SABOURAUD AGAR: KURULUŞ, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Agar Sabouraud Sabouraud agar dekstroz olarak da bilinen, bir katı ortam, özellikle maya, küf ve dermatofıt, izolasyon ve mantar gelişimi için zenginleştirilmiştir.

Bu nedenle, bu besiyeri, klinik veya klinik olmayan numunelerden patojenik veya fırsatçı mantarların varlığını araştırmak için bir mikrobiyoloji laboratuvarında eksik olamaz. Aynı şekilde, Streptomyces ve Nocardias gibi filamentli bakterilerin büyümesi için de idealdir. İnsan, hayvan, bitki ve endüstriyel mikolojide kullanılabildiğinden kullanımı oldukça geniştir.

A. Tohumsuz Sabouraud agar. B. Sabouraud agar bir maya ile tohumlandı. Kaynak: Yazar MSc tarafından çekilmiş fotoğraflar. Marielsa Gil

Bu besiyeri, 1896'da, esas olarak dermatofitlerin neden olduğu kafa derisi rahatsızlıklarında dünyaca ünlü bir uzman haline gelen önde gelen dermatolog Raimond Sabouraud tarafından oluşturuldu.

Yaratılışı o kadar önemliydi ki, o zamandan beri kullanıldı ve bazı modifikasyonlara rağmen bugün de kaldı.

Mantarlar için özel olmasına rağmen, bu besiyerinde bakteriler üreyebilir, bu nedenle, karışık floraya sahip örnekler için, mevcut olabilecek bakteri florasının büyümesini engellemek için bunların hazırlanmasına antibiyotiklerin dahil edilmesi gerekir.

Bazı maddelerin varlığında inhibe olduğu için antibiyotik seçimi dikkatlice ve geri kazanılacak mantar türü dikkate alınarak yapılmalıdır.

temel

Sabouraud dekstroz agar, orijinal formülasyonunda 5,6 ± 0,2'lik asidik pH'ı nedeniyle zayıf bir şekilde seçici olan bir besiyeridir, ancak esas olarak uzun süreli inkübasyonlarda bakteri yine de gelişebilir.

Besiyeri, mikroorganizmaların büyümesi için karbon ve nitrojen kaynağı sağlayan kazein peptonu ve hayvan dokusunun pankreas sindirimini içerir.

Aynı zamanda enerji kaynağı olarak işlev gören ve bakterilerin üzerinde mantarların büyümesini destekleyen yüksek konsantrasyonda glikoz içerir. Bütün bunlar, ona doğru kıvamı veren bir bileşen olan agar-agar ile karıştırılır.

Öte yandan, Sabouraud dekstroz agar antibiyotikler eklenirse seçici olabilir.

Antibiyotiklerle, özellikle yara numunelerinde, açık ülserlerde veya büyük bakteriyel kontaminasyondan şüphelenilen herhangi bir numunede faydalıdır.

Sabouraud dekstroz agarın antibiyotiklerle en sık kullanılan kombinasyonları

-Kloramfenikol içeren Saburaud agar: mayaları ve filamentli mantarları kurtarmak için idealdir.

- Gentamisin ve kloramfenikol içeren Sabouraud agar: hemen hemen tüm filamentli mantarlar ve mayalar bu besiyerinde büyür ve Enterobacteria, Pseudomonas ve Staphylococcus dahil çok sayıda bakteriyi inhibe eder.

- Sikloheksimid içeren Sabouraud agar: şüphe dimorfik mantarlar olduğu sürece özellikle deri veya solunum yollarından alınan numuneler için faydalıdır.

Sikloheksimid dikkatli kullanılmalıdır; Bir numunede kontaminant olarak bulunabilecek patojenik olmayan veya çevresel mantarların ve mayaların büyümesini engellemek için kullanılmasına rağmen, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ve diğer fırsatçı mantarlar gibi bazı mantarların büyümesini de inhibe eder.

- Kloramfenikol artı sikloheksimid içeren Sabouraud agar: esas olarak dermatofitleri ve dimorfik mantarları izole etmek için kullanılır. Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes veya C. neoformans gibi bazı fırsatçı mantar türlerini inhibe etmesi dezavantajına sahiptir.

- Kloramfenikol, streptomisin, penisilin G ve sikloheksimid içeren Sabouraud agar: Bakteriler ve saprofitik mantarlarla aşırı derecede kontamine olmuş örnekler için idealdir, ancak yukarıda bahsedilen fırsatçı mantarlara ek olarak Actinomyces ve Nocardias'ın büyümesini inhibe etme dezavantajına sahiptir.

Hazırlık

Malzemeler ayrı ayrı varsa şu şekilde hazırlanabilir:

Sabouraud dekstroz agar

Tartmak:

- 40 gr dekstroz

- 10 gr pepton

- 15 gr agar-agar

- 1000 ml distile su ölçün

Tüm bileşenler karıştırılır, pH 5.6'ya ayarlanır. Solütler kaynatılarak çözündürülür, 20 ml ortam 25 x 150 mm'lik tüplere kenarsız ve tercihen pamuklu bir kapakla dağıtılır.

Pamuk kapaklı tüpler. Kaynak: Fotoğraf, yazar MSc tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil

Mevcudiyete bağlı olarak diğer boru boyutları da kullanılabilir.

Basınç atmosferinde (121 ° C) 10 dakika otoklavlanırlar. Otoklavlama süresi aşılmamalıdır. Otoklavdan çıkarken tüpler bir flüt gagasında katılaşana kadar bir destek yardımıyla eğilir.

Diğer bir yol da malzemeleri kaynayana kadar ısıtarak eritmektir. Aynı şişede 10 dakika otoklavlayın ve ardından 20 ml Petri kaplarına dağıtın.

Halihazırda tüm malzemeleri içeren bir Sabouraud dekstroz agar besiyeriniz varsa, ticari şirket tarafından belirtilen miktarı bir litre su için tartmaya devam edin. Adımların geri kalanı yukarıda açıklananlarla aynıdır.

Sabouraud dekstroz agar (Emmons modifikasyonu)

Tartmak:

- 20 gr dekstroz

- 10 gr pepton

- 17 gr agar-agar

- 1000 ml distile su ölçün

Tüm bileşenler karıştırılır, pH 6.9'a ayarlanır. Önceki durumla aynı şekilde devam edin.

Ortamı tüm malzemelerle sunan ticari evler var. Bu durumda, ekte açıklandığı gibi tartın ve hazırlayın.

Sabouraud dekstroz agar (Emmons modifikasyonu) kloramfenikol ile

Kloramfenikol Stok Çözeltisi

- 500 mg kloramfenikol bazı tartın

- 100 ml% 95 etanol ölçün

- Karıştır

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) daha önce tarif edildiği gibi hazırlanır ve ek olarak her litre ortam için otoklavlamadan önce 10 ml kloramfenikol stok solüsyonu eklenir.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar with Cycloheximide

Sikloheksimid Stok Çözeltisi

- 5 gr sikloheksimid tartın

- 100 ml aseton ölçün

- Karıştır

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) önceden tarif edildiği gibi hazırlanır ve ek olarak her litre ortam için otoklavlamadan önce 10 ml sikloheksimid stok solüsyonu eklenir.

Sabouraud dekstroz agar (Emmons) ile kloramfenikol ve sikloheksimid

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) daha önce tarif edildiği gibi hazırlanır ve ek olarak her litre ortam için otoklavlamadan önce 10 ml kloramfenikol stok solüsyonu ve 10 ml sikloheksimid stok solüsyonu eklenir.

Eklenebilecek diğer antibiyotikler

Besiyerinin litresi başına 20.000 ila 60.000 birim penisilin.

Ortamın litresi başına 30 mg streptomisin.

Her ikisi de, besiyeri otoklavlandıktan, hafifçe soğutulduktan (50-55 ° C) sonra dahil edilmelidir.

Ortamın litresi başına 0,04 g neomisin.

Ortamın litresi başına 0,04 g gentamisin.

Özel hususlar

Güvenlik açısından, sporların dağılmasını ve solunmasını önlemek için, Sabouraud dekstroz agarını Petri kaplarından ziyade kama şeklindeki tüplere (oluk gagasında eğimli) ekilmesi tercih edilir.

Sabouraud agar tüplerinin vidalı kapakla değil pamukla kaplanması önemlidir, çünkü yarı anaerobik koşulların bazı suşlarda, örneğin Coccidioides immitis'te spor oluşumunu engellediği gösterilmiştir. Ayrıca çoğu mantar aerobiktir.

Vidalı kapak kullanılması durumunda hava geçirmez şekilde kapatmayın.

QA

Hazırlanan ortam, düzgün çalıştığını doğrulamak için kalite kontrolünden geçmelidir. Bunun için belirli kontrol suşları ekilir.

Kloramfenikol içeren Sabouraud dekstroz agar için, mükemmel gelişim göstermesi gereken Candida albicans'ın ATCC suşları kullanılabilir. Başka bir plaka, tamamen inhibe edilmesi gereken Escherichia coli suşlarıyla aşılanır.

İnoküle edilmemiş bir plaka da içinde hiçbir mikroorganizmanın büyümemesi gereken inkübe edilir.

Kloramfenikol ve sikloheksimid içeren Sabouraud dekstroz agar için Trichophyton mentagrophytes suşları kullanılabilir ve iyi gelişmeleri gerekir. Başka bir plaka, içinde çok az üreme olması veya hiç olmaması gereken bir Aspergillus flavus suşu ile aşılanır. Ek olarak, sterilizasyonunu göstermek için aşılanmamış bir plaka inkübe edilir.

Sikloheksimidli Sabouraud dekstroz agar için, iyi gelişim göstermesi gereken Candida albicans, Trichophyton rubrum veya Microsporum canis suşları kullanılır.

Benzer şekilde, çok az büyüme gösteren veya hiç büyüme göstermeyen bir Aspergillus flavus suşu da dahil edilmiştir. Son olarak, sterilliği kontrol etmek için aşılanmamış bir plağı inkübe edin.

Uygulamalar

Birincil kültür

Klasik Sabouraud dekstroz agar 4 gram dekstroz içerir ve her bir mantarın karakteristik morfolojisini gösterdiği için birincil izolasyon besiyeri olarak mükemmeldir.

Aynı zamanda pigment üretimini göstermek için mükemmeldir. Bununla birlikte, sporlanmayı gözlemlemenin en iyi yolu değildir.

Ayrıca, mevcut yüksek glikoz konsantrasyonu tarafından inhibe edilen Blastomyces dermatitidis'in yetiştirilmesi tavsiye edilmez.

Öte yandan, yetiştirme için belirli hususlar dikkate alınmalıdır.

Bazı mantarlar, küfler gibi oda sıcaklığında en iyi şekilde büyürken, bazı mayalar gibi diğerleri 37 ° C'de başarıyla büyür ve diğerleri her iki sıcaklıkta da (dimorfik mantarlar) büyüyebilir.

Bu nedenle, bazen bir plakayı oda sıcaklığında ve diğerini 37 ° C'de inkübe etmek için çift tohumlama yapıldığından, bazen aynı numune için birkaç Sabouraud agar plakası kullanmak gerekebilir.

Örneğin, Sporothrix schenckii iki tabağa ekilir; biri küf fazını elde etmek için oda sıcaklığında inkübe edilir ve diğeri maya fazını elde etmek için 37 ° C'de inkübe edilir, ancak ikincisinde ortama% 5 kan ilave etmek gerekir.

Misetoma numuneleri gibi diğer durumlarda, biri kloramfenikol ve diğeri sikloheksimid ile olmak üzere iki Sabouraud agar plakası tohumlanır. Birincisi, mantar kökenli mikotoma neden olan ajanların (Eumycetoma) ve aktinomiktomlar gibi bakteriyel kökenli misetomun ikinci nedensel ajanlarının büyümesine izin verecektir.

Sporlanma

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar, 2 gram dekstroz içerir ve sadece izolasyon için değil, aynı zamanda mantarların sporlanması ve korunması için de kullanılır.

Bu besiyerinde, Blastomyces dermatitidis suşları geri kazanılabilir.

koruma

Mantar kültürlerini korumak için buzdolabında (2-8 ° C) saklanabilirler. Muhafaza süresi 2 ila 8 hafta arasında değişebilir. Bu süreden sonra işlemi tekrarlamak için alt kültürlenmeleri gerekir.

Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ve Microsporum audounii gibi bazı mantarlar en iyi oda sıcaklığında muhafaza edilir.

Dekstroz agardan tamamen çıkarılırsa ve ortamdaki agar miktarı kuruluğu önlemek için azaltılırsa, pleomorfizmi önlemek için suşun korunması uzatılabilir.

mikrokültürler

Bazı ipliksi mantarların tanımlanması için, Sabouraud agar veya diğer özel araçlar kullanarak cinsel ve eşeysiz üreme yapılarını gözlemlemek için mikrokültürler gerçekleştirmek gerekir.

İnsan mikolojisinde

Esas olarak mantar hastalıklarının, özellikle cildi ve eklerini (saç ve tırnaklar) etkileyenlerin teşhisinde kullanılır.

Örnekler sekresyonlar, eksüdalar, deri, saç, tırnaklar, balgam, CSF veya idrar olabilir. Yaygın olarak izole edilen patojenler, deri altı ve sistemik mikozlara neden olan dermatofitler, mantardır.

Hayvan mikolojisi

Hayvanlar genellikle mantar enfeksiyonlarından etkilenir, bu nedenle Sabouraud agar, insanlarda olduğu kadar hayvan mikolojisinde de faydalıdır.

Örneğin, dermatofitler genellikle hayvanları etkileyebilir. Köpekleri, kedileri, atları, domuzları ve maymunları sıklıkla enfekte eden Microsporum canis var distortum ile durum böyledir. Aynı şekilde, Microsporum gypseum köpekleri, kedileri ve çiftlik hayvanlarını da enfekte eder.

Tavuklar, horozlar ve tavuklar gibi kuşlar, Microsporum gallinae'den etkilenir.

Zymonema farciminosum gibi diğer mantarlar da hayvanlarda, özellikle atlarda, katırlarda ve eşeklerde lenfatik damarlarda önemli iltihaplanmaya neden olan hastalık nedenidir.

Sporothrix schenkii ve Histoplasma capsulatum evcil hayvanları ve insanları etkiler.

Çevresel mikoloji

Birçok patojenik veya fırsatçı mantar, belirli bir ortamda, özellikle kliniklerin ve hastanelerin ameliyathanelerinde ve Yoğun Bakım Ünitelerinde (YBÜ) herhangi bir zamanda konsantre olabilir. Bu nedenle, bunların kontrolünün yapılması gerekir.

Diğer savunmasız alanlar, çevresel mantarların yoğunluğundan etkilenebilecek kütüphaneler ve eski binalardır.

Çevresel çalışmalarda, Sabouraud dekstroz agar mantarların izolasyonu için kullanılır.

Endüstriyel mikoloji

Sabouraud dekstroz agar, diğerlerinin yanı sıra kozmetik, yiyecek, içecek, deri, tekstil üretiminde kirletici mantarların incelenmesi için bulunamaz.

Bitki mikolojisi

Bitkiler ayrıca, bitkinin farklı kısımlarını etkileyen mantarların neden olduğu hastalıklardan muzdariptir, bu da hasadı bile sonlandırabilir ve tarımda büyük kayıplara neden olabilir.

Referanslar

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikozların mikrobiyolojik tanısı ve antifungal duyarlılık çalışmaları. İspanyol Bulaşıcı Hastalıklar ve Klinik Mikrobiyoloji Derneği'nin Önerileri. Mevcut: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratuvarı. (2009). Sabouraud dekstroz agar, sikloheksimid ile. Andinamedica.com adresinde mevcuttur.
3. Navarro O. (2013). Veteriner mikolojisi. Ulusal Tarım Üniversitesi. Nikaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Genel Mikoloji. 1994. 2. Baskı, Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Karakas.