TCBS ağar , bu tür büyük patojenler olarak cinsi Vibrio, özellikle Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus ve V vulnificus bakterilerin izolasyonu ve yetiştirilmesi için kullanılan son derece seçici ve ayırıcı bir katı kültür aracı vardır.
TCBS kısaltması, Tiyosülfat Sitrat Safra Sükroz anlamına gelir. Bu agar, Vibrios için seçici bir besiyeri olarak da bilinir. Orijinal formül Nakanishi tarafından oluşturulmuş ve daha sonra Kobayashi tarafından değiştirilmiştir.
Ticari TCBS besiyeri ve TCBS agar plakası Vibrio cholerae ile tohumlanmıştır. Kaynak: fotoğraf 1: MSc yazarı tarafından çekilmiştir. Marielsa Gil / Fotoğraf 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Hindistan
Maya özütü, et peptonu, triptein, sodyum sitrat, sodyum tiyosülfat, öküz safra, sukroz, sodyum klorür, ferrik sitrat, bromotimol mavisi, timol mavisi ve agardan oluşur.
Bu bileşim su, yiyecek ve dışkı örneklerinden Vibrio türlerinin yeterli gelişimine izin verir; bu besiyerinde büyümeyen Vibrio hollisae hariç. Ayrıca, TCBS ortamı diğer eşlik eden bakterilerin, özellikle koliformların büyümesini inhibe edebilir.
Vibrio cinsinin bazı türlerinin ürettiği ciddi gastrointestinal ve ekstra intestinal problemler nedeniyle teşhisi çok önemlidir. İnsanlar esas olarak denizden veya kirli sulardan çiğ veya az pişmiş yiyecekler yiyerek ve ayrıca yara enfeksiyonu yoluyla enfekte olur.
Bu nedenle, klinik laboratuvarlar, sıvı dışkı örneklerinin dışkı kültürü çalışmasında, özellikle pirinç suyu görünümünde TCBS agar içermelidir. Özellikle hasta deniz suyu ile temas ettiğini veya kabuklu deniz ürünleri veya balık tükettiğini bildirirse.
temel
Maya özütü, et peptonları ve triptein, bu besiyerinin besin kaynağıdır. Bununla birlikte, TCBS agar, çoğu bakteri için uygun olmayan bir besiyeridir.
Yüksek seçiciliği sodyum sitrat ve öküz safra ilavesiyle verilir; her ikisi de ortama alkali pH sağlayan, eşlik eden floranın büyümesini sınırlayan ve diğer türlerin yanı sıra V. cholerae'nin büyümesini destekleyen inhibitör ajanlardır. Vibrio cholerae'nin asitliğe çok duyarlı olduğu unutulmamalıdır.
Sodyum klorür ise ortamı ozmotik olarak dengeler. Ayrıca, konsantrasyonu yüksek olduğu için, halofilik bakterilerin büyümesini destekleyen bir inhibe edici ajan olarak da görev yapar.
Sükroz, bromotimol mavisi ve timol mavisi pH göstergeleri ile birlikte ortama farklı karakterini veren fermente edilebilir şekerdir. Bu nedenle, bu ortam ile sükroz fermente eden suşları fermente olmayanlardan ayırt etmek mümkündür.
Sükroz fermente eden suşların kolonileri sarı renkte gelişir ve asit üretimi nedeniyle besiyerini yeşilden sarıya çevirir. Fermentasyon yapmayanlar yarı saydam büyür ve ortam orijinal renk (yeşil) olarak kalır.
Benzer şekilde, bu ortam, bir kükürt kaynağı olarak sodyum tiyosülfat ve geliştirici bir madde olarak ferrik sitrat içerir. Her ikisi de hidrojen sülfit (renksiz gaz) üretebilen bakterileri gösterir. H 2 S tiosülfat oluşturulur ve daha sonra demir sitrat ile bir görünür siyah çökelti oluşur reaksiyona girme üzerine edilir.
Son olarak, besiyerine katı kıvamı sağlayan agar'dır.
Hazırlık
89 g susuz ortam tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Isıtarak ve sık sık karıştırarak çözünmesine yardımcı olun. Karışım 2 dakikaya kadar kaynatılabilir.
Bu besiyeri otoklavlanmamıştır. Çözüldükten sonra doğrudan steril tabaklara servis edilir. Katılaştıklarında, trombositler üzerinde ters bir şekilde dizilirler ve kullanıma kadar buzdolabında (2-8 ° C) saklanırlar.
Hazırlandıktan sonra besiyeri pH 8.6 ± 0.2'de kalmalıdır.
Susuz ortamın rengi açık bej veya yeşilimsi bejdir ve besiyerinin rengi orman yeşili veya mavimsi yeşildir.
Numuneleri tohumlamadan önce plakaların ısınmasına izin vermek önemlidir.
kullanım
Vibrios izolasyonu için en yaygın örnek ishalli dışkıdır.
Dışkı örnekleri, seçici besiyerine hemen tohumlanamazlarsa, Cary Blair besiyerinde taşınmalıdır.
Kültürün duyarlılığını arttırmak için, dışkı, bir zenginleştirme ortamı olarak pH 8.4'te pepton suyundan maksimum 8 saat boyunca geçirilebilir, buradan TCBS ortamına alt kültürlenir.
Bazı Vibrios suşlarının bağışıklığı baskılanmış hastalarda septisemiye neden olabileceği ve bu nedenle kan kültürlerinden izole edilebileceği de dikkate alınmalıdır. Aynı şekilde, salgın kolera hastalığı salgınları olduğunda denizden su ve yiyecek örnekleri de analiz edilebilir.
ekilen
Çalışma örneğinin aşı belirgin olmalıdır, ekim şeritleme yöntemi ile tükenerek yapılır. Plakalar aerobiosis içinde 37 ° C'de 24 saat inkübe edilir.
Vibrio cholerae'nin varsayımsal kolonileri, sükrozun fermantasyonu nedeniyle orta büyüklükte, pürüzsüz, opak, ince bordürlü ve sarı renklidir.
V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ve bazı V. vulnificus türleri de benzer şekilde büyür. V. parahaemolyticus gibi diğer klinik olarak önemli Vibrios türleri, zeytin yeşili koloniler olarak gelişerek sükrozu fermente etmez.
TCBS agar plakası Vibrio parahaemolyticus ile tohumlanmıştır. Kaynak: isis325 Flickr
Öte yandan, oksidaz (+) olan bazı Aeromonas ve Plesiomonas suşlarının bu besiyerinde büyüyerek klinisyenin kafasını karıştırabilecek sarı koloniler geliştirebileceği akılda tutulmalıdır. Bazı Pseudomonas türleri oksidaz (+) da V. parahaemolyticus gibi yeşil koloniler halinde büyür.
sınırlama
Vibrio cinsi için pozitif olan oksidaz testi, TCBS agardan elde edilen kolonilerden asla yapılmamalıdır, çünkü elde edilen sonuç yanlış negatif olacaktır. Ortadaki bileşikler bu teste güçlü bir şekilde müdahale eder. Bu nedenle kanlı agarda alt kültürlerden yapılmalıdır.
QA
Besiyerinin iyi durumda olduğunu kanıtlamak için bilinen veya sertifikalı kontrol suşlarının ekilmesi ve büyümenin beklenen özellikleri karşılayıp karşılamadığının gözlemlenmesi önerilir.
Bunun için suşları kullanabilirsiniz:
-Vibrio cholerae -– tatmin edici büyüme (sarı koloniler, yarı saydam sınır).
-Vibrio parahaemolyticus --– tatmin edici büyüme (yeşil merkezli ve yarı saydam kenarlı koloni).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tatmin edici büyüme (koloni etrafında aynı renkteki halelere sahip sarı koloniler).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - tam veya kısmi inhibisyon (küçük sarı veya yarı saydam koloniler).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-– kısmi veya toplam inhibisyon (mavi koloniler).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Tamamen inhibe edilmiştir.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Toplam veya kısmi inhibisyon. (Küçük koloniler yeşil merkez yarı saydam sınır).
İnoküle edilmemiş besiyerinin inkübasyonu değiştirilmemelidir.
Referanslar
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. TCBS agar. 2009. f-soria.es adresinden ulaşılabilir
- BD Laboratuvarı. BD. TCBS Agar 2003. Şu adresten ulaşılabilir: bd.com
- Britannia Laboratuvarları. TCBS Orta. 2015. britanialab.com'da bulunabilir
- Acumedia Laboratuvarları. TCBS Agar. 2016. Foodsafety.neogen.com adresinde bulunabilir
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik Tanı. 5. baskı. Editoryal Panamericana SA Arjantin.