Bizmut sülfit ağar özel Salmonella diğer türler arasında, Salmonella enterica alt türleri enterica serotip typhimurium izolasyonu için formüle edilen bir katı ortam seçici ve diferansiyel kültürüdür. Besiyeri, İngilizce Bismuth Sulfite Agar'daki kısaltması nedeniyle BSA agar olarak bilinir.
Bizmut sülfit agar için orijinal formül 1927'de Wilson ve Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium) tarafından oluşturuldu; sodyum sülfit, glikoz, bizmut çözeltisi, amonyum sitrat, demir sülfat ve agar-agar içeriyordu.
Bizmut sülfit agar üzerinde Salmonella sp'nin 48 saatlik inkübasyonunun gelişimi. Kaynak: Pixnio.com Yazar: Dr. WR Erving, USCDCP
Bugün, orijinal besiyerinde et ekstresi, et ve kazein peptonları, bizmut sülfit indikatörü, glikoz, disodyum fosfat, demir sülfat, parlak yeşil ve agar-agardan oluşan bir modifikasyon var.
Salmonella türlerinin izolasyonu için pek çok yol vardır, ancak Typhi serotipinin geri kazanılması söz konusu olduğunda, bizmut sülfit agar bunlara göre dikkate değer bir avantaja sahiptir, çünkü çoğu durumda bu mikroorganizmanın geri kazanımı çok düşüktür veya hiç elde edilmez. .
Bununla birlikte, enteropatojenleri izole etmeye çalışırken birden fazla ortam türü kullanmak gereklidir, çünkü bizmut sülfit agar, diğer Salmonella türleri ve inhibe edilen veya çok zayıf gelişen Shigella cinsi için daha az etkilidir. bu agarda.
Tüm Salmonella türleri arasında Typhi serotipinin insanlardaki en önemli enteropatojenlerden biri olduğu ve bunun tek rezervuarı olduğu unutulmamalıdır. Bu serovar tifo ateşine, gastroenterite, bakteriyemiye ve septisemiye neden olur.
Bu nedenle, varlığından şüphelenilen su, dışkı veya gıda numunelerini analiz ederken bu agarı dahil etmek önemlidir.
temel
Çoğu kültür besiyerinde olduğu gibi, Bismuth Sulfite Agar da peptonlar ve et özütü gibi bakteri gelişimini destekleyen besinler içerir. Aynı şekilde glikoz, enerji ve karbon kaynağı olarak işlev görür.
Ancak, Bismuth Sulfite Agar seçici bir besiyeri olduğundan tüm bakteriler bu besiyerinde üremeyecektir. Gram pozitif mikroorganizmaların ve belirli Gram negatif bakterilerin büyümesini engelleyen bileşikler içerir. Bu bileşikler şunlardır: indikatör bizmut sülfit ve parlak yeşil.
Disodyum fosfat, ortamın ozmolaritesini ve pH'ını korur.
Buna ek olarak, bizmut sülfit ağar, H oluşumu gösterir demir sülfat, varlığına bağlı olarak diferansiyel bir ortam sayesinde 2 S. H 2 demir sülfat ve formlarda açıkça görülebilir bir çözünmeyen siyah tortu ile bakteri tepki verir oluşturduğu S.
Son olarak, agar-agar ortama katı kıvamı sağlar.
Hazırlık
52,3 g susuz ortam tartılır ve bir litre suda çözülür. Karışımı, tamamen çözülene kadar sık sık karıştırarak 1 dakika kaynatın. Çok fazla ısıtmayın. Bu ortam otoklavlanamaz çünkü aşırı ısı kültür ortamına zarar verir.
45 ° C'ye soğumaya bırakın ve steril Petri kaplarına servis yapmadan önce sallayın. İyi kalınlıkta plakalar yapılması tavsiye edilir. Bunu yapmak için her plakaya 25 ml dökülmelidir. Katılaşalım. Sterilize edilmemiş bir besiyeri olduğu için hemen kullanımının önerilmesi normaldir.
Bununla birlikte, 1977'de D'aoust tarafından yapılan bir çalışma, bizmut sülfit agar orta yaşlarda Salmonella typhimurium ve Salmonella enteritidis'in daha iyi bir şekilde geri kazanıldığını ve serovar Typhi ve Paratyphi B'nin performansını etkilemediğini gösterdi.
D'aoust, orta yaşlandıkça seçiciliğin azaldığı ve Proteus vulgaris suşlarının daha kolay geliştiği konusunda uyarmakla birlikte, plakaların soğutmanın 4. gününde kullanılmasını önerir.
Bu nedenle, dışkı gibi yüksek derecede kontamine olmuş örnekler için, taze hazırlanmış besiyerinin kullanılması tercih edilir. Aksi takdirde hazırlığının 4. gününde kullanın. Diğer yazarlar, plakaları hazırlandıktan sonraki gün buzdolabında saklanmasını önermektedir.
Soğutulmuş tabaklar kullanılmadan önce temperlenmelidir. Ortamın pH'ı 7,5 ± 0,2 olmalıdır. Ham besiyeri bejdir ve hazırlanan besiyeri yeşilimsi gri opalesanttır.
Uygulamalar
Bu besiyerine ekilebilecek örnekler arasında dışkı, içme veya atık su ve gıda örnekleri bulunmaktadır.
İzolatları iyileştirmek için, bizmut sülfit agar üzerine tohumlamadan önce laktoz çorbası ile ve tetratiyonat çorbası veya sistin selenit çorbası ile zenginleştirmeden sonra bir ön zenginleştirme işleminin yapılması önerilir.
Plakalar aerobiosis içinde 35 ° C ± 0.2'de 24 ila 48 saat süreyle inkübe edilir.
Bizmut sülfit agarda kolonilerin özellikleri
Salmonella Typhi kolonileri tipik olarak bu agarda 24 saat içinde siyah bir merkezle ve parlak yeşil bir hale ile çevrelenerek görülür. Oysa 48 saat içinde hidrojen sülfür oluşumu nedeniyle tamamen kararır.
-Bu besiyeri, Shigella cinsinin çoğu türünü inhibe eder.
- S. Typhi ve S. arizonae çok benzer koloniler verebilir.
-Proteus ve Citrobacter gibi H 2 S üreten koliformlar , Salmonella'dakilere benzer koloniler üretir, bu nedenle biyokimyasal tanımlama testlerinin yapılması gerekir.
- İzole koloniler elde etmek için iyi bir şeritleme yapılmalıdır; Salmonella cinsi kolonilerin tipik özelliklerini gözlemlemenin tek yolu budur.
QA
Sterilite kontrolü için, aşılanmamış bir plaka 37 ° C'de inkübe edilir, üreme veya renk değişikliği olmaması beklenir.
Kalite kontrol için, aşağıdaki gibi bilinen suşlar:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli ve Shigella flexneri'nin sırasıyla yeşilimsi kahverengi ve kahverengi koloniler geliştirerek kısmen inhibe edilmesi beklenmektedir. Oysa her iki salmonella da metalik parlaklığa sahip siyah kolonilerle mükemmel bir gelişime sahip olmalı ve son olarak Enterococcus faecalis tamamen inhibe edilmelidir.
Referanslar
- Wilson, W. ve EM McV. Blair. B. typhosus ve B. proteus'un İzolasyonu için Glikoz Bizmut Sülfit Demir Ortamının Kullanımı. Hijyen Dergisi, 1927; 26 (4), 374-391. .Jstor.org'dan alındı
- D'aoust JY. Bizmut sülfit agar performansının saklama koşullarının etkisi. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Mevcut: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratuvarları. WILSON-BLAIR'e göre bizmut-sülfit agar. 2009. Bulunduğu yer: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratuvarları. Bizmut Sülfit Agar. 2017. himedialabs.com adresinden ulaşılabilir
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G ve Ybarra M. Miravalles, Puebla'da Üretilen Çiğ Keçi Sütünün Bakteriyolojik Kalitesi. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54