole ettikleri, tanımladıkları ve karakterize ettikleri bir çalışma yapmak için MRS agar kullandılar.

Peynirde, Lactococcus ve Lactobacillus cinslerinin bakterilerinin varlığını buldular ve izole edilmiş türlerin karışımlarının pastörize sütten peynir üretiminde başlangıç ​​suşları olarak uygun olduğu sonucuna vardılar.

Öte yandan Sánchez ve ark. (2017), domuz yavrularının sindirim sistemindeki laktik asit bakterilerinin varlığını araştırmak için MRS agar kullandı ve onları sağlıklı domuz yavrularının üretkenliğini artıran doğal probiyotikler olarak kullandı.

Bu besiyeri ile dört türü izole etmeyi başardılar: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ve Pediococcus pentosaceus.

Benzer şekilde, Báez ve ark. (2019), anne sütü ve bebek dışkısında probiyotik potansiyeli olan laktik asit bakterilerini (LAB) ve bifidobakterileri değerlendirmek için MRS agar kullandı.

Anne sütüne 11 BAL ve 3 Bifidobacteria sp ve 8 BAL ve 2 Bifidobacteria sp. dışkıda. Hepsi, probiyotik aktiviteye sahip bakteri olduklarını kanıtlayan belirli parametrelerle karşılaştı.

Yazarlar, hem anne sütünün hem de yalnızca anne sütüyle beslenen bebeklerden gelen dışkıların doğal probiyotik bakteri kaynakları olarak hizmet ettiği sonucuna varmışlardır.

QA

MRS agar kalitesini değerlendirmek için aşağıdaki gibi kontrol suşları:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coi ve Bacillus cereus.

Beklenen sonuçlar, ilk 6 bakteri için tatmin edici büyümedir, ancak E. coli ve Bacillus cereus tamamen inhibe edilmelidir.

Referanslar

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Venezuela Füme And Artisan Peynirinden Laktik Asit Bakterilerinin İzolasyonu, Tanımlanması ve Karakterizasyonu. Başlangıç ​​Kültürü Olarak Kullanımı. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Domuz Yavruğunun Sindirim Sisteminden Laktik Asit Bakterilerinin Alfaro İzolasyonu. Rev. Investiga. Veteriner. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Şu adresten ulaşılabilir: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M., Miranda 2017, Acevedo belediyesinde anne sütünde ve bebeklerin dışkısında probiyotik potansiyele sahip laktik asit bakterileri ve Bifidobakterilerin değerlendirilmesi. Lisans derecesi bioanalysis. Carabobo Üniversitesi, Venezuela.
4. Britannia Laboratuvarı. MRS agar. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
5. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. MRS agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 10 Ocak 2018 19:44 UTC. Şu adresten ulaşılabilir: wikipedia.org Erişim tarihi 17 Şubat 2019.
6. Roy D. Süt ürünlerinde bifidobakterilerin izolasyonu ve sayımı için medya. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.