NUTRITIVE AGAR: MANTIK, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Besin ortamı seçici olmayan ortam ve hiçbir diferansiyel katı kültürdür. Beslenme açısından talep etmeyen her türlü bakteri bu besiyerinde büyür.

Basit bir besiyeridir ve ismine rağmen Brain Heart Infusion Agar veya Trypticase Soy Agar gibi diğer benzer besiyerlerine kıyasla daha düşük besin değeri içerir.

Besin agarında koloni sayımı

Laboratuvardaki faydası çok çeşitlidir. Diğerlerinin yanı sıra kanlı agar hazırlamak için temel olarak türlerin alt kültürlenmesi, suşların korunması, kolonilerin sayılması için kullanılır.

Aynı şekilde, açık bej rengi nedeniyle, bazı bakteri suşlarının ürettiği pigmentlerin üretimi, Pseudomonas aeruginosa'nın yeşilimsi pigmenti, Serratia marcescens tarafından oda sıcaklığında üretilen tuğla kırmızısı pigment, Staphylococcus'un altın sarısı pigmenti gibi istisnai bir şekilde ayırt edilebilir. aureus, diğerleri arasında.

Ayrıca, piyasada bulunan en ucuz büyüyen ortamlardan biridir.

temel

Yukarıda daha önce belirtildiği gibi, kısıtlama olmaksızın ve yorumlanması gereken karmaşık reaksiyonlar olmaksızın bakteri büyümesi için besin sağlamaya dayanan çok basit bir ortamdır.

Besiyeri yarı saydam olduğundan, kolonileri derinlemesine tohumlama yöntemi ile saymak için idealdir.

Kompozisyon

Esas olarak et özütü veya maya özütü, peptonlar veya jelatin pankreas özütü, agar-agar, sodyum klorür ve damıtılmış sudan oluşur.

Et veya maya özütü ve peptonlar, bakteriler tarafından enerji ve büyüme faktörleri kaynağı olarak kullanılacak temel karbon ve mineral kaynaklarını (nitrojen, fosfor ve kükürt) temsil eder.

Aynı şekilde agar-agar, Robert Koch tarafından besiyerine katı kıvam vermek için kullanılan ilk baz bileşik olan jelatinin yerini alan tüm katı kültür ortamlarının temelidir.

Agar, galaktoz, galaktomannan, agaroz ve agaropektinden oluşan bir polisakkarittir. 40 ° C'de sertleşir ve 100 ° C'ye yakın erir.

Sodyum klorür, ortama bakteri gelişimi için gerekli ozmolariteyi sağlar.

Son olarak su, liyofilize bileşikleri hidratlamaya ve çözündürmeye hizmet eder. Nötr pH'a ayarlanmış damıtılmış su kullanılmalıdır. Besiyerinde fosfatlarla reaksiyona girip çözünmeyen tuzlar oluşturabilen kalsiyum ve magnezyum içerdiği için musluk suyu kullanılmamalıdır.

Hazırlık

Bir litre besleyici agar için, 31 g susuz besiyeri tartılmalıdır. Bir şişeye koyun ve bir litre damıtılmış suda eritin. 5 dakika bekledikten sonra, bir ısı kaynağı üzerinde ısıtın ve 1 veya 2 dakika kaynayana kadar sürekli karıştırın.

Kültür ortamının hazırlanması.

Şişe daha sonra bir otoklava yerleştirilir ve 121 ° C'de 20 dakika sterilize edilir.

Otoklavda sterilizasyon

Sürenin sonunda, otoklavdan çıkarılır ve laminer akış başlığı veya Bunsen brülörü kullanılarak steril Petri kaplarında servis edilir.

Petri kapları tek kullanımlıksa (plastik), aşırı ısı nedeniyle deforme olmalarını önlemek için besiyeri agar yaklaşık 50 ° C sıcaklığa sahip olduğunda dağıtılmalıdır.

Sertleşmesine ve ters çevrilmiş bir plaka tutucuda saklanmasına izin verin ve kullanıma kadar 2-8 ° C'de buzdolabında saklayın.

Plakalar tohumlanmadan önce temperlenmelidir. Besleyici agar plakları kontamine veya dehidre edilmişse kullanılmamalıdır.

Hazırlanan besiyerinin pH'ı 7,3 ​​± 0,2'ye ayarlanmalıdır.

Uygulamalar

Mikrobiyoloji laboratuvarında kullanılan en basit kültür besiyeridir. Formülasyonu, talep etmeyen bakterilerin büyümesi için mükemmeldir.

Başlıca kullanımları aşağıda açıklanmıştır:

Kanlı agar hazırlanmasının temeli olarak

Bu besiyeri bazen kanlı agar hazırlamak için bir baz olarak kullanılır, ancak en yaygın kullanılan baz değildir.

Spor oluşturan bakterilerin sporlanmasını teşvik edin

Bu kültür ortamı özellikle Bacillus sp. Gibi spor oluşturan bakterilerin sporlanmasını uyarmak için faydalıdır.

Bunun için Bacillus cinsinin bir suşu ekilir ve aerobiosis içinde 37 ° C'de 24 saat inkübe edilir. Koloniler büyüdükten sonra, plaka sıcaklık stresine maruz bırakılır, yani fırın sıcaklığı 44 ° C'ye çıkarılır ve 24 saat daha bırakılır veya 24 saat buzdolabına konulur.

Süre sonunda kültür lekeleri yapılır ve Gram boyası veya Shaeffer-Fulton spor boyası ile boyanır. İçlerinde endosporlar (basil içindeki sporlar) ve eksosporlar (basilin dışındaki sporlar) içeren basiller görülecektir.

Gerilme bakımı

Bazı araştırma laboratuvarları veya üniversite öğretim destek laboratuvarları, araştırma çalışmaları veya öğretim uygulamalarının hazırlanması için bakteri bankasını (bakteriyoteka) kullanmak için klinik önemi olan canlı bakterilerin mümkün olduğu kadar uzun süre muhafaza edilmesini gerektirir. Öğrenciler bu mikroorganizmaları yönetmeyi ve tanımlamayı öğrenecekler.

Nutrient agar ve beyin kalp infüzyon agarı bu amaçla kullanılabilir. Agar hazırlanır, bakalit kapaklı tüplere dökülür ve bir taban üzerine eğilir, böylece agar katılaşır, altta bir blok ve yüzeyde bir eğim oluşturur (oluk gagası).

Her tüp, tohumlanacak bakterinin adı ve tarihi ile etiketlenir. Bakterilerin her biri eğime ekilecek ve 24 saat inkübe edilecektir Koloniler büyüdükten sonra tüpler oda sıcaklığında saklanacaktır.

Bakteriyoteka, besiyerinin kontaminasyonunu ve dehidrasyonunu ve ayrıca bakterilerin ölümünü önlemek için 1 ila 3 ay arasında yenilenmelidir.

Bu şekilde sadece seçici olmayan bakteriler korunabilir.

Koloni sayısı

Kolonileri saymak için standart sayım agar gibi özel yöntemler olsa da, bu amaç için nütrient agar, bir drigalski spatula ile yüzey tohumlaması veya derinlik ile kullanılabilir. Bu nedenle gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde çok faydalıdır.

Teşhis testleri çalıştırma

Kan veya başka herhangi bir katkı maddesi içermeyen bir ortam olduğundan, katalaz testini gerçekleştirmek için bu besiyerinde büyümüş kolonileri almak için idealdir.

Benzer şekilde, açık renginden dolayı oksidaz testlerinin, müdahale olmaksızın doğrudan tohumlanan agar alanı üzerinde gerçekleştirildiği belirtilmektedir.

Dinlenme amaçlı tuzlu sulardan mezofilik aerobların geri kazanımı (Plajlar)

% 10 deniz suyu ile hazırlanan besleyici agar, sahil sularında mezofilik aerobların değerlendirilmesi için faydalıdır.

Bu şekilde, suların bu mikroorganizmalarla sahip olduğu gerçek kirlilik seviyesi takdir edilebilir, çünkü bu tür numunelerde, geleneksel şekilde hazırlanan kültür ortamı kullanıldığında sonuçlar örtüşür.

Bu, Cortez ve arkadaşları tarafından gösterilmiştir. 2013 yılında bir araştırma çalışmasında.

Bu, bakterilerin aşırı tuzlu bir ortamdan düşük tuzlu bir ortama geçerken uğradıkları ani değişim nedeniyle açıklanabilir, bu nedenle mikroorganizmalar, yaşayabildikleri ancak yetiştirilemedikleri bir uyuşukluk durumuna girerler.

Referanslar

1. "Besleyici agar." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 13 Eylül 2016, 20:33 UTC. 29 Ara 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Venezuela, Falcón eyaleti Chichiriviche'deki kaplıcaların deniz sularında deniz suyu ile hazırlanan kültür ortamlarının sağlık göstergelerine etkisi. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M ve Cardoso M. Domuzlarda tohumlama dozları için suyun mikrobiyolojik kalitesi. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. Garcia P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Hizmeti.