PATATES DEKSTROZ AGAR: GEREKÇE, HAZIRLIK VE KULLANIM - BIYOLOJI - 2025

Agar dekstroz patates orta katı olmayan bir - Seçici besin kültürü. Bakteriyel ve mantar türleri içinde büyüyebilir, ancak kullanımı özellikle filamentli mantarların ve mayaların izolasyonu için endikedir. Aynı zamanda İngilizce Patates Dekstroz Agar ifadesi için PDA besiyeri olarak bilinir.

Özellikle fitopatojenik mantarların, yani bitkileri etkileyenlerin izolasyonu için faydalıdır. Enfekte sebzelerden numuneleri ekmek için, Sabouraud agar veya malta-agar gibi başka araçlar kullanılabilir, ancak rutin kullanım için, daha fazla sporülasyon elde edilmesi nedeniyle patates dekstroz agarı tercih edilir.

Sırasıyla Aspergillus niger ve Sinemas patates dekstroz agarda. Kaynak: Alextrevelian 006, İngilizce Wikipedia / Joselrojas

Ayrıca kozmetik, farmasötik ürünler ve bazı süt ürünleri örneklerinde mantar kolonilerinin sayılmasında da kullanılır. Aynı şekilde, bu besiyerinde çok iyi büyüyen ve karakteristik pigmentlerini geliştiren dermatofitlerin araştırılması için deri kazıntı numunelerinin ekilmesi için uygundur.

Patates dekstroz besiyeri, laboratuvarda hazırlanması çok basit ve kolay bir besiyeridir. Adından da anlaşılacağı gibi patates, dekstroz ve agar-agar infüzyonu içerir. Ek olarak, bakteriyel büyümeyi önlemek ve mantar türleri için seçiciliği artırmak için inhibitör maddeler eklenebilir.

temel

Patates dekstroz agar, filamentli mantarların ve mayaların gelişimi için gerekli besin öğelerini sağlayan bir kültür besiyeridir.

Patatesin glukoz ile infüzyonunun kombinasyonu, tatmin edici bir mantar gelişimi için mükemmel enerji kaynağı sağlar. Agar, ortama tutarlılık sağlayan kişidir.

Ortam tek başına bakteri üremesini engellemez, bu nedenle seçici olmayan bir ortamdır. Seçici hale getirmek için tartarik asit veya antibiyotikler gibi inhibe edici maddelerin eklenmesine ihtiyaç duyar.

Hazırlık

-Ev yapımı (ticari olmayan) patates dekstroz agar hazırlanması

Petri kapları

Aşağıdaki gibi hazırlanır:

İlk etapta patatesler çok iyi yıkanır, sahip oldukları toprak çıkarılır. Her şeyi ve kabuğu ile ince dilimler halinde kesilirler. 200 gram patates tartılarak yarım saat bir litre damıtılmış suda kaynatılır.

Süre sonunda, tüm preparatı bir tülbentten süzün veya süzün.

Elde edilen sıvı bir litreye kadar distile su ile tamamlanır. 20 g agar-agar ve 20 g dekstroz infüzyona eklenir, iyice karıştırılır ve 121 ° C'de 15 pound basınçta 15 dakika otoklavlanır.

50 ° C'ye soğumaya bırakın ve steril Petri kaplarında servis yapın. Hazırlanan tabaklar buzdolabında saklanır.

Takozlar

Patates dekstroz agar dilimleri de hazırlanabilir.

Bu durumda otoklavda sterilize edilmeden önce 12 ila 15 ml besiyeri tüplere yerleştirilir, daha sonra otoklavlanır ve bırakılırken katılaşana kadar özel destekler üzerinde yatar. Buzdolabında saklayın.

Ortam, 5,6 ± 0,2 pH'ta kalır, ancak bazı laboratuvarlar, bakteri büyümesini engellemek için pH'ı 3,1 ± 0,1'e düşürmek için% 10 tartarik asit ekler.

Aynı anlamda, diğer laboratuvarlar, mantar yetiştiriciliği için seçici hale getirmek ve bakteriyel büyümeyi önlemek için antibiyotik eklemeyi tercih etmektedir.

-Patates dekstroz agarının ticari olarak hazırlanması

Ticari olarak temin edilebilen susuz ortamın 39 g'ını tartın ve bir litre damıtılmış suda çözün. 5 dakika dinlendirin.

Karışım, tamamen çözülene kadar sık ​​sık karıştırılarak ısıtılır. Daha sonra otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edilir.

Plakalar veya takozlar hazırlanabilir. Yukarıda açıklandığı gibi devam edin.

PH 5,6 ± 0,2'de kalır. 3,1 pH isteniyorsa, plakalara servis yapmadan önce 14 ml steril% 20 tartarik asit ilave edilmelidir.

Ham ortam bejdir ve hazırlanan ortam hafif bulanık veya opalesan bir görünüme sahip açık kehribar rengindedir.

Uygulamalar

Patates dekstroz agarına bitki örnekleri ekme işlemi

-Lekeli yapraklar için

Yapraklar parçalara ayrılır.

Yüzeyi 20 ila 30 saniye dezenfekte etmek için% 50 alkol içeren 50 cc'lik bir bardağa yaprakların parçalarını (lekeli ve sağlıklı parçalar) yerleştirin. Alkolü atın ve ince yapraklarsa 40 ila 50 saniye% 20 sodyum hipoklorit ekleyin, kabuk ve kütük ise süre 80 saniyeye çıkarın.

Sodyum hipokloriti atın ve dezenfekte edilmiş parçaları steril bir pens ile alın ve besiyerinin yüzeyine yerleştirin (maksimum 10 parça). Tarihi ayarlayın ve 20-30 ° C'de inkübe edin.

-Meyveler ve yumrular için

Meyve etli ise mantardan etkilenen meyveyi açın ve hem hastalıklı hem de sağlıklı bölgelerden steril bir neşter ile parçalar alın ve agar yüzeyine yerleştirin.

Meyve limon veya portakal gibi turunçgil ise açılmalı ve tohumları ekilmelidir.

Meyvenin yüzeyi etkilendiğinde ve sporlar görüldüğünde ideal olan tabakta rendeleme yöntemini kullanmaktır; Bu, sporlara sterilize edilmiş ve soğutulmuş "L" şeklinde bir spatula ile dokunmaktan ve ardından agar üzerinde 2 ila 3 kez bir zikzak ekim yapmaktan oluşur.

-Tahıllar için

Yapraklarda anlatıldığı gibi dezenfekte edilirler ve daha sonra agara yerleştirilirler.

Dallar ve gövdeler için

Kabuk sıyrılır ve daha sonra sağlıklı ve hastalıklı kısmın parçaları alınır ve doğrudan agara ekilir.

Tohumlanan plakalar aerobik olarak 20-30 ° C'de 72 saat inkübe edilir.

Patates dekstroz agar üzerine deri, saç veya tırnak pulu örnekleri ekme işlemi

Örnekleme, dermatofitleri aramak için etkilenen saçları, cilt pullarını veya tırnakları kesmek için No. 11 neşter bıçağı kullanılarak yapılmalıdır. Numune alınmadan önce alan% 70 alkol ile dezenfekte edilmelidir.

-Cilt örneği

Pullu lezyonlarda, mantarın orada bulunma olasılığı daha yüksek olduğundan lezyonun kenarı kazınmalıdır.

Eksüdatif lezyonlarda numune kuru veya ıslak bir çubukla alınır. Hemen patates dekstroz agar veya Sabouraud agar üzerine ekin. Ulaşım araçlarından kaçının.

Diğer bir örnekleme yöntemi ise Mariat ve Adan Campos'un halı kare tekniğidir. Bu durumda, etkilenen alan sonraki ekim için 5 kez bir parça steril yün ile ovulur.

Numune doğrudan kültür ortamına yerleştirilebilir.

-Saç örneği

Patolojiye bağlı olarak, etkilenen kısım kesilebilir veya yerinden çıkarılabilir. Örneği kültür ortamına yerleştirin.

-Tırnak örneği

Etkilenen tırnağın belirli bir kısmı kazınabilir veya kesilebilir. Yaralanmanın türüne bağlı olacaktır.

Mantarın kültür ortamı ile temas olasılığını artırmak için ekimden önce numuneyi 1 mm'lik parçalar halinde kesin.

Tanımlama prosedürü

Plakada elde edilen koloniler, daha sonra kolonilerin makroskopik çalışmasını (görünüm, renk, tutarlılık, gelişme derecesi) gerçekleştirmek için patates dekstroz agar içeren tüplerde izole edilir.

Mikroskobik inceleme (yapıların ve oluşumlarının gözlemlenmesi) mikrokültürler veya slayt ile slayt arasında mikroskop altında doğrudan gözlem yoluyla yapılabilir.

Koloni sayısı

Bu ortam ayrıca bitki, gıda, kozmetik veya ilaç numunelerinde bulunan mantar ve maya yükünü belirlemek için de kullanılabilir. Bu amaçla, antibiyotiklerle desteklenmiş patates dekstroz agar kullanılır, örneğin: (kloramfenikol, klorotetrasiklin veya her ikisi).

Steril ve boş bir Petri kabına 1 ml örnek - tercihen seyreltilmiş - dökün, ardından bir patates dekstroz agarı pedi eritin ve 45 ° C'ye kadar soğumaya bırakın. Petri kabına dökün ve homojenleşene kadar döndürün. Katılaşana kadar dinlenmesine izin verin.

Aranan mantarın türüne ve örnek türüne bağlı olarak aerobik olarak 20-25 ° C'de (küfler) veya 30-32 ° C'de (mayalar) 5 ila 7 gün veya daha uzun süre inkübe edin. Her iki sıcaklık aralığında inkübe etmek için iki plaka kullanılabilir.

Bir gıda örneğindeki mantar kolonilerinin sayılması. Antibiyotiklerle desteklenmiş patates dekstroz agar. Kaynak: Pxhere.com fotoğrafı / 777267

Mantar suşlarının bakımı

Potato Dextrose Agar, birkaç yıl boyunca canlı mantar suşlarını korumak için kullanılabilir.

Bunun için mantar patates dekstroz agar dilimleri üzerinde büyütülür ve mantar büyüdükten sonra mineral yağ ile kaplanır. Yağ 45 dakika otoklavda sterilize edilmeli ve yaklaşık 300 ila 330 Saybolt viskozitesine sahip olmalıdır. Yağ, eğimin ucunun 1 ila 2 cm üzerinde olmalıdır.

QA

Hazırlanan her partiden 1 veya 2 plaka alın ve 25 ° C'de 48 saat veya 20 ° C'de 96 saat inkübe edin. İyi bir kısırlık kontrolü, koloni gelişiminin gözlenmediği bir kontroldür.

Bilinen veya sertifikalı kontrol suşları da aşağıdaki gibi kullanılabilir:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Tüm vakalarda iyi büyüme beklenir.

Referanslar

1. Britannia Laboratuvarları. Glikoz agar patates. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
2. Neogen Laboratuvarları. Patates Dekstroz agar. Bulunduğu yer: foodafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratuvarı. Patates dekstroz agar. İnsumolab.cl adresinde mevcuttur
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
5. Casas-Rincón G. Genel Mikoloji. 1994. 2. Baskı, Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Karakas.
6. Aceituno M. Bir Ulusal Üretim Laboratuvarının Kompakt Toz Tipi Göz Farı Mikrobiyolojik Kalitesinin Referans Metot Pharmacopea Usp 2005'e Göre Değerlendirilmesi. Farmasötik Kimyager unvanına hak kazanma tezi. Guatemala San Carlos Üniversitesi.
7. Cuétara M. Yüzey örneklerinin işlenmesi. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; s. 1-12