THAYER MARTIN AGAR: TEMEL, HAZIRLIK VE KULLANIMLAR - BIYOLOJI - 2025

Thayer Martin agar bu, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae ve izole edilmesi için bir çok besin ve katı seçici ortam olduğu; her ikisi de patojenik veya klinik olarak önemli Neisserias olarak bilinir.

Thayer Martin Agar'ın en önemli özelliklerinden biri, yüksek besin takviyeleri içeriğidir. Bu özellik önemlidir, çünkü Neisserias beslenme açısından çok talepkar mikroorganizmalardır ve bu nedenle ortak medyada büyümezler.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin işletme ortamı. Kaynak Resim 1: Yazar MSc tarafından alınmıştır. Marielsa Gil, resim 2. Pixinio.com bakterileri kolonize edilmiş, değiştirilmiş, Thayer, Martin, agar.

Öte yandan, bu mikroorganizmalar normalde steril olmayan alanlarda bulunduğundan, Neisseria cinsinin gelişimini etkilemeden, eşlik eden floranın büyümesini önlemek için inhibitörlerin eklenmesi gereklidir.

Bu agar, GC baz agar, hemoglobin, ek besin takviyeleri ve bir inhibitör maddeler kompleksinden (antibiyotikler ve antifungaller) oluşur. Ticari evler, eklerin her birini ayrı ayrı satıyor.

Bu besiyerine ekilecek örnek, aranan mikroorganizmaya bağlı olacaktır. Neisseria gonorrhoeae için ideal örnekler vajinal ve üretral sekresyonlardır. Neisseria meningitidis için en çok kullanılan örnekler CSF, faringeal ve nazofaringeal eksüdalardır.

temel

Neisserias, can sıkıcı olarak sınıflandırılan mikroorganizmalardır ve bu nedenle izolasyonları zordur. Bu nedenle, Thayer Martín karmaşık bir ortamdır ve bileşenlerinin her biri aşağıda açıklanan bir işlevi yerine getirir:

GC bazlı agar

GC agar, proteoz pepton, mısır nişastası, sodyum klorür, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat ve agar-agar içerir. Bileşenleri, mikrobiyal gelişim için temel besinleri sağlar, toksik yağ asitlerini nötralize eder, ozmotik dengenin korunmasına yardımcı olur, pH'ı tanımlar ve ortama katı bir tutarlılık sağlar.

Hemoglobin

Hemoglobin, faktör V ve X'i sağlar (sırasıyla nikotinamid adenin dinükleotid NAD ve hemin). Bu nedenle Haemophilus türleri de bu besiyerinde büyür. Hemoglobin ticari olarak dehidre edilmiş formda elde edilebilir veya ortama taze defibrine edilmiş sığır kanı eklenebilir.

Zenginleştirme eki

Öte yandan, baz agarda bulunan besinler Neisseria cinsinin gereksinimleri için yeterli olmadığından, Thayer-Martin ortamına bir zenginleştirme takviyesi de eklenmelidir.

En sık kullanılan zenginleştirme ekine isovitalex denir. Glutamin, adenin, NAD, kokarboksilaz, guanin, ferrik nitrat, p-amino benzoik asit, B12 vitamini, tiamin ve glikoz içerir. Tüm bu bileşikler, patojenik Neisserias'ın düzgün gelişimi için gereklidir.

İnhibitörleri

Oldukça besleyici bir ortam olduğu için, bölgedeki normal floradan mikroorganizmaların büyümesini önleyen ve böylece Neisseria cinsinin izolasyonunu destekleyen inhibitörler kullanılmalıdır.

İnhibitör kompleksi, vankomisin, kolistin ve nistatinden oluşur. Vankomisin, Gram pozitif bakterilerin büyümesini inhibe eder, kolistin, Pseudomonas ve bazı saprofitik Neisserias gibi Gram negatif bakterilerin büyümesini önler ve nistatin, Candida albicans gibi mayalar üzerinde etkilidir.

Ancak, Thayer Martin Agar daha sonra değiştirildi; değişiklikler trimetoprim ilavesi, agar miktarındaki artış ve ekstra glukoz ilavesinden oluşuyordu. Bu değişiklikler, Neisseria gonorrhoeae türlerinin geri kazanılmasını önemli ölçüde iyileştirdi.

Trimetoprimin Proteus cinsinin büyümesini ve bunun sonucu olan kümelenme oluşumunu engellediğine dikkat edilmelidir. Bu anlamda Thayer Martin besiyerine seçici karakter kazandıran antibiyotiklerdir.

Hazırlık

Orijinal Thayer Martin agar

-GC agar

8.2 g kurutulmuş GC ortamını tartın ve 100 ml içinde süspanse edin. Karıştırın ve tamamen çözünmesi için sık sık karıştırarak 1 dakika kaynatın. Karışımı otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

-% 2 hemoglobin

Homojen bir karışım oluşana kadar 2 veya 3 ml sıcak damıtılmış su içinde 2 g kurutulmuş hemoglobini süspanse edin. 100 ml'lik bir hacmi tamamlamak için yavaş yavaş daha fazla su ekleyin. Sterilizasyondan önce süspansiyon homojen olmalıdır.

Otoklavda 15 dakika sterilize edin.

-Zenginleştirme takviyesi

Ticari flakonu aynı ticari şirket tarafından sağlanan seyreltici ile sulandırın. İyice karıştırın. Kullanılacak seyreltici miktarı kit talimatlarında belirtilecektir.

-VCN inhibisyon takviyesi (vankomisin, kolistin, nistatin)

Flakonu ticari şirket tarafından sağlanan seyreltici ile sulandırın. İyice karıştırın. Kullanılacak seyreltici miktarı kit talimatlarında belirtilecektir.

-Hazırlanmış

Her 100 ml GC agar için aşağıdaki işlemleri yapın:

GC agar otoklavdan çıktığında, yaklaşık 50 ° C sıcaklığa soğumasını bekleyin ve 2 ml hazırlanan hemoglobin çözeltisi, 2 ml zenginleştirme takviyesi (izobitaleks veya britaleks) ve 2 ml inhibisyon takviyesi ekleyin. Karıştırın ve steril Petri kaplarında servis yapın.

Kullanana kadar katılaşıp buzdolabında saklayın.

Hazırlanan besiyerinin rengi kiraz kırmızısıdır. Ortamın son pH'ı 7.2 ± 0.2'dir

Değiştirilmiş Thayer Martin agar

8.2 g kurutulmuş GC ortamını tartın ve 100 ml içinde süspanse edin. 1 gr agar-agar ekleyin ve 0,3 gr glikoz ekleyin. Karıştırın ve tamamen çözünmesi için sık sık karıştırarak 1 dakika kaynatın. Karışımı otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Hemoglobin ve zenginleştirme ekini daha önce açıklandığı gibi hazırlayın.

Kullanılan baskılama takviyesi VCNT'dir (vankomisin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-Hazırlanmış

Orijinal Thayer Martin agar için açıklanan şekilde ilerleyin.

kullanım

Örnekler sürme yöntemi ile ekim yapılmadan önce Thayer Martin Agar'ın ısınmasına izin verilmelidir. Yaygın olarak kullanılan örnekler faringeal swablar, nazal swablar, vajinal, üretral ve / veya rektal akıntı ve CSF'dir.

Taze numuneler kullanın ve agar üzerinde güçlü inoküller yapın. Numuneler, doğrudan malzeme boşaltımı ile tohumlanır ve daha sonra yüzeyde tükenme izi bırakılır.

Plakalar, 35-37 inkübe edilir ° C, mikroaerofilik bir kavanoza (% 5 CO içinde 24 ila 48 saat süre ile ₂ ). İnkübasyon süresinin sonunda plaklar küçük, gri ve bazen mukoid görünümlü koloniler açısından incelenir.

Şüpheli koloniler üzerinde Gram ve doğrulayıcı biyokimyasal testler gerçekleştirin.

QA

Aşağıdaki mikrobiyal suşlar, Thayer Martin Agar'ın kalite kontrolü için kullanılabilir.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ve Neisseria meningitidis ATCC 13090; her iki suşta da tatmin edici gelişme beklenmektedir.

Aşağıdaki suşlar da dahil edilmelidir: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ve Candida albicans ATCC 10231. Tümünde, bu besiyerinde tam veya kısmi bir inhibisyon beklenir.

Sınırlamalar

-Kullanılan inhibitörlere dirençli bakterilerin ortamda gelişebileceğini unutmamalıyız.

-Kullanılan vankomisin konsantrasyonuna duyarlı olabilen Neisseria gonorrhoeae türleri vardır. Bu nedenle, izovitaleks takviyeli, ancak inhibitörler içermeyen çikolata agar kullanılması tavsiye edilir.

-Bu besiyerinde büyüyebilen ve patojenik Neisserias'ın, özellikle gonokokların izolasyonuna müdahale edebilen, nistatine dirençli maya türleri vardır.

Referanslar

1. Valtek Tanı Laboratuvarları. Thayer-Martin Agar.2016. Mevcut: com
2. Britannia Laboratuvarları. Thayer Martin Medium Modifiye. 2010. britanialab.com'da bulunabilir
3. Wikipedia'ya katkıda bulunanlar. Thayer-Martin agar. Vikipedi, bedava ansiklopedi. 26 Ekim 2017 16:33 UTC. Şu adresten ulaşılabilir: wikipedia.org 4. Erişim tarihi 28 Şubat 2019.
4. Britannia Laboratuvarları. GC agar. 2010. britanialab.com'da bulunabilir.
5. Laboratuvarlar BBL ™ Güç Üreyen Mikroorganizmalar için Orta Zenginleştirme. 1999. Şurada bulunabilir: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Mikrobiyolojik Tanı. 12 ed. Editoryal Panamericana SA Arjantin.