Manitol tuz agar veya mannitol tuzu katı ortam seçici ve diferansiyel bir kültürdür. Chapman tarafından patojenik Gram-pozitif kokların, özellikle Staphylococcus aureus'un izolasyonu için yaratılmıştır.
Bununla birlikte, bazen fırsatçı bir patojen olarak mevcut olabilen Staphylococus epidermidis'i ve diğer türlerin yanı sıra bilinen bir üriner patojen olan Staphylococcus saprophyticus'u izole etmek de yararlıdır.
A. hazırlanmış tuzlu mannitol agar ortamı ile Fiola. B. Fermente edici ve fermente edici olmayan mannitol bakteri suşları ile tohumlanmış tuzlu mannitol agar plakaları. Kaynak: A ve B: Yazar MSc tarafından çekilmiş fotoğraflar. Marielsa Gil.
Bazı Enterococcus'lar bu besiyerinde ve ayrıca belirli Gram-pozitif spor oluşturan çubuklarda gelişebilir.
Bu besiyeri, klinik örneklerin analizinde çok faydalıdır, ancak aynı zamanda gıda mikrobiyolojik çalışmasında ve kozmetikler, ilaçlar gibi endüstriyel ürünlerin kalite kontrolünde de kullanılır.
Tuzlu Mannitol Agar, sığır eti, triptein, mannitol, sodyum klorür, fenol kırmızısı ve agardan elde edilen özler ve peptonlardan oluşur.
temel
Mannitol agar, yüksek tuz konsantrasyonu sayesinde seçicidir. Tuzluluk, inhibe edici bir madde görevi görür ve Gram negatif bakterilerin büyümesini önler.
Ayrıca karbonhidrat mannitol ve fenol kırmızısı pH indikatörünün varlığı nedeniyle de farklıdır. Bundan, mannitolü fermente edebilen bakteriler asitler üretir, besiyerini asitleştirir, kolonileri ve besiyerini sararır.
Öte yandan, mannitolü fermente etmeyen koloniler, et ve triptein ekstraktları ve peptonlarının sağladığı besinleri alarak besiyerinde büyür. Oradan bakteri büyümeleri için gerekli olan karbon, nitrojen, vitamin ve mineralleri çıkarır.
Bu durumda koloniler zayıf veya kuvvetli pembe olabilir ve besiyeri aynı renkte kalır veya fuşyaya dönüşür.
Agar, besiyerine kıvamı sağlayan maddedir.
Hazırlık
Bir litre tuzlu manitol agar hazırlamak için, tercih edilen ticari şirketten alınan 111 g kurutulmuş ortam tartılır ve bir şişe kullanılarak 1000 ml damıtılmış su içinde çözülür.
Çözünme sürecini iyileştirmek için ortam sık sık karıştırılarak ısı uygulanır. Bir dakika kaynatın.
Şişe, 121 ° C'de 15 dakika süreyle otoklava yerleştirilir.
Sürenin sonunda flakonu otoklavdan çıkarın, dinlendirin ve sıcaklık yaklaşık 50 ila 55 ° C olduğunda steril Petri kaplarında 15 ila 20 ml arasında servis yapın.
Katılaşmasına, plaketlerde ters bir şekilde sıralanmasına ve kullanıma kadar buzdolabında bekletilmesine izin verilir. Bir numuneyi tohumlamadan önce, plakanın oda sıcaklığına ulaşmasını bekleyin.
Plakalar, sürme yöntemi ile veya bir drigalski spatula ile yüzey tohumlama yoluyla tohumlanır. Hazırlanan besiyerinin son pH'ı 7,4 ± 0,2 olmalıdır
Susuz ortamın rengi açık bej ve hazırlanan ortamın rengi turuncu kırmızıdır.
Uygulamalar
Yüksek seçiciliği nedeniyle, bu besiyeri, bu cinsin ana patojeni olarak Staphylococus aureus'un varlığını aramak istediğiniz karma floraya sahip numunelerin ekilmesi için idealdir.
Bu anlamda, en sık kullanımlarından biri, özellikle asemptomatik S. aureus taşıyıcılarını saptamak için faringeal eksüdaların ve nazal akıntı örneklerinin mikrobiyolojik analizidir.
Bazı ülkeler bu analizi gıda satıcısı olarak çalışmak isteyen kişiler için zorunlu bir gereklilik olarak uygulamıştır.
Bu kontrol, S. aureus taşıyıcısı olan kişilerin büzülmesini önler, böylece stafilokokal enterotoksin ile kontamine olmuş yiyeceklerin tüketimi nedeniyle büyük gıda zehirlenmesini önler.
Diğerlerinin yanı sıra yara enfeksiyonlarının, kan kültürlerinin, CSF'nin, bronkoalveolar lavajın tohumlanmasına da dahil edilebilir.
Tuzlu mannitol agar, kolonileri CLED agardan idrar kültürlerinden veya Gram'ı kümeler halinde Gram-pozitif koklar gösteren kanlı agardan yeniden izole etmek için faydalıdır.
Diğer uygulamaların yanı sıra gıda, içme suyu, toprakların mikrobiyolojik analizinde de geçerlidir.
QA
Tuzlu mannitol agar içeren bir grup plak hazırladıktan sonra, bir kalite kontrol yapılması tavsiye edilir. Büyüme olup olmadığını göstermek için kontrol suşları ekilir.
Bilinen Staphylococcus aureus suşları, pozitif kontrol olarak kullanılabilir. Tatmin edici şekilde gelişen sarı koloniler büyümelidir ve besiyeri de aynı renge döner.
Benzer şekilde, bilinen bir Staphylococcus epidermidis suşunun dahil edilmesi uygundur. Tatmin edici şekilde gelişen pembe koloniler büyümelidir ve besiyeri aynı renkte kalır veya daha koyu bir pembeye döner.
Negatif bir kontrol olarak, bu besiyerinde büyümemesi gereken suşlar kullanılır. Örneğin, bilinen bir Escherichia coli veya Klebsiella pneumoniae suşu yetiştirilebilir. Beklenen sonuç, tam inhibisyon, yani büyüme olmamasıdır.
Ek olarak, aşılanmamış bir plak inkübe edilmelidir. İçinde büyüme veya renk değişikliği olmamalıdır.
Diğerlerinin yanı sıra kontaminasyon, dehidrasyon, renk bozulması gibi bozulma belirtileri varsa plağın kullanılmaması önemlidir.
Son düşünceler
Tuzlu mannitol agar besiyerini kullanırken dikkate alınması gereken bazı önemli hususlar vardır:
- Sarı kolonilerin çoğalması, bunun Staphylococcus aureus olduğunu göstermez. Bazı Enterococcus suşlarının bu besiyerinde büyüyebildiği ve mannitolü fermente edebildiği ve bazı spor oluşturan Gram pozitif çubukların olduğu unutulmamalıdır.
Bu nedenle, kolonide bir Gram ve katalaz testi yapmak önemlidir.
- Öte yandan, aureus dışındaki diğer Staphylococcus türlerinin de mannitolü fermente edebildiği dikkate alınmalıdır. Bu nedenle, koloniyi oradan almak ve koagülaz testini gerçekleştirmek için bir besleyici et suyuna alt kültürlemek önemlidir.
Manitolü fermente eden insanlar için klinik önemi olan Staphylococcus türleri arasında şunlar yer alır: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum ve diğerleri.
Diğerleri değişken bir tepki verebilir, yani bazen olumlu ve bazen olumsuz. Bazıları S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius ve diğerleri.
-Koagülaz testi yapmak için koloni doğrudan mannitol agardan alınması tavsiye edilmez, çünkü besiyerindeki yüksek tuz konsantrasyonu sonucu etkileyebilir.
-Son olarak, tuzlu mannitol ekilmiş plakları 48 saate kadar inkübe etmeniz önerilir, çünkü bazı S. aureus suşları mannitolü yavaşça fermente edebilir, ancak bu çok sık değildir.
Referanslar
- Britannia Laboratuvarları. Tuzlu mannitol agar. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
- "Tuzlu mannitol agar". Vikipedi, bedava ansiklopedi. 31 Ekim 2018, 19:08 UTC. 17 Ocak 2019, 20:55, şu adresten ulaşılabilir: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
- BD Laboratuvarları. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com.