KANLI AGAR: GEREKÇE, KULLANIMLAR VE HAZIRLIK - BIYOLOJI - 2025

Kan agar katı bir kültür ortamı diferansiyel fakat seçici olmayan zenginleştirilmiş. Klinik örneklerden veya alt kültürlerden çok çeşitli mikroorganizmaların geri kazanılması ve büyümesi için kullanılır.

Laboratuvarda alınan klinik örneklerin çoğunun tohumlanması için klasik kanlı agar dahil edilmelidir; belirli modifikasyonlarla hazırlanmadıkça yararlı olmadığı dışkı örnekleri hariç.

Kanlı agar plakası

Bu kültür ortamı temel olarak zenginleştirilmiş bir baz agar ve% 5 kandan oluşur. Agar bazı ihtiyaçlara göre değişebilir, ancak esas olarak diğerleri arasında peptonlar, amino asitler, vitaminler, et ekstresi, sodyum klorür, agardan oluşacaktır.

Kana gelince, normalde koyun, tavşan veya at gibi hayvanlardan kan almak için bir vivaryumla temas kurmak gerekir. Ancak bu her zaman mümkün değildir ve bazen insan kanı kullanılır.

Kanlı agar besiyeri laboratuvarda hazırlanabilir veya özel şirketlerden hazır olarak satın alınabilir. Bu besiyerinin hazırlanması en hassas olanlardan biridir, hazırlanmasındaki herhangi bir dikkatsizlik kontamine bir parti ile sonuçlanacaktır.

Bu nedenle tüm olası önlemler alınmalı ve sonunda hazırlanan her 100 için 37 ° C'de 1 plakta inkübe edilerek kalite kontrol yapılmalıdır.

temel

Staphylococcus aureus kanlı agarda kültürlenmiştir. Nathan Reading Flickr'da Nathan R., Twitter'da, Wikimedia Commons Kanlı agarın zenginleştirilmiş, farklı ve seçici olmayan bir ortam olma özelliğine sahip olduğu daha önce belirtilmişti. Bu özelliklerin her birinin temeli aşağıda açıklanmıştır.

Kanlı agar, ana katkı maddesi olarak agar bazında% 5-10 kan içerdiğinden zenginleştirilmiş bir besiyeridir. Her iki bileşik de birçok besin maddesi içerir ve bu özellik, yetiştirilebilir bakterilerin çoğunun içinde büyümesine izin verir.

Bu büyüme kısıtlama olmaksızın gerçekleşir; bu nedenle seçici değildir. Bununla birlikte, bu ortama bazı mikroorganizmaların büyümesini engelleyen ve diğerlerininkini destekleyen bileşikler eklenirse, seçici hale gelir. Bu, belirli tipte antibiyotik veya antifungal eklenmesi durumunda geçerlidir.

Aynı şekilde, kanlı agar da diferansiyel bir besiyeridir, çünkü 3 tip bakteri ayırt etmeye izin verir: beta-hemolitik, alfa-hemolitik ve gama-hemolitik.

Beta-hemolitikler, kırmızı kan hücrelerini tamamen parçalama veya parçalama kabiliyetine sahip olan, kolonilerin etrafında berrak bir halo oluşturan, bu nedenle ß veya ß-hemoliz üretirler ve mikroorganizmalara ß-hemolitik denir.

Ss-hemolitik bakteri örnekleri Streptococcus pyogenes ve Streptococcus agalactiae'dir.

Alfa-hemolitikler, hemoglobinin methemoglobine oksitlendiği ve kolonilerin etrafında yeşilimsi bir renk oluşturduğu kısmi hemoliz gerçekleştirenlerdir. Bu fenomen α veya α -hemoliz olarak bilinir ve bakteriler α - hemolitik olarak sınıflandırılır.

A-hemolitik bakteri örnekleri, viridans grubundan Streptococcus pneumoniae ve Streptococcus'tur.

Son olarak, sözde gama hemolitik veya hemolitik olmayan bakteriler vardır. Bunlar, changes -hemoliz olarak bilinen bir etki olan, üzerinde değişiklik oluşturmadan agar üzerinde büyür ve mikroorganizmalar γ-hemolitiktir.

Γ-hemolitik bakteri örnekleri: D grubu Streptococcus'un (Streptococcus bovis ve Enterococcus faecalis) bazı suşları.

Uygulamalar

Kanlı agar kültür ortamı, mikrobiyoloji laboratuvarında en sık kullanılanlardan biridir.

Kanlı agar ortamında üreyebilen mikroorganizmalar arasında şunlar vardır: katı aerobik, fakültatif, mikroaerofilik, anaerobik, Gram pozitif veya Gram negatif bakteriler, hızlı büyüyen veya yavaş büyüyen bakteriler.

Mantar ve mayaların yanı sıra beslenme açısından zorlayıcı veya titiz bazı bakteriler de büyür. Aynı şekilde, metabolik olarak çok zayıf olan suşların alt kültürlenmesi veya yeniden etkinleştirilmesi için faydalıdır.

Bununla birlikte, kan grubu ve baz agar seçimi, iyileştiğinden şüphelenilen olası mikroorganizmaya ve plağın kullanılacağı kullanıma (kültür veya antibiyogram) bağlı olarak değişecektir.

Kan grubu seçimi

Kan kuzu, tavşan, at veya insan olabilir.

Bazı istisnalar dışında en çok tavsiye edilen kuzu kanıdır. Örneğin, kuzu kanı faktör V'yi inhibe eden enzimler içerdiğinden, önerilen kanın at veya tavşan kanı olduğu Haemophilus türlerini izole etmek için.

En az önerilen insan, ancak en çok kullanılanı, belki de elde edilmesi en kolay olanı olduğu için.

Kan defibrine edilmeli, herhangi bir katkı maddesi kullanılmadan ve sağlıklı hayvanlardan elde edilmelidir. İnsan kanı kullanımı için birkaç faktör dikkate alınmalıdır:

Kan, bakteriyel enfeksiyon geçiren bireylerden geliyorsa, spesifik antikorları olacaktır. Bu koşullar altında, bazı bakterilerin büyümesi engellenebilir.

Kan bankasından elde edilirse sitrat içerir ve varlığında bazı bakteriler gelişmeyebilir. Öte yandan, kan antibiyotik alan hastalardan gelirse, duyarlı bakterilerin büyümesi engellenebilir.

Ve eğer kan diyabetik bir kişiden geliyorsa, aşırı glikoz, hemoliz modellerinin düzgün gelişimini engeller.

Baz agar tipi seçimi

Kanlı agar hazırlanmasında kullanılan baz agar çok geniş olabilir. Bunlar arasında: besleyici agar, beyin kalp infüzyon agarı, triptikaz soya agarı, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, vb.

Hazırlanmasında kullanılan baz besiyerine göre kanlı agar kullanımı

Besleyici agar

Bu baz, diğerlerinin yanı sıra enterik basil, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp gibi talep etmeyen bakterileri büyüteceğinden en az kullanılanıdır. Streptococcus'un izole edilmesi tavsiye edilmez.

Beyin Kalp İnfüzyon Agarı (BHI)

Streptococcus türleri ve diğer zorlu bakteriler de dahil olmak üzere çoğu bakterinin büyümesi için gerekli besinleri içerdiğinden, kanlı agar için bir baz olarak en yaygın kullanılanlardan biridir. Hemoliz paternlerini gözlemlemek uygun olmasa da.

Kuzu kanı genellikle bu bazla birlikte kullanılır.

Belirli mikroorganizmaları izole etmek için başka bileşiklerin eklendiği kanlı agar varyantları da hazırlanabilir. Örneğin, tavşan kanı, sistin ve glikoz ile desteklenmiş Brain Heart Infusion Agar, Francisella tularensis'i izole etmek için kullanılabilir.

Sistin tellürit ile Corynebacterium diphteriae'nin izolasyonu için faydalıdır. İnsan veya kuzu kanı kullanılabilir.

İlk beta-hemoliz ile dar bir hale olarak görülecektir, ikincisinde ise çok daha geniş olacaktır.

Benzer şekilde, bu baz, basitrasin, mısır nişastası, at kanı ve diğer zenginleştirme takviyeleri (IsoVitaleX) ile birlikte, Haemophilus sp cinsinin solunum örneklerinden izolasyonu için kullanılır.

Ayrıca, antibiyotiklerin kloramfenikol - gentamisin veya penisilin - streptomisin ile at kanı kombinasyonu eklenirse, Sabouraud glikoz agarından daha yüksek bir verimle bile zorlu patojenik mantarların izolasyonu için idealdir. Özellikle Histoplasma capsulatum izolasyonunda faydalıdır.

Triptikaz soya agarı

Bu baz, hemoliz modelinin daha iyi gözlemlenmesi ve optokuin taksonları ve basitrasin gibi tanısal testlerin gerçekleştirilmesi için en çok tavsiye edilir. Rutin olarak kullanılan klasik kanlı agardır.

Bu bazla, ayrıca sistin tellürit ve kuzu kanı ile Corynebacterium diphteriae için özel kanlı agar hazırlayabilirsiniz .

Aynı şekilde, bu agarın kuzu kanı artı kanamisin-vankomisin ile kombinasyonu, anaerobların, özellikle Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Kanla takviye edilmiş bu baz, Streptococcus sp. Gibi güç üreyen mikroorganizmaların antibiyogramını gerçekleştirmek için kullanılır.

Legionella pneumophila gibi bakterilerin izolasyonu için de faydalıdır.

Thayer Martin Agar

Bu besiyeri, Neisseria cinsinden, özellikle Neisseria meningitidis'ten şüphelenildiğinde kanlı agar için bir baz olarak idealdir, çünkü N. gonorrhoeae kanlı agar üzerinde gelişmez.

Ayrıca Neisseria meningitidis'e duyarlılığı test etmek için de kullanılır.

Columbia agar

Bu baz, Helicobacter pylori için mide biyopsi örneklerini tohumlamak için mükemmeldir.

Ortam, mevcut olabilecek diğer bakteri türlerinin büyümesini sınırlandırmak için antibiyotiklerle (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B ve sefsulodin) defibrine edilmiş% 7 kuzu kanı eklenerek hazırlanır.

İnsan veya kuzu kanı, nalidiksik asit ve kolistin ile takviye edilen aynı baz, Gardnerella vaginalis'in izole edilmesi için faydalıdır. Aynı mikroorganizmanın antibiyotiklerine karşı antimikrobiyal duyarlılığı değerlendirmek için de idealdir.

Ek olarak, anaerobların kültivasyonu için kanlı agar hazırlanmasında, aminoglikozidler ve vankomisin eklenmesinde kullanılır.

Bu taban, hemoliz modellerinin uygun şekilde gözlemlenmesine izin verir.

Brucella agar

K vitamini ilavesiyle birlikte kanlı agar için bir baz olarak kullanılan bu besiyeri, anaerobik bakterilerin kültivasyonu için idealdir. Bu durumda kuzu kanının kullanılması tavsiye edilir.

Campylobacter agar

Dışkı örneklerinde Campylobacter jejuni'yi izole etmek için% 5 koyun kanı ve 5 antibiyotik (sefalotin, amfoterisin B, trimetoprim, polimiksin B ve vankomisin) ile desteklenen Campylobacter agar kullanılır.

Hazırlık

Her ticari ev, konteynerin arkasına bir litre kültür ortamı hazırlama talimatlarını getirir. Seçilen baz agara bağlı olarak istenen miktarı hazırlamak için ilgili hesaplamalar yapılabilir.

Tartın ve çözün

Baz agar susuz kalmıştır (toz), bu nedenle pH 7,3'e ayarlanmış damıtılmış suda çözülmelidir.

Seçilen baz agar tarafından belirtilen miktar tartılır ve bir şişedeki karşılık gelen su miktarı içinde çözülür, daha sonra orta ısıda ısıtılır ve tüm toz çözülene kadar döner hareketlerle karıştırılır.

Sterilizasyon

Çözüldükten sonra otoklavda 121 ° C'de 20 dakika sterilize edin.

Kan kümeleşmesi

Otoklavdan çıkarken, balonun, sıcaklık 40 ila 50 ° C arasında değişene kadar soğumasına izin verilir; İnsan derisinin desteklediği ve aynı zamanda agarın henüz katılaşmadığı bir sıcaklıktır.

Bunu yapmak için, şişeye el ile dokunulur ve eğer ısı tolere edilebiliyorsa, karşılık gelen miktarda defibrine kan (her litre agar için 50 ml) eklemek için ideal sıcaklıktır. Homojenleştirmek için yavaşça karıştırın.

Kan kümelenmesinin geçişi çok önemlidir, çünkü besiyeri çok sıcak olduğunda yapılırsa kırmızı kan hücreleri parçalanır ve besiyeri hemolizi gözlemlemek için kullanılmaz.

Çok soğuk eklenirse, topaklanacak ve besiyerinin yüzeyi düzgün çizilmeye izin vermek için pürüzsüz olmayacaktır.

Petri kaplarına dökün

Kanı homojenize ettikten hemen sonra steril Petri kaplarında servis yapın. Her Petri kabına yaklaşık 20 ml dökülür. Bu prosedür, bir laminer akış davlumbazında veya brülörün yakınında yapılır.

Petri kaplarında kanlı agar servis ederken, plak yüzeyinde hava kabarcığı kalmamalıdır. Böyle bir durumda Bunsen brülörünün alevi, bunları ortadan kaldırmak için hızlı bir şekilde plakanın üzerinden geçirilir.

Plakalar katılaşmaya bırakılır ve kullanılıncaya kadar ters çevrilmiş bir buzdolabında (2-8 ° C) saklanır. Kanlı agar plakalarını kullanmadan önce, tohumlanabilmeleri için temperlenmeleri (oda sıcaklığına ulaşmalarına izin verilmelidir).

Hazırlanan tabaklar yaklaşık 1 hafta dayanır.

Referanslar

1. Bayona M. Helicobacter pylori kültürü için mikrobiyolojik koşullar. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. Garcia P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Hizmeti.
3. "Kanlı agar." Vikipedi, bedava ansiklopedi. 10 Aralık 2018, 14:55 UTC. 27 Ara 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Arjantin. Editoryal Panamericana SA
5. CEDIVET Laboratuvarı Veteriner Teşhis Merkezi. Guatemala. Şu adreste bulunabilir: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. (5. baskı). Arjantin, Editoryal Panamericana SA